高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体及其制备制造技术

本发明专利技术涉及高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其制备，属于生物技术领域。本发明专利技术的杂交瘤细胞株稳定，体外连续培养3个月以上或液氮冻存6个月后，该细胞株仍能稳定分泌抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病GP5蛋白的单克隆抗体；单克隆抗体敏感、特异性强，只对GP5蛋白有抗性，而对GST蛋白无抗性，为进一步建立特异、敏感、快速的PRRS病毒检测方法奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及 一种抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体及其制备，属于生物

技术介绍
用杂交瘤细胞生产单克隆抗体(Monoclonal Antibody, McAb)是近些年来在免疫学和分子生物学领域中显著成就之一。单克隆抗体纯度高、专一性强，较常规的免疫学方法优越，为标准化提供了机会。单克隆抗体以其严格的识别特异性已渗透到科学研究的各个方面，在病原体的抗原分析、结构蛋白功能及其作用机理、疾病诊断的研究等方面得到了广泛的应用。高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome,PRRS)是由PRRS病毒变异株引起的，该病以来势凶猛、发病突然、传播迅速、死亡率高、治愈率低为主要特点，尤其以保育猪、育肥猪的发病率较高，母猪发生流产，给养猪业带来极大的危害和重大的经济损失。目前对猪繁殖与呼吸综合征的检测技术主要有病毒分离、免疫过氧化物单层细胞试验(IPMA)、间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR等方法，但检测所需时间长，成本昂贵。建立一种敏感、特异、快速、经济的检测手段势在必行，而获得特异性单克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一株抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒ＧＰ５蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为ＣＧＭＣＣ　Ｎｏ．４６５１。

【技术特征摘要】
1.一株抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其保藏号为 CGMCC No. 4651。2.权利要求1所述的杂交瘤细胞株制备的单克隆抗体，抗体亚型为IgA型。3.权利要求2所述的单克隆抗体的制备方法，其制备过程如下根据猪高致病性繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中第32-65个氨基酸和第127-200个氨基酸设计两对引物，并在引物中引入12个氨基酸，即SGGRGGSGGRGG，作为连接桥段，采用PCR的方法分别扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中第32-65个氨基酸基因序列及第127-200个氨基酸基因序列，这两段序列利用上述12个氨基酸作为连接桥段， 连接成一个大片段；将上述连接片段产物酶切处理，克隆于携带谷胱甘肽转移酶的原核表达载体pGEX-6p-l中；测序鉴定，用异丙基硫代半乳糖苷对其进行诱导表达，得谷胱甘肽转移酶-GP5融合蛋白；用谷胱甘肽转移酶-GP5融合蛋白免...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯艳红，王美君，赵亚荣，高福，严景华，
申请(专利权)人：北京大北农科技集团股份有限公司，福州大北农生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11