本发明专利技术涉及基因工程领域，具体地，本发明专利技术涉及一种酸性葡聚糖酶CEL7G5及其基因和应用。本发明专利技术提供了一种来源于瓶霉属Phialophora?sp.的葡聚糖酶CEL7G5，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，且本发明专利技术提供了编码上述葡聚糖酶的编码基因Cel7G5。本发明专利技术的葡聚糖酶的具有以下性质：最适pH5.0，最适温度60℃，比活为922.9U/mg良好的蛋白酶抗性，有效的降解对β-葡聚糖和羟甲基纤维素以及易于工业化发酵生产。做为一种新型的酶制剂，可广泛用于饲料，酿酒、食品、能源工业等。
Acid glucan enzyme CEL7G5 and its gene and Application
The invention relates to the field of gene engineering, in particular to an acidic glucan enzyme CEL7G5 and its gene and application. The present invention provides a dextran enzyme CEL7G5 derived from the genus Phialophora sp. of Aspergillus sp., whose amino acid sequence is expressed as SEQ, ID, NO.1, and the present invention provides a coding gene Cel7G5 encoding the above glucan enzyme. The glucanase has the following properties: the optimum pH5.0, optimum temperature of 60 DEG C, the specific activity of the protease resistant 922.9U/mg good, effective degradation of beta glucan and carboxymethyl cellulose and easy industrial fermentation production. As a new enzyme preparation, it can be widely used in feed, wine making, food, energy industry, etc..
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程领域，具体地，本专利技术涉及一种酸性葡聚糖酶CEL7G5及其基因和应用。
技术介绍
纤维素、半纤维素和木质素等是植物细胞壁的主要组成成分。纤维素大约占细胞干重的40 45%，是由葡萄糖通过β-1，4-糖苷键连接而成的线状结构分子。木质素约占细胞干重的15 25%，是一种复杂酚类聚合物。半纤维素约占细胞干重的30 35%， 是继纤维素之后最丰富的可再生生物资源。它由杂聚多糖组成，按主链组成占多数的糖来命名，称之为葡聚糖、葡聚糖、甘露聚糖、和葡甘露聚糖等(Schulze E1891.Ber Dtsch Chem Ges 24,2277-2287.)。其中β -葡聚糖是单子叶禾本科植物细胞壁中的结构性非淀粉多糖，主要存在于糊粉层和胚乳细胞中，如大麦和燕麦胚乳细胞壁含有约70 75%的葡聚糖 (Philippe S et al. 2006. Planta 224(2),449-461.) β -葡聚糖酶是能分解β -糖苷键链成葡萄糖聚合物的一类酶的总称。按作用方式不同，β -葡聚糖酶可分为内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶两类。其中内切β -1，3-1，4-葡聚糖酶(酶学分类号Ε. C. 3. 2. 1.73)可以水解β-1，3-1，4-葡聚糖，专一作用于与β_1， 3键相连的β_1，4糖苷键，使其降解为低分子量片段，失去亲水性和粘性。改变单胃动物肠道内容物的特性，提高内源性消化酶活性，改变肠道微生物环境，利于动物对营养物质的消化和吸收，提高生长性能和饲料的转化率(Mathlouthi N et al. 2002. Amin Res 51， 395-406.)在食品和饲料工业等方面有广阔的应用前景。在啤酒酿造行业具有潜在的应用前景，在啤酒酿造过程中，麦芽中的葡聚糖造成啤酒过滤困难、堵塞过滤膜，增加了啤酒的生产成本和品质，采用酸性葡聚糖酶和葡聚糖酶协同作用，可以解决以上问题。因此，酸性葡聚糖酶的产生、纯化、性质、酸性特征的结构基础及其在饲料加工、酿酒工业、果汁加工、以及能源等领域的应用正在不断深入。由于不同工业对葡聚糖酶性质需求不同，因此，获得新型具有优良特性葡聚糖酶的研究仍具有重大意义。克隆和分离具有高温酸性的葡聚糖酶可以更好的应用于饲料、酿酒，食品工业。本专利技术中的葡聚糖酶在酸性、中性PH下均具有较高酶活力，具有优良的pH 稳定性和热稳定性，并且还具有较高的纤维素酶活性，符合多种工业需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能高效应用的酸性葡聚糖酶葡聚糖酶。本专利技术的再一目的是提供编码上述酸性葡聚糖酶的基因。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。本专利技术的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。本专利技术的另一目的是提供一种制备上述酸性葡聚糖酶的基因工程方法。本专利技术的另一目的提供上述酸性葡聚糖酶的应用。本专利技术从瓶霉(Phialophora sp.)中分离得到一种新的酸性葡聚糖酶CEL7G5。本专利技术提供了一种酸性葡聚糖酶CEL7G5，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。SEQ ID NO. 1 MTAKFTALSALLGLAASQQVGTQQTETHPQMSWSKCSSGGSCTSQNGEVVIDANWRWVHDVGGYTNCY TGNEWNTTICPDDKTCAANCAVDGADYAATYGAPTSGNALTLKFVTKGSYLAPKSATNIGSRLYLMASSSKYQMFT LLGNEFTFDVDVSQLGCGLNGALYFVSMDADGGMSKYPTNKAGAKYGTGYCDSQCPRDLKFINGEANCDNWQPSS NDQNAGVGGYGSCCTEMDVWEANSISTAYTPHPCTTVGQERCTGDSCGGTYSSDRYGGECDPDGCDFNSYRMGVT NFYGPSMTVDTTQKFTVVTQFLTGSDGTLDEIKRFYVQGGQVIPNSNSTISGVTGNSITPDFCKAQKKAFGDGDY FDQKGGFPQFSKALAGEMVLVMSLWDDHYSNMLWLDSVYPTDASASEPGKARGTCATTSGVPADVESSQASDQVV YSNIKFGPIGSTFQEPSS其中，该酶基因编码462个氨基酸，N端17个氨基酸为其预测的信号肽序列 "mtakftalsallglaas" (SEQ ID NO. 3)。因此，成熟的酸性葡聚糖酶CEL7G5的理论分子量为47. 5kDa,其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2 所示QQVGTQQTETHPQMSWSKCSSGGSCTSQNGEVVIDANWRWVHDVGGYTNCYTGNEWNTTICPDDKTCAA NCAVDGADYAATYGAPTSGNALTLKFVTKGSYLAPKSATNIGSRLYLMASSSKYQMFTLLGNEFTFDVDVSQLGCGL NGALYFVSMDADGGMSKYPTNKAGAKYGTGYCDSQCPRDLKFINGEANCDNWQPSSNDQNAGVGGYGSCCTEMDVWE ANSISTAYTPHPCTTVGQERCTCDSCGGTYSSDRYGGECDPDGCDFNSYRMGVTNFYGPSMTVDTTQKFTWTQFLT GSDGTLDEI KRFYVQGGQV IPNSNSTI SGVTGNS ITPDFCKAQKKAF⑶⑶ YFDQKGGFPQFSKALAGEMVLVMSLW DDHYS匪LWLDSVYPTDASASEPGKARGTCATTSGVPADVESSQASDQVVYSNIKFGPIGSTFQEPSS本专利技术的葡聚糖酶CEL7G5同时具有好的pH稳定性，并且常温下在酸性和中性的范围内均具有高活性、抗蛋白酶降解等特性。本专利技术的葡聚糖酶，其最适PH值为5. 0，在 PH2. O 9. O的范围内维持60%以上的酶活性；最适温度为60°C ；用胃蛋白酶和胰蛋白酶处理60分钟，酶活性维持在85%以上。本专利技术提供了编码上述酸性葡聚糖酶Cel7G5。具体地，该基因的基因组序列如SEQ ID NO. 4 所示atgactgccaaattcactgccctttcagcccttctgggccttgccgcttcgcagcaagtgggcacccag caaaccgagacccatccgcagatgtcctggtccaaatgctctagcggaggctcctgcaccagccagaacggcgaggt tgtgatcgacgccaactggcgttgggtccatgacgttggaggctacaccaactgctacaccggcaacgagtggaaca ccaccatctgccccgacgacaagacctgtgctgccaactgtgctgtggacggcgccgactacgcggctacatatggt gccccgaccagcggcaacgccctgaccctcaagttcgtgaccaagggctcgtatttagcgcccaaatcagcgaccaa cattgggtcgcgtctctacctgatggccagctccagcaagtaccagatgttcaccttgctgggcaacgagttcacct tcgatgtcgatgtctcccagctc本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种酸性葡聚糖酶ＣＥＬ７Ｇ５，其特征在于，其氨基酸序列如ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：詹志春，张菁，赵军旗，
申请(专利权)人：武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：83
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