改善治疗功效的新光学纯化合物制造技术

本发明专利技术涉及相对于先前已知复杂的立体异构体混合物而言显示改善抗癌活性的新光学纯化合物。这样的化合物是通式（Ｉ）：其中每个Ｘ独立代表任意氨基酸；ｎ是０或１；ｍ是０至３之间的整数；ｋ是至少为３的整数；Ｐｓｉ是替代Ｌｙｓ和Ｐｒｏ之间的肽酰胺键的通式的还原键；并且其中所述通式（Ｉ）化合物的假肽单元中的Ｌｙｓ残基或者全部是Ｌ构型或者全部是Ｄ构型。还提供了制备这样化合物的方法和其治疗用途。合成方法包括用硼氢化物选择性还原二肽中间体中Ｌｙｓ和Ｐｒｏ之间的肽键。所述治疗用途可以对抗癌症、炎症和用于创伤愈合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改善治疗功效的新光学纯化合物
本专利技术涉及与从前已知的立体异构体的复杂混合物相比显示改善抗癌活性的新光学纯化合物。这样的化合物为通式(I)：[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]k-支持物(I)其中每个X独立代表任意氨基酸；n为0或1；m为0至3之间的整数；k为至少为3的整数；Ψ为替换Lys和Pro之间的肽酰胺键的通式(-CH2N-)的还原键；并且其中所述通式(I)的化合物的[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]假肽(pseudopeptide)单元中的Lys残基或者全部是L构型或者全部是D构型。还提供了用于制备这样的化合物的方法和其治疗用途。
技术介绍
细胞分裂或有丝分裂是允许细胞增殖从而修复或再生组织并替换死细胞的过程。在癌细胞中，这一过程的调节是有缺陷的，这就是为什么这些细胞混乱地分裂并产生肿瘤。因此，一种有效的防止癌症发展的治疗途径由使用具有抗有丝分裂性质的分子阻断癌细胞分裂组成。另外，每种肿瘤需要营养和氧以便生长。这些元素由瘤内血管提供，这源于被称为血管发生的机制。事实上，如果没有这些血管，肿瘤细胞将进行细胞坏死过程，并且肿瘤生长变慢，然后停止。因此另一个抗癌治疗途径的例子由通过阻断控制该机制的分子而阻断血管发生过程组成。因此非常有用的将是拥有可用的能够抑制肿瘤中肿瘤细胞增殖和血管发生过程的新的抗癌分子。另外，大多数现在的抗癌剂对肿瘤细胞不是真正特异性的，因此也靶向健康的细胞，因此产生许多副作用并且有时产生严重的副作用。另外与常规抗癌药物例如紫杉醇(paclitaxel)相关的另一个问题是这些分子通常是高疏水的，这使得需要开发复杂的和昂贵的药物制剂从而获得可接受的体内生物利用度。在使用核酸治疗的情况下体内生物利用度的问题更严重，因为其以有效的和特异性的方式达到其靶向细胞非常难。因此非常有用的是拥有呈现下列特征的新抗癌分子：-其对肿瘤增殖和血管发生的双重抑制作用引起更加改善的效力以至其可以无需使用常规的化学疗法或放射疗法而单独有效，因此极大地限制了与这些类型治疗相关的副作用，-相当广泛的抗血管生成因子的活性谱从而防止对治疗的抗性，-由于针对肿瘤细胞的更大特异性引起的非常小的副作用，-容易适用于工业规模的合成过程，-特别是由于更好的生物利用度和/或更长的体内半衰期，特别是由于对肿瘤细胞直接特异性所引起的更简易的使用，在水性介质中具有好的可溶性以及对体内分解过程具有增强的抗性。WO2007/125210(1)(其全部内容通过参考并入本文)公开了对于癌症治疗特别有用的有前途的化合物。这些化合物显示了几个有利的性质：-由于对肿瘤增殖和血管发生的双重作用，其能够单独具有的高抗肿瘤效力，所述效力使得可以无需与常规化学治疗分子如紫杉醇(taxol)结合而设想单一治疗；-其对特定类型的癌症不具有特异性而是具有对抗肿瘤细胞和激活的内皮细胞的广谱活性；-由于相对于健康细胞的对肿瘤细胞和激活的内皮细胞的特异性，其具有非常小的体内副作用；-其具有可以容易适用于工业规模的合成过程；以及-其具有充分的体内生物利用度从而不需要开发特殊的药物形式。因此这些化合物非常令人感兴趣，因为它们结合了许多对于研发新的、简易的、廉价的和有效的抗癌治疗所必须的优点。还发现它们是研发新的、简易的、廉价的和有效的抗炎剂的良好候选。但是，总是需要改善现有化合物的抗肿瘤效力。因此非常有用的是发现具有较高效力的最佳化化合物但是保留这些有前途的化合物的所有其他优点。WO2007/125210的化合物是由支持物组成的新假肽化合物，所述支持物上偶联了至少三个假肽单元。这样的化合物结合表面核仁素并显示抗癌(抗血管生成和抗有丝分裂)和抗炎活性。据信这些化合物通过至少3个移植在支持物上的假肽单元与表面核仁素的RGG结构域相互作用而起作用。优选的化合物具有肽支持物，特别是具有螺旋结构的线性肽支持物，在所述支持物上偶联了至少3个[Lys-Ψ-Pro-Arg](也称为KΨPR)单元。在这一文献中，使用了常规方法制备KΨPR单元，如US20040002457A1(2)和Nisole等人(3)中描述的。在这一常规方法中含有第二个胺的脯氨酸衍生物与Boc-Lys(Boc)-CHO(醛)反应形成具有Lys残基上部分缺失手性的烯胺(5-10％)。因此，在这一常规反应的结尾，反应混合物含有90-95％L-Lys-Ψ-Pro-Arg单元和5-10％D-Lys-Ψ-Pro-Arg单元。因此，当该混合物用于偶联至支持物肽的Lys残基的侧链的ε氨基上时，获得了立体异构体混合物。因为每个Lys-Ψ-Pro-Arg单元可以具有L或D赖氨酸，获得的立体异构体数目随着KΨPR单元的数目呈指数型增长。对于优选的具有5或6个单元的化合物，可获得的立体异构体的数目分别是32和64。相似地，通过在存在氢化试剂时将Boc-Lys(Boc)-CHO与移植至固体支持物上的脯氨酸残基的次级胺反应直接在树脂上进行还原胺化步骤还引起立体异构体的混合物的产生。使用这一常规方法，获得的假肽化合物不是光学纯的，相反由非常复杂的立体异构体的混合物组成，由于混合物的复杂性其不能被分离或纯化。事实上，混合物由太大数目的非常接近的立体异构体组成，因此不能通过常见的纯化技术分离出每种立体异构体。因此目的化合物的单个立体异构体不能使用制备这些化合物的常规方法从获得的复杂混合物中纯化。专利技术人使用了用于制备KΨP二肽的新方法，其允许获得光学纯的L-Lys-Ψ-Pro或D-Lys-Ψ-Pro化合物。该方法已经从Cushman等人(4)的文章中做出了改变，所述文章描述了当使用常规方法制备Phe-Ψ-Pro二肽时的差相异构效应和用于制备纯的L-Phe-Ψ-Pro二肽的新方法。然后专利技术人制备了由线性支持肽组成的光学纯化合物，在所述支持肽上偶联了至少3个L-Lys-Ψ-Pro-Arg或D-Lys-Ψ-Pro-Arg单元。在这样的光学纯化合物中，各种Lys-Ψ-Pro-Arg单元的赖氨酸残基或者全部是L构型或者全部是D构型。令人惊讶的是，他们发现相对于含有相同化合物的立体异构体混合物的组合物，这些光学纯化合物显示显著更高的抗癌效力。
技术实现思路
因此本专利技术涉及通式(I)的化合物：[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]k-支持物(I)其中-每个X独立代表任意氨基酸；-n是0或1；-m是0至3之间的整数；-k是至少为3的整数；-Ψ是替代Lys和Pro之间的肽酰胺键的通式(-CH2N-)的还原键；并且其中所述通式(I)化合物的[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]假肽单元中的Lys残基或者全部是L构型或者全部是D构型。在本专利技术的上下文中，术语“支持物”是指任何药学上可接受的分子，换句话说没有内源毒性，在其上可以移植至少3个通式(I)的假肽单元。因此可接受的支持物要有足够的大小以允许在其上移植至少3个通式(I)的假肽单元，优选3至8个通式(I)的假肽单元。还优选这样的可接受支持物足够大以便允许至少3个，优选3至8个通式(I)的假肽单元一起在一个或多个核仁素分子的RGG结构域中相互作用。另外，所述支持物必须没有免疫原性。这样的支持物可以特别地选自：线性肽、线性的或环状的类肽(N取代的甘氨酸寡聚物)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通式（Ⅰ）的化合物：　　［（Ｘ）↓［ｎ］－Ｌｙｓ－Ψ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－（Ｘ）↓［ｍ］］↓［ｋ］－支持物（Ⅰ）　　其中　　－每个Ｘ独立代表任意氨基酸；　　－ｎ是０或１；　　－ｍ是０至３之间的整数；　　－ｋ是至少为３的整数；　　－Ψ是替换Ｌｙｓ和Ｐｒｏ之间的肽酰胺键的通式（－ＣＨ↓［２］Ｎ－）的还原键；并且　　其中所述通式（Ⅰ）化合物的［（Ｘ）↓［ｎ］－Ｌｙｓ－Ψ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－（Ｘ）↓［ｍ］］假肽单元中的赖氨酸残基或者全部是Ｌ构型或者全部是Ｄ构型。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种通式(I)的化合物：[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]k-支持物(I)其中-每个X独立代表任意氨基酸；-n是0或1；-m是0至3之间的整数；-k是4至7之间的整数；-Ψ是替换Lys和Pro之间的肽酰胺键的通式(-CH2N-)的还原键；并且其中所述通式(I)化合物的[(X)n-Lys-Ψ-Pro-Arg-(X)m]假肽单元中的赖氨酸残基或者全部是L构型或者全部是D构型。2.根据权利要求1所述的化合物，其中n是0且m是0。3.根据权利要求1所述的化合物，其中k在4至6之间。4.根据权利要求3所述的化合物，其中k是5或6。5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述支持物是含有至少k赖氨酸残基的线性肽。6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述线性肽具有选自下列的序列：Lys-Lys-Lys-Gly-Pro-Lys-Glu-Lys-Gly-Cys(SEQIDNO:1)、Lys-Lys-Lys-Lys-Gly-Cys(SEQIDNO:2)、Lys-Lys-Lys-Lys-Gly-Pro-Lys-Lys-Lys-Lys-Gly-Ala(SEQIDNO:3)、Lys-Lys-Gly-Pro-Lys-Glu-Lys-AhxCONH2(SEQIDNO4)和Ac-Lys-Ala-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Lys-Pro-Gly-Lys-Ala-Lys-Pro-Gly-CONH2(SEQIDNO:5)。7.根据权利要求5所述的化合物，其中所述线性肽显示螺旋结构。8.根据权利要求7所述的化合物，其中所述显示螺旋结构的线性肽含有至少3个序列Aib-Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:6)或Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:7)的单元。9.根据权利要求8所述的化合物，其中所述显示螺旋结构的线性肽含有3至8个序列Aib-Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:6)或Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:7)的单元。10.根据权利要求9所述的化合物，其中所述显示螺旋结构的线性肽含有5或6个序列Aib-Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:6)或Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:7)的单元。11.根据权利要求8所述的化合物，其中所述显示螺旋结构的线性肽由选自下列的序列组成：Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:8)、Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly(SEQIDNO:9)、Ac-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-CONH2(SEQIDNO:10)、Ac-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-CONH2(SEQIDNO:11)、Ac-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-Aib-Lys-Aib-Gly-CONH2(SEQIDNO:12)或Ac-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-Lys-Aib-Gly-CONH2(SEQIDNO:13)。12.根据权利要求1的化合物，其中n是0，m是0，k是5或6，并且所述支持物是含有至少k赖氨酸残基的线性肽。13.根据权利要求12的化合物，其中所述线性肽具有选自以下的序列：Lys-Lys-Lys-Gly-Pro-Lys-Glu-Lys-Gly...

【专利技术属性】
技术研发人员：JP布里昂，G吉沙尔德，J库尔蒂，R齐默，C德万，A朗，H张，
申请(专利权)人：国家科学研究中心，安姆弗拉玛法国公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]