包含钙流入阻滞剂用于抑制细胞生长的组合物制造技术

本发明专利技术的一般特征为用Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂诱导受刺激细胞死亡。本发明专利技术在其各个方面包括给与诱导细胞死亡的组合物，包括给与哺乳动物（例如人）组合物以用于治疗；组合物，例如具有Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂和一种因子的组合物，其中该因子通常刺激待诱导细胞死亡的细胞；组合物试剂盒；例如具有Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂和一种因子的试剂盒，其中该因子通常刺激待诱导细胞死亡的细胞；这类组合物或组合物试剂盒作为抗炎剂和／或抗增生剂的用途；Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂或Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂与因子在用于诱导细胞死亡的药物制备中的用途。本发明专利技术包括诊断患病动物对用Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂或组合物治疗的敏感性以便该治疗可以诱导细胞死亡的方法，其中该组合物包含Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂与通常刺激细胞的因子。本发明专利技术包括筛选作为Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂的潜在化合物的方法。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术描写的特征是用Ca2+流入阻滞剂诱导受刺激细胞死亡，包括治疗增生性疾病的方法。专利技术背景癌治疗的目标在很大程度上是消除或控制癌细胞的生长，同时不损伤正常组织。因此，已经将相当的注意力置于使癌细胞区别于正常细胞的特征的鉴定上，特异性治疗剂导向的目标是这些差异。细胞的有序生长和发育在很大程度上受可溶性分泌配基和受刺激细胞表面上的特异性受体之间相互作用控制(Cell,61:203-12)。并非意外的是，在正常和异常生长刺激之间这些情况的密切关系下，已知大量生长因子及其受体在控制细胞生长中起重要作用，它们是已知的原癌基因，包括neu、EGFR(v-erb-b)、c-fms(CSF-1R)和c-kit。由于生长因子及其受体通常参与肿瘤细胞的形成和/或保持，因此这些分子可以被认为是目的在于抵销或中和它们的刺激活性的特异性治疗的有效靶。c-kit受体是不当表达或突变与大量肿瘤相关的一个实例。c-kit除了通常在骨髓性白血病中表达(Siitonen等，1994)外，也在高比例的小细胞肺癌(Hida等，1994)、雌性生殖道肿瘤(Inoue等，1994)和乳腺癌(Hines等，1995)中发现c-kit。在这些情况中的许多情况下，肿瘤细胞既表达c-kit也表达SLF，导致引起致瘤性的自分泌刺激。并且，在人、小鼠和大鼠来源的肥大细胞瘤中已经鉴定出c-kit中一个普通的显性激活突变(Tsujimura等，1994；Tsujimura等，1995；Kanakura等，1994；kitayama等，1995)。在许多形式的癌中，显性转化癌基因和肿瘤抑制基因功能的丧失密切相连。例如，几个研究已经记载了原发的乳腺癌细胞中生长因子受体的突变、不当表达、超量表达和自分泌刺激(Lupu等，1992；Ethier,1995；LeJeune等，1993)。因此，许多研究人员正采取特异性导向这些分子的创新方法(Kopreski等，1996；Fry等，1995；Levitzki等，1995)。也很清楚，肿瘤抑制基因功能的丧失可能通过形成不再服从细胞死亡生理机制的细胞，促使癌细胞的形成。在乳腺癌中也已经广泛地记载了肿瘤抑制基因功能的丧失(Horak等，1991；Thor等，1992；Wang等，1993；Bargou等，1995；Krajewski等，1995；Lee,1995)。肿瘤抑制基因功能丧失的一个重要结果可能是对常规形式抗癌治疗的抗性(Lu等，1996；Korsmeyer,1995)。目前大量的抗增生剂用于癌的治疗中。对于大多数而言，将其设计为特异性地作用于快速分裂的细胞。然而，由于细胞分裂在机体许多细胞类型中是正常发生的，因此常常观察到对正常组织的毒性，限制了这些药剂的有用性和效力。用相似的方式，异常或过量的细胞激活和增殖是许多炎性状态的特征。例如，自身免疫性疾病代表免疫系统的细胞识别该患者中存在的自身抗原并对其应答的情境。目前的治疗倾向于以非特异性方式减弱免疫细胞的应答，导致可能对感染敏感和其它不想要的结果。变态反应性疾病代表另一种情境，这里不当的激活信号导致显著的发病率。因此在这些和其它情境下，需要对特定生长或激活信号应答的细胞特异性更强的治疗。Ca2+从胞内贮藏所迁移出，然后胞外Ca2+通过贮藏-操作通道(也称为lcrac通道)流入(Hoth等，1992；Hoth等，1993；Penner等，1993)是由许多生长因子、抗原、Fc和G-蛋白连接受体引发的一般信号传递事件。该信号是各种同型磷脂酶C(PLC)激活的结果，导致第二信使IP3和二酰甘油的生成(Rhee,1991)。在包括有丝分裂发生、激活和细胞运动在内的多种细胞过程中涉及这种胞内Ca2+的快速上升随后逐渐下降(Lewis等，1995)。尽管Ca2+流入已经与多种细胞类型中的细胞凋亡或程序性细胞死亡相连，但尚不理解细胞凋亡中Ca2+流入的精确作用(Orrenius等，1992；Nicotera等，1994；Dowd,1995)。已经表明，诸如由Ca2+离子载体诱导的过高的胞内Ca2+浓度在大量试验系统中诱导细胞凋亡(Kizaki等，1989；Tadakuma等，1990)。脾细胞中的细胞凋亡似乎涉及Ca2+依赖性核酸内切酶(Ribeiro等，1993)，而胞内Ca2+的增加已与激活T细胞杂交瘤(Mercep等，1989)和未成熟胸腺细胞(McConkey等，1989)两者的细胞凋亡相连。最近，Takata等(Takata等，1995)指出，在缺乏PLC-γ的情况下，表面IgM介导的B细胞细胞凋亡降低，将该形式的细胞凋亡与Ca2+迁移相连。与这些观察相反，Ca2+的流入似乎保护某些细胞免于细胞凋亡。例如，加入Ca2+离子载体保护IL-3依赖性肥大细胞和细胞系免于去除生长因子介导的细胞凋亡(Rodriguez Tarduchy等，1992)，胞内Ca2+的增加也抑制程序性神经元死亡(Lampeet等，1995)。已经鉴定出既介导对细胞凋亡正作用也介导对其的负作用的某些蛋白。Bcl-2是原型为线虫(C.elegans)ced-9的相关蛋白家族中的一员(Reed,1994)。尽管一类家族成员(包括Bcl-2)保护细胞抵抗细胞凋亡信号，而另一类(包括bax，该家族的一个原细胞凋亡成员)则促进细胞凋亡。已经提出，这两类之间的平衡决定细胞是细胞凋亡性死亡还是存活(Oltvai等，1993)。Bcl-2蛋白的超量表达导致保护抵抗由种类繁多的药剂诱导的细胞凋亡，这些药剂包括辐射、化疗药物、氧化剂和类固醇(Korsmeyer,1995)。然而，其它细胞凋亡信号似乎对Bcl-2不敏感。这些包括由TNF、Fas激活、激活诱导的细胞死亡、WEHI-231细胞的抗IgM处理和超抗原介导的克隆缺失诱导的细胞死亡(Ashwell等，1987；Smith等，1989；Jones等，1990；Sentman等，1991；Brown等，1992；Cuende等，1993；Memon等，1995；Miura等，1995)。在某些情况下，已经证明这些细胞凋亡信号可能被蛋白酶的白介素-1β转化酶(ICE)家族的抑制剂中和，提示这些酶参与细胞凋亡(Enari等，1995；Chinnaiyan等，1996)。已经报道了一种已知的Ca2+流入阻滞剂酮替芬在高浓度下抑制肥大细胞激活和单核细胞的增殖(Gushchin等，1985)。也已经表明，酮替芬可以用来控制神经纤维瘤中的肥大细胞相关症状(Riccardi等，1987；Riccardi等，1993)。也已经表明酮替芬有效地抑制全身性肥大细胞病的症状(Povoa等，1991)。已经表明酮替芬抑制T细胞对抗原的应答，但不抑制对PHA或破伤风类毒素的应答(Kondo等，1994)。已经报道了酮替芬可以抑制促细胞分裂剂刺激的淋巴细胞增殖(Petrasch等，1993)。高浓度的酮替芬也抑制T淋巴细胞有丝分裂和三磷酸腺苷分别刺激的淋巴细胞和U937人单核细胞前体细胞系中的胞内Ca2+增加。然而，在体内实验中，用1mg酮替芬每日两次处理健康志愿者7天，不改变循环淋巴细胞数目或亚群(subset)组合。已经表明另一种Ca2+流入阻滞剂益康唑在1μg/ml下减本文档来自技高网...

【技术保护点】
在有需要的哺乳动物中诱导细胞死亡的方法，其中所述细胞能够被伴随有Ｃａ↑［２＋］流入的因子刺激，该方法包括给与该哺乳动物有效量的Ｃａ↑［２＋］流入阻滞剂和有效量的所述因子。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：SA贝格尔，JL戈姆梅尔曼，
申请(专利权)人：韦尔斯利医院基金会，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]