一种新的茯苓(Poria?cocos)菌株及其液体发酵方法，涉及茯苓液体发酵领域。本发明专利技术提供了一种由中国典型培养物保藏中心保藏的茯苓菌株，保藏号为CCTCC?NO：M?2010361。本发明专利技术还提供了一种茯苓液体发酵的方法，它包括如下步骤：a、制备发酵种子：取保藏号为CCTCC?NO：M?2010361的茯苓菌株接种于种子培养基培养，得茯苓种子；b、发酵：将步骤a得到的种子接种于茯苓液体发酵培养基中进行发酵，得发酵液，即为茯苓发酵产物。该发酵方法可以提高茯苓液体发酵的菌丝体产量或者胞外多糖产量，满足市场对茯苓的需求，为茯苓相关保健食品和药品的开发打下基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药用真菌液体发酵领域，特别是涉及茯苓液体发酵。
技术介绍
茯苓Poria cocos为一种多年生腐生真菌，属于真菌门，担子菌纲，无隔担子菌亚纲，多孔菌目，多孔菌科，多孔菌属。茯苓始载于《神农本草经》，被列为上品。我国早在春秋末期就有应用茯苓的记载，而人工栽培茯苓的历史也已有1500多年。中医学认为茯苓“利水而不伤正，补而不助邪”，能利水渗湿、健脾安神；近代医学研究表明，茯苓的药理作用主要表现在利尿、镇静、抗肿瘤、增强免疫等方面。茯苓以干燥菌核入药，不同部位经加工分别成为白茯苓、赤茯苓、茯神、茯神木及茯苓皮等药材。茯苓药性平和，效用广泛，被誉为“除湿之圣药”、“仙药之上品”，为多种方剂配伍的要药及中成药的重要原料，在常用中药方剂中， 茯苓的配伍率达到70%。目前对茯苓液体发酵已有较多研究。用液体发酵培养及提取分离等新技术取代传统的固体发酵来生产茯苓，可连续地、大规模地进行工业化生产，缩短生产时间，节省大量的木材。李羿等的“茯苓液体发酵条件的研究”(成都中医药大学学报，2005年第观卷第 2期)中报道了一种茯苓液体发酵的方法，其发酵菌株为四川农科所茯苓菌种，最适发酵培养基为葡萄糖30g，酵母浸膏3. 9g，蛋白胨5. lg, K2HPO4 lg, MgSO4. 7H20 0. 5g，水IL ；茯苓液体发酵的最适PH值5. 5，液体菌种的菌龄为2d，液体菌种接种量6%，摇瓶培养时间7d, 菌丝体产量最高为11.88g/L。李羿等的“茯苓的摇瓶补料发酵和发酵罐补料液体发酵”(药物生物技术，2007年第14卷第1期)中报道了一种茯苓液体发酵的方法，其发酵菌株为四川农科所提供的茯苓菌种通过分批补料加入碳源的方式可以提高茯苓液体发酵的水平，菌丝体产量最高为 11. 95g/Lo综上所述，现有的茯苓液体发酵方法的发酵水平仍然不高，不能满足市场对茯苓的需求。中药中含有丰富的纤维素、淀粉、蛋白质、脂类等物质，而药用真菌具有分解纤维素、淀粉、蛋白质、脂类等物质的强大酶系，因此，药用真菌可利用中药基质进行深层发酵。 同时，中药中的某些成分(生物碱、皂苷、黄酮等)可促进或抑制药用真菌的生长及代谢产物的生产。杨海龙等的“中药对药用真菌深层发酵的影响”(食品与发酵工业，2009年35卷 1期)中报道了中药对灵芝、灰树花、黑木耳、冬虫夏草和鸡腿蘑深层发酵水平的影响，不同中药对不同真菌的发酵有不同作用，有的中药具有促进作用，有的中药具有抑制作用，有的中药兼具有促进作用和抑制作用。目前还没有文献报道在培养基中加入中药来提高茯苓液体发酵水平的方法。
技术实现思路
为了进一步提高茯苓发酵水平，本专利技术提供了一种新的茯苓菌株和一种新的茯苓液体发酵的方法。首先，本专利技术提供了一种茯苓菌株，菌株名称为Poria cocos (Schw. )wolf. P6, 它由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO :M2010361o该茯苓菌株于2010 年12月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其简称为CCTCC，保藏编号为CCTCC NO =M 2010361。本专利技术又提供了一种茯苓液体发酵方法，它包括如下步骤a、制备发酵种子取保藏号为CCTCC NO =M 2010361的茯苓菌株接种于种子培养基培养，得茯苓种子；b、发酵将步骤a得到的种子接种于茯苓液体发酵培养基中进行发酵，得发酵液， 即为茯苓发酵产物。步骤a的种子培养基由下述原料制备而成葡萄糖20g/L、酵母浸膏4g/L、蛋白胨 5g/L、K2HPO4 lg/L、MgSO4. 7H20 0. 5g/L 和蒸馏水；步骤 a 的培养温度为 25°C，pH 为 5. 5 ；步骤b所述的茯苓液体发酵培养基是由下述原料制备而成葡萄糖20g/L、酵母浸膏 3. 5g/L、蛋白胨 4. 5g/L,K2HPO4 lg/L,MgSO4 · 7H20 0. 5g/L、蒸馏水和粒径小于 250 μ m 的中药材固体粉末2. 5g/L 20g/L，所述的中药材为薏苡仁、黄芪、金银花、甘草、淡竹叶、桑叶、丹参、灵芝或者枸杞子。上述薏苡仁固体粉末的量优选为2. 5g/L 10g/L，进一步优选为7. 5g/L ；上述甘草的固体粉末的量优选为2. 5g/L 10g/L，进一步优选为5g/L ；上述淡竹叶的固体粉末的量优选为2. 5g/L 15g/L，进一步优选为7. 5g/L ；上述桑叶的固体粉末的量优选为2. 5g/L 10g/L，进一步优选为5g/L ；上述灵芝的固体粉末的量优选为2. 5g/ L 15g/L，进一步优选为7. 5g/L ；上述枸杞子的固体粉末的量优选为2. 5g/L 10g/L，进一步优选为5g/L。步骤b的发酵方法为液体补料发酵，具体步骤如下①将茯苓种子接种到茯苓初始培养基内发酵，所述的初始培养基由下述原料制备而成葡萄糖100g，酵母浸膏8. 75g，蛋白胨11.25g，K2HP04 5g,MgSO4. 7H20 2. 5g，初始pH值 5. 5，蒸馏水4. 05L，发酵温度为^°C，pH值为5. 5，溶氧水平为60% 90% ；②在茯苓液体发酵第48h、60h、7ai和84h时，分别将IOOmL补料培养基或者200mL 补料培养基补入发酵罐中，所述的补料培养基由下述原料制备而成葡萄糖I00g，酵母浸膏8. 75g，蛋白胨11. 25g，蒸馏水600mL ；③发酵至发酵时间为117 U9h，收取发酵液，即得发酵产物。步骤②在48h、60h、7ai和84h时加入的补料培养基依次为100mL、200mL、200mL和 100mL。 本专利技术还提供了一种根据上述方法制备的茯苓发酵产物。本专利技术提供的茯苓菌株具有较好的生产性能和稳定性，本专利技术提供的茯苓液体发酵方法，可以提高茯苓液体发酵的水平，使茯苓的菌丝体干重、胞外多糖含量显著提高，满足市场对茯苓的需求，为茯苓相关保健食品和药品的开发打下基础。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。具体实施例方式1实验材料1. 1菌种茯苓菌株，购买于四川省农科所，保藏号为P0，与李羿等的“茯苓液体发酵条件的研究”(成都中医药大学学报，2005年第观卷第2期)中使用的茯苓菌株相同。1. 2仪器和试剂超净工作台(苏净集团安泰公司)；全温振荡器(哈尔滨东联电子技术开发有限公司)；NBS Bioflo III型发酵罐；离心机Beckman J2-HS;电子天平 Sartorius BP121S。酵母浸膏、蛋白胨为Oxoid产品，葡萄糖、蔗糖、K2HP04、MgSO4 · 7H20、NaN03、KCl和 I^eSO4均采用国产分析纯。1. 3 中药材薏该仁(Coicis Semen)、黄芪(Astragali Radix)、金银花(Lonicerae Flos)、甘草(Glycyrrhizae Radix)、淡竹叶(Lophatheri Folum)、桑叶(Mori Folum), 丹参(Salviae Miltirrrhizae Radix et Rhizoma)、灵芝(Ganoderma)禾口枸杞子(Lycii 本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种茯苓菌株（Ｐｏｒｉａ ｃｏｃｏｓ），其特征在于：它是由中国典型培养物保藏中心保藏的菌株，保藏号为ＣＣＴＣＣ ＮＯ：Ｍ ２０１０３６１。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李羿，钟世红，游元元，李晨，
申请(专利权)人：成都医学院，
类型：发明
国别省市：90
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