含甲状腺素化合物的分析方法技术

本教导提供了利用同量异位标签和母离子－子离子跃迁监测（ＰＤＩＴＭ）来分析一种或多种样品中的一种或多种甲状腺素化合物的方法。在多种实施方案中，所述方法包括以下步骤：（ａ）利用来自一组同量异位标签的不同同量异位标签来标记一种或多种甲状腺素化合物，每种同量异位标签包含报告物离子部分；（ｂ）合并每种所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的至少一部分以产生合并样品；（ｃ）使所述合并样品的至少一部分经受ＰＤＩＴＭ；（ｄ）测量一种或多种所传输报告物离子的离子信号；以及（ｅ）至少基于相应的报告物离子的所测离子信号与标准化合物的一个或多个所测离子信号的比较，测定一种或多种所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的浓度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请是于2006年2月8日提交的名称为“Amine-containingCompound Analysis Methods”的美国专利申请No.11/350147的部分继续申请，并且本申请要求该申请的权益和优先权，所述美国专利申请No.11/350147要求于2005年2月9日提交的名称为“Amine-containingCompound Analysis Methods”的美国临时申请No.60/651,734的权益和优先权，这两个申请各自的全部公开内容通过引用并入本文中。引言 含胺化合物代表重要的生物学和医药学化学物。含胺化合物的实例包括蛋白质、肽、多胺、氨基酸、儿茶酚胺和硝基呋喃代谢物。用于定量含胺化合物的当前方法包括利用紫外可见(UV)荧光或电化学检测的高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱法联用质谱法(LC/MS)以及串联质谱法(MS/MS)。 通过上述方法进行含胺化合物的绝对定量可能存在问题。例如，为通过HPLC分析多种含胺化合物，在分析之前必须进行困难又耗时的衍生化步骤。此外，HPLC具有分析时间长、运行之间偏差大、缺乏多重能力(multiplexing capability)以及非特异性等缺点。 更近些时候，利用LC/MS和MS/MS进行含胺化合物的检测和定量提供了下述优点灵敏度和特异性增加、以及具有迅速测量一种样品中多种含胺化合物的能力。然而，这些技术缺乏多重分析能力。为进行绝对定量，要将昂贵的同位素富集化合物用作内标物，所述内标物与某些串联质谱方法不相容。
技术实现思路
本教导提供了利用同量异位(isobaric)标记物和母离子-子离子跃迁监测(parent-daughter ion transition monitoring，PDITM)分析一种或多种样品中的一种或多种含胺化合物的方法。在多个方面，本教导提供了测定一种或多种样品中的一种或多种含胺化合物的相对浓度、绝对浓度、或相对浓度和绝对浓度两者的方法。在多个实施方案中，本教导提供了可以多重分析方式测定样品中的多种含胺化合物、或者多种样品中的一种或多种含胺化合物、或者它们的组合的的相对浓度、绝对浓度、或相对浓度和绝对浓度两者的方法。 可应用本教导的多个实施方案的含胺化合物可来自各种来源，例如生理流体样品、细胞或组织裂解物样品、蛋白质样品、细胞培养样品、发酵液培养基样品、农产品样品、动物产品样品、动物饲料样品、供人消费的食物或饮料的样品、以及它们的组合。在多个实施方案中可将本教导用于广泛的含伯胺化合物，所述含伯胺化合物包括但不限于氨基酸、儿茶酚胺、硝基呋喃代谢物、多胺、肽、蛋白质、多肽、以及它们的组合。 术语“同量异位标记物组”、“同量异位标签组”可互换使用，指例如一组试剂或化学结构部分，其中所述组的成员(即个体的“同量异位标记物”或“同量异位标签”)具有基本相同的质量但其中所述组中每一个成员在经受离子断裂(例如通过碰撞诱导解离(CID)、光诱导解离(PID)等)时均可产生不同的子离子(daughter ion)信号。可用于区分组中成员的同量异位标签或标记物的子离子可称为所述同量异位标签或标记物的报告物离子。在多个实施方案中，同量异位标签组包含胺衍生的含胺化合物，在缺乏断裂的情况下，其基本上不能通过色谱学方法区分并且基本上不能通过质谱学方法区分，但在CID后其产生了强的低质量MS/MS信号离子。 术语“母-子离子跃迁监测”或“PDITM”指例如利用质谱法的测量，由此选择第一质量分离器(常称为质谱法的第一维)的所传输质量电荷比(m/z)范围以便将分子离子(常称为“母离子”或“前体离子”)传递到离子裂解器(例如碰撞池、光解离区域等)中以产生片段离子(常称为“子离子”)，并且选择第二质量分离器(常称为质谱法的第二维)的所传输m/z范围以便将一种或多种子离子传递到测量所述子离子信号的检测器。所监测的母离子和子离子质量的组合可称为所监测的“母离子-子离子跃迁”。对于给定的所测母离子-子离子组合而言，检测器处的子离子信号可称为“母离子-子离子跃迁信号”。在本教导的多个实施方案中，所述母离子是利用同量异位标签标记的含胺化合物，所述子离子是所述同量异位标签的报告物离子；因此，对于给定的同量异位标记的含胺化合物的母离子而言，在检测器处所测量的报告物离子的离子信号可称为“含胺化合物-报告物离子跃迁信号”。同样，对于给定的同量异位标记的标准化合物而言，在检测器处所测量的报告物离子的离子信号可称为“标准化合物-报告物离子跃迁信号”。 例如，母离子-子离子跃迁监测的一个实施方案是多重反应监测(MRM)(又称为选择性反应监测)。在MRM的多个实施方案中，对给定母离子-子离子跃迁的监测包括使用第一质量分离器(例如停在目标母离子m/z上的第一四极杆)来传输目标母离子，利用第二质量分离器(例如停在目标子离子m/z上的第二四极杆)来传输一种或多种目标子离子。在多个实施方案中，可通过使用所述第一质量分离器(即停在目标母离子m/z上的四极杆)来传输母离子并在其中包括所述一种或多种目标子离子m/z值的m/z范围内扫描所述第二质量分离器而进行PDITM。 例如，串联质谱仪(MS/MS)仪器(或者更一般而言，多维质谱仪(MSn)仪器)可用于进行PDITM，例如MRM。合适的质量分析器系统的实例包括但不限于含有三重四极杆、四极杆线性离子阱、四极杆TOF以及TOF-TOF中一种或多种的那些系统。 在多个方面，本教导提供了利用同量异位标签和母离子-子离子跃迁监测(PDITM)来分析一种或多种样品中的一种或多种含胺化合物的方法。在多个实施方案中，方法包括以下步骤(a)利用来自一组同量异位标签中的不同同量异位标签分别标记一种或多种含胺化合物，所述同量异位标签组中的每种同量异位标签均包含报告物离子部分；(b)合并每种同量异位标记的含胺化合物的至少一部分以产生合并样品；(c)对所述合并样品的至少一部分进行母离子-子离子跃迁监测；(d)测量一种或多种被传输报告物离子的离子信号；以及(e)至少基于所测的相应报告物离子的离子信号与所测的标准化合物的一种或多种离子信号的比较，来测定一种或多种同量异位标记的含胺化合物的浓度。因此，在多个实施方案中，可以多重分析方式来测定多种含胺化合物的浓度，例如通过合并两种或更多种同量异位标记的含胺化合物以产生合并样品，并对所述合并样品进行PDITM(其中监测两种或更多种同量异位标记的含胺化合物的报告物离子)。 在多个方面，提供了分析一种或多种样品中的一种或多种含胺化合物的方法，所述方法包括以下步骤(a)提供标准化合物；(b)利用来自一组同量异位标签中的同量异位标签标记所述标准化合物；(c)利用来自所述同量异位标签组中的不同同量异位标签分别标记一种或多种含胺化合物；(d)合并所述同量异位标记的标准化合物的至少一部分与各种所述同量异位标记的含胺化合物以产生合并样品；(e)将所述合并样品的至少一部分加载到色谱柱上；(f)对来自所述色谱柱的洗脱物的至少一部分进行母离子-子离子跃迁监测；(g)测量一种或多种所传输报告物离子的离子信号；以及(h)至少基于所测的相应报告物离子的离子信号与所测的和所述同量异位标记的标准化合物相对应的报告物离子本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于分析一种或多种样品中的一种或多种甲状腺素化合物的方法，其中所述甲状腺素化合物可由通式（Ⅳ）表示：　＊＊＊　（Ⅳ），　其中每个Ｒ↓［１］独立地为碘或氢；并且　Ｒ↓［２］是羧基、羟基或甲基；　所述方法包括以下步 骤：　提供包含甲状腺素的标准化合物；　利用一组同量异位标签中的同量异位标签标记所述标准化合物；　利用所述同量异位标签组中的不同同量异位标签各自标记一种或多种甲状腺素化合物；　合并所述被同量异位标记的标准化合物的至少一 部分与每种所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的至少一部分以产生合并样品；　将所述合并样品的至少一部分加载到色谱柱上；　对所述色谱柱洗脱物的至少一部分进行母离子－子离子跃迁监测，其中，　第一所传输母离子的ｍ／ｚ范围包括一种或 多种所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的ｍ／ｚ值，第一所传输子离子的ｍ／ｚ范围包括与所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的至少一种同量异位标签相对应的至少一种报告物离子的ｍ／ｚ值；以及　第二所传输母离子的ｍ／ｚ范围包括一种或被同量异位标 记的标准化合物的ｍ／ｚ值，第二所传输子离子的ｍ／ｚ范围包括与所述被同量异位标记的标准化合物的同量异位标签相对应的报告物离子的ｍ／ｚ值；　测量一种或多种所述所传输报告物离子的离子信号；以及　至少基于所述相应的报告物离子的所测离子信 号与和所述被同量异位标记的标准化合物相对应的报告物离子的所测离子信号的比较，测定一种或多种所述被同量异位标记的甲状腺素化合物的浓度。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：苏巴西什普尔卡亚斯塔，
申请(专利权)人：阿普里拉股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]