苏木有效部位群的药物新用途制造技术

本发明专利技术是一种苏木有效部位群的药物新用途，具体是作为抗器官移植排斥反应抑制制剂的应用，本发明专利技术可延长移植心脏的存活时间，减轻排斥反应对器官所致的免疫损伤，毒副作用小，价格低廉，可以作为常规用药。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于苏木有效部位群的一种药物新用途，具体是作为抗器官移植排斥反应免疫抑制剂的应用。
技术介绍
随着医学的发展和免疫学研究的不断深入，人们逐渐认识到免疫系统异常与人类众多疾病的发生均有密切的关系。临床工作中常常需要使用大量的免疫抑制剂，尤其是接受器官移植的病人，需要终生服用。临床开展器官移植已有40余年的历史，在早期因为排斥反应的困扰进展缓慢。自1978年环孢素A在临床上应用之后，使器官移植发生了革命性变化。现在临床常用的免疫抑制剂有4大类①化学合成细胞毒类(抗代谢剂和烷化剂)，主要代表为硫唑嘌呤、霉酚酸酯(MMF)；②抗生素类(微生物产生的制剂)；③肾上腺皮质激素类；④生物制剂类，国内外应用的免疫抑制剂是以环胞素A(CsA)、雷帕霉素、他克莫司(FK506)为代表的生物制剂类药物。这些免疫抑制剂共同的作用特点①大多数药物缺乏选择性和特异性，对正常和异常的免疫反应均有抑制作用，长期应用，除各药特有的毒性外，易降低机体抵抗力而诱发感染及肿瘤发生率增加等。②对初次免疫应答反应抑制作用较强，对再次免疫应答反应抑制作用较弱。而且常规免疫抑制剂的剂量难以控制，剂量小不足以保护移植物不受排斥，剂量大则机体难以耐受，况且有些药物目前仍需进口，价格昂贵，限制了接受器官移植的病人的长期应用。由于我国中草药资源丰富、价格低廉、毒副作用低等特点，国内学者把研究开发新型免疫抑制剂的重点转向了中草药。自70年代末以来，对中药抗免疫排斥作用进行了大量的工作，显示了一定疗效。现主要应用的是雷公藤多甙和冬虫夏草，但都有其不足之处，如雷公滕多甙的毒副作用主要是白细胞减少、血小板减少、男性病人精子减少，少数病人可出现嗜睡、乏力等症状，有些毒副作用还有待于进一步研究。如果作为常规用药，还需进一步研究有效成分的化学结构，并加以提纯、分离。而冬虫夏草主要表现为不同的提取方法，显示出不同的药理作用，因此，应用于临床还需做大量的工作。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种苏木有效部位群的药物新用途—用作抗器官移植排斥反应免疫抑制剂，与现有技术相比，它具有毒副作用小，价格低廉、可以作为常规用药的特点。本专利技术的技术方案本专利技术是将苏木有效部位群用作抗器官移植排斥反应的免疫抑制剂。本专利技术可延长移植心脏的存活时间，减轻排斥反应对器官所致的免疫损伤，毒副作用小，价格低廉，可以作为常规用药。下面是动物实验数据一、实验材料1 实验动物C57BL/6小鼠，雄性，20～25g；BABL/C小鼠，雄性，20～25g；Wistar大鼠，雄性，160～190g；SD大鼠，雄性，250～300g。Wistar大鼠购自于中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心，其余动物购自哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心。实验动物在通风、温度、湿度适宜的动物室内饲养。2 主要仪器2k-828型真空干燥箱，上海医疗仪器总厂；超净工作台，苏州净化设备厂；300型CO2培养箱，Sheldon Manufacturing.IncAllegna 21RCentrifuge离心机，Beckman；SXP-1B型双人双目显微镜，上海光学仪器厂；SSW-3型显微手术器械包，上海医疗仪器厂3 实验用药3.1环胞素A将新山地明(瑞士山德士药厂生产，每粒含CsA25mg)溶于生理盐水，稀释至1mg/ml浓度，4℃保存备用。苏木水提液的制备苏木，购自黑龙江省药材公司，产地云南，经生药鉴定。浸泡1小时后，水煎三次，每次40分钟，煎液混合后水浴(80℃)浓缩成1.75g/ml浓度，4℃保存备用。3.2 苏木有效部位群的制备将苏木粗粉(40目)放入4颈烧杯中，加入75％乙醇浸泡4h，加热至85℃，连续回流提取2h，过滤；反复2次，将滤液合并，一部分抽入旋转蒸发器中水浴蒸干，转入真空干燥箱中烘干至恒重，制成乙醇提取干粉。对剩余的75％乙醇提取物依次用乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，得到各部分萃取物，连同分离出的水层，分别按照前法制成乙酸乙酯、正丁醇和水溶性成分干粉。此外还可以采用下述方法煎煮法将苏木粗粉(过40目)用8倍量的水浸泡4h，连续回流提取两次，每次2h，过滤，将滤液合并，将滤液浓缩至相对密度1.00-1.05，依次用醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到各部分萃取液，，分别回收溶剂制成醋酸乙酯、正丁醇、水溶性成分的干膏。超声振荡提取将苏木粗粉(过40目)用8倍量的75％乙醇浸泡2h，连续超声振荡提取两次，＜50℃每次2h，过滤，将滤液合并，减压回收乙醇，并干燥至恒重，制成75％乙醇提取物。取75％乙醇提取物，水混悬后依次用醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到各部分萃取液，连同剩余的水层，分别回收溶剂制成醋酸乙酯、正丁醇、水溶性成分的干膏。渗漉法将苏木粗粉(过40目)用75％乙醇连续渗漉提取，收集渗漉液，减压回收乙醇，并干燥至恒重，制成75％乙醇提取物。取75％乙醇提取物，水混悬后依次用醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取得到各部分萃取液，连同剩余的水层，分别回收溶剂制成醋酸乙酯、正丁醇、水溶性成分的干膏。超临界萃取法苏木粗粉(过80目)SFE条件萃取罐温度70℃，萃取压力45MP，CO2流量25kg/h，萃取时间2.5h，夹带剂为95％乙醇比例不超过15％。提取物待测。3.3 苏木乙醇提取干粉灌服液的制备将乙醇提取干粉60g加入双蒸水200ml混悬，制成30％的苏木灌服液备用。二、试验方法1 药品的制备乙醇、乙酸乙酯、正丁醇和水溶性成分干粉水溶，浓缩配成每毫升含主药1g。2 混合淋巴细胞反应试验(MLR) 2.1 脾细胞悬液的制备①小鼠放血处死，取脾称重，放入盛有冷的5～10ml HBS平皿中不绣钢网上，剔除脂肪组织和结缔组织。②将脾剪成两段，轻轻碾碎，使单个脾细胞经不锈钢网进入溶液中，再经不锈钢网过滤至离心管。③离心1500r，5分钟后弃上清，低渗处理除去红细胞。④用HBSS液洗涤细胞2～4次，加入10％NBS-RPMI-1640培养液1～2ml，细胞计数及测定细胞的存活率。2.2 MLR实验①刺激淋巴细胞制备C57BL/6小鼠脾细胞做刺激细胞，将淋巴细胞1×106/ml加入丝裂霉素C处理，最终浓度为25μg/ml，于37℃水浴下作用30min，1000r/min离心10min，弃上清，沉淀细胞用Hanks液洗涤3次。用BALB/c小鼠脾细胞做应答细胞，调整细胞浓度为1×106/ml。②将4种药物离心2000rpm，无菌过滤，备用。③将4种药液分别用1640培养液作倍比稀释1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048。④取刺激细胞和反应细胞各50μl加入96孔培养板上，加入100μl含药20％NBS-RPMI-1640培养液中，每组均设3各复孔。另以不含药物的1640培养液作为空白对照组。混合细胞在CO2培养箱中培养72h。⑤收集前4h加入氚标记的胸苷2μCi。⑥反应终溶液收集到纤维滤纸上，干燥后用液体闪烁器记cpm值。3 苏木乙醇提物抗大鼠同种异位心脏移植的模型制备大鼠同种异位心脏移植术，采用Ono氏改良术式，将供心的升主动脉和肺主动脉分别与受体的腹主动脉和下腔静脉行端侧吻合，为移植心脏提供血液循环。虽然供体心脏不具有心脏本身的功能，但由于有充分的血液供应，并能存活一定的时间，可以作为研究急性排斥反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种苏木有效部位群的药物新用途，其特征在于是用作抗器官移植排斥反应的抑制制剂。

【技术特征摘要】
1.一种苏木有效部位群的药物新用途，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚滨，王振月，
申请(专利权)人：周亚滨，王振月，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]