用于羟基化化合物的标签试剂和方法技术

本教导在多个方面提供了用于羟基化化合物的相对定量、绝对定量或者相对定量和绝对定量二者的标记试剂和标记试剂组，所述羟基化化合物包括但不限于含羟基化环的化合物、类固醇和甾醇。本教导还在多个方面，提供了通过ＭＳ／ＭＳ法分析羟基化化合物（包括但不限于含羟基化环的化合物、类固醇和甾醇）的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2006年5月26日提交的共同未决的美国临时申请60/809133的权益和优先权，其全部内容在此通过引用并入本文。绪论 快速筛选和/或分析大量生物样品的能力对于许多领域来说具有重大意义。质谱是一种可提供快速样品分析的技术。然而，由于质量干扰和样品浓度低，通过质谱检测许多具有生理学重要性的分子可能存在问题。此外，一些种类的化合物不适用于通常制备用于质谱分析的样品的传统化学和/或条件。 一类具有生理学重要性的化合物是类固醇。用于样品中类固醇定量的传统方法包括免疫测定、带有紫外(UV)荧光的高效液相色谱(HPLC)以及液相色谱/质谱联用(LC/MS)和/或串联质谱(MS/MS)。 通过上述方法进行类固醇的绝对定量可能是有问题的。用于现代临床实验室中的免疫测定缺乏灵敏度并且受到交叉反应物质的干扰。利用LC或HPLC之后通过UV、MS或MS/MS检测的传统方法也缺乏灵敏度。例如，为了通过HPLC分析许多类固醇，在进行分析之前必须进行困难且耗时的衍生化步骤。此外，HPLC具有分析时间长、运行偏差大、缺乏多重能力和非特异性的缺点。 更近些时候，使用LC/MS和MS/MS用于化合物的检测和定量提供了速度提高及特异性提高以及能够快速测量一种样品中的多种化合物的能力；然而，这些技术也缺乏多重能力并且可能缺乏灵敏度。为了进行绝对定量，将昂贵的同位素富集的化合物用作内标物，这与一些串联质谱法不相容。另外，这些同位素富集的内标物并不提高分析物化合物检测的灵敏度。 概论 本教导提供了用于分析含有一种或多种羟基化化合物的样品的试剂和方法。在多个实施方案中，所提供的这些试剂和方法可用于测定一种或多种样品中的一种或多种类固醇的相对浓度、绝对浓度或相对浓度和绝对浓度二者。通过对试剂的同位素取代的适当选择，本教导可用于同量异位的标记试剂和方法、以及质量差异性标记试剂和方法。本文所用的术语“标记物”和“标签”可互换使用。用于合成同位素富集的化合物之方法的实例可见于美国专利申请公开2005/0148774中，其全部内容在此通过引用并入本文。 可应用本教导多个实施方案的羟基化化合物可来自多种来源，例如生理性流体样品、细胞或组织裂解物样品、蛋白质样品、细胞培养物样品、发酵肉汤培养基样品、农产品样品、动物产品样品、动物饲料样品、供人消费的食品或饮料样品、以及以上的组合。在多个实施方案中，本教导可用于天然以及合成的类固醇。多种类固醇(包括但不限于皮质醇、11-去氧皮质醇(化合物S)、皮质酮、DHT、睾酮、表睾酮、去氧甲基睾酮(DMT)、四氢孕三烯酮(THG)、雌二醇、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮基雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲醚、泼尼松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、DHEA(去氢表雄酮)、17OH孕烯醇酮、17OH孕酮、17OH孕酮、雄酮、表雄酮、D4A(Δ4雄烯二酮)、豆甾醇和胆固醇)可在本教导的多个实施方案中进行分析。 在多个方面，本教导提供了利用质量差异性标签来分析含有一种或多种羟基化化合物的样品的试剂和方法。在多个实施方案中，提供了质量差异性标记物组，其中所述组的一种或多种标记物含有一种或多种重原子同位素。通过制备具有不同总质量和不同初始报告物离子质量的标记物可提供质量差异性标记物组。应当理解，并非质量差异性标签组中的每一个成员都按照本教导进行了重原子同位素富集。在多个实施方案中，本教导提供了利用质量差异性标记物和母离子-子离子跃迁监测(PDITM)来分析一种或多种样品中的一种或多种羟基化化合物的试剂和方法。在多个实施方案中，可利用质量差异性标签试剂和质谱法将本教导用于羟基化化合物的定性和定量分析。所述质量差异性标签包括但不限于非同量异位的同位素编码的试剂。在多个实施方案中，本教导提供了不利用同位素富集的标准化合物而对羟基化化合物进行绝对定量的试剂和方法。在多个实施方案中，所述羟基化化合物包括含有羟基化环的化合物。在多个实施方案中，所述含有羟基化环的化合物包括含有羟基化多环的化合物。 在多个方面，本教导提供了利用同位素富集的同量异位的标签来分析含有一种或多种羟基化化合物的样品的试剂和方法。在多个实施方案中，提供了同量异位的标记物的组，其中所述组的每个标记物包含一种或多种重原子同位素。可通过制备其中每一种标记物的质量基本上相同但每一种标记物的初始报告物离子具有不同质量差异性的多种标记物来提供同量异位的标记物组。在多个实施方案中，利用质谱法可将同量异位的标签试剂组用于羟基化化合物的定性和定量分析。例如，在多个实施方案中，提供了使用同位素富集的同量异位的标签和母离子-子离子跃迁监测(PDITM)来测定样品中一种或多种羟基化化合物的存在和/或浓度的方法。在多个实施方案中，所述羟基化化合物包括含有羟基化环的化合物。在多个实施方案中，所述含有羟基化环的化合物包括含有羟基化多环的化合物。 在多个方面，本教导提供了用于羟基化化合物(包括但不限于含有羟基化环的化合物)的相对定量、绝对定量或相对定量和绝对定量二者的标记试剂和标记试剂组，其中所述标记试剂可以由通式(I)表示 Z—R1 (I)， 并且可以以盐或水合物形式提供和/或使用。在通式(I)中(a)Z表示取代或未取代的直链、支链或环状烷基；取代或未取代的芳基；取代或未取代的杂芳基；取代或未取代的氨基；或者取代或未取代的硫代基(thio)；(b)R1表示取代或未取代的 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 (c)X表示Cl、Br、I或乙酰基；以及(e)R2表示取代或未取代的烷基；取代或未取代的卤代烷基；或者取代或未取代的芳基。 在多个方面，本教导提供了被标记分析物，其中所述分析物含有至少一个羟基以利用本教导的标记物进行标记。在多个实施方案中，所述被标记化合物可以由通式(II)表示 并且可以以其盐或水合物形式提供和/或使用。在通式(II)中(a)Z可以是式I所给出的那些；(b)A表示在形成所述被标记化合物之前含有一个或多个羟基基团的化合物；(c)RY表示在形成所述被标记化合物之前与含有羟基的A的碳原子形成键的氧原子；(d)n表示1至至多在形成被标记化合物之前A中羟基基团数的整数；以及(e)Rx表示取代或未取代的下列基团 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 或 本教导并不限于对羟基化化合物的分析，还可通过在利用本教导中一个实施方案的标签进行标记之前还原羰基基团、通过利用标记反应原位还原或者二者的组合而用于含有非羟基化羰基的化合物。 在多个实施方案中，所述被标记分析物化合物含有四环。在多个实施方案中，所述四环可以由通式(III)表示 其中四环上不与RY成键的一个或多个位置各自独立地被氢、烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基本文档来自技高网...

【技术保护点】
标记物组，其包括两种或更多种通式（Ⅰ）的化合物或其盐或水合物形式：　Ｚ－Ｒ↓［１］（Ⅰ），　其中所述标记物组中的一种或多种所述化合物含有一种或多种重原子同位素，以及其中　Ｚ表示取代或未取代的直链、支链或环状烷基；取代或未取 代的芳基；取代或未取代的杂芳基；取代或未取代的氨基；或者取代或未取代的硫代基；　Ｒ↓［１］表示取代或未取代的下列基团：　－（－＊－ＯＨ）或－（－　＊－Ｘ）或－（－＊－ＯＨ）或－（－＊－Ｘ）或－（－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）或－（－Ｎ＝Ｃ＝Ｓ） 或－（－＊＝Ｃ＝Ｏ）或－（－＊－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）或－（－＊－Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）或－（－＊－＊＝Ｃ＝Ｏ）或－（－＊－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ）或－（－＊－Ｎ＝Ｃ＝Ｓ）或（＊＊＊）或（＊＊＊）或（＊＊＊），　Ｘ表示Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ或乙酰基；以及　Ｒ↓［２］表 示取代或未取代的烷基；取代或未取代的卤代烷基；或者取代或未取代的芳基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏巴西什普尔卡亚斯塔，
申请(专利权)人：阿普里拉股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]