用于定量分析的质量标签制造技术

本发明专利技术涉及利用独特的标记试剂或独特的标记试剂组通过质量分析测定分析物的方法、混合物、试剂盒和／或组合物。所述标记试剂可以是同分异构的或同量异位的，并且可用于制备适于对被标记分析物进行多重分析的混合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于定量分析的质量标签相关申请本申请是2006年2月15日提交的美国申请No.ll/355，904的继续申 请，所述美国申请No.ll/355，904是2005年7月11日提交的美国申请 No.11/179，060的部分继续申请，所述美国申请No.ll/179，060要求2005 年5月9日提交的美国申请No.60/679，183和2004年7月12日提交的 美国申请No.60/587，138的优先权。上述申请的全部教导在此通过引用 并入本文。附图说明一般技术人员应当理解下述附图仅用于举例说明的目的。所述附图 并非旨在以任何方式限制本专利技术教导的范围。附图1A-1H显示一组8个同量异位的(isobaric)质量标签(mass tag) 的结构式，每个质量标签的分子量相同但是当向其施加解离能水平 (dissociative energy level)时其将断裂得到不同分子量的信号离子。图2A是用质量标签(32 )烷基化的SEQ ID No.:l的QTRAPTM 2000 MS分析。图2B是用质量标签(32 )烷基化的SEQ ID No.:2的QTRAPTM 2000 MS分析。图3A是用质量标签(32 )烷基化的SEQ ID No.:l的QTRAPTM 2000 MS/MS分析。图3B是用质量标签(32 )烷基化的SEQ ID No.:2的QTRAPTM 2000 MS/MS分析。图4A是利用4700蛋白质组分析仪进行的对用质量标签(32 )烷基 化的SEQ ID No.:l的MS分析。图4B是利用4700蛋白质组分析仪进行的对用质量标签(32)烷基 化的SEQ ID No.:3的MS分析。图5A是利用4700蛋白质组分析仪进行的对用质量标签(32 )烷基 化的SEQ ID No.:l的MS/MS分析。图5B是利用4700蛋白质组分析仪进行的对用质量标签(32 )烷基 化的SEQ ID No.:3的MS/MS分析。图6A显示在两个样品的QTRAPTM 2000上进行的MRM试验，其 中一个样品已经用质量标签(32 )烷基化，另一个已经用质量标签(33 ) 烷基化，其中用质量标签(32)标记的样品与用质量标签(33)标记的 样品的比是1:0.05。图6B显示在两个样品的QTRAPTM 2000上进行的MRM试验，其 中一个样品已经用质量标签(32 )烷基化，另一个已经用质量标签(33 ) 烷基化，其中用质量标签(32)标记的样品与用质量标签(33)标记的 样品的比是l:l。图6C显示在两个样品的QTRAP 2000上进行的MRM试验，其 中 一个样品已经用质量标签(32 )烷基化，另 一个已经用质量标签(33 ) 烷基化，其中用质量标签(32)标记的样品与用质量标签(33)标记的 样品的比是1:10。图7A-1和图7A-2是利用4700蛋白质组分析仪进行的图6A中样品 的MS/MS模式的质i普。图7B-1和图7B-2是利用4700蛋白质组分析仪进行的图6B中样品 的MS/MS模式的质镨。图7C-1和图7C-2是利用4700蛋白质组分析仪进行的图6C中样品 的MS/MS模式的质i普。图8以图示方式说明活性酯的醇基或硫醇基的离去基团(LG)的示 例性结构式，其中G各自独立地是O或S,典型地是O。图9A-9B以图示方式说明在一些实施方案中可包含于LK基团中的/-;dv部分。图10以图示方式说明用于胺的酰基化以在质量标签上形成反应活 性基团的方案I和II。图11以图示方式说明质量标签(2)的合成。图12以图示方式说明质量标签(3)的合成。图13以图示方式说明质量标签(4)和(5)。图14以图示方式说明质量标签(6)、 (7)和(8)的合成。图15以图示方式说明质量标签(9)、 (10)和(11)的合成。图16以图示方式说明质量标签(12)的合成。图17以图示方式说明质量标签(14)和(15)。图18以图示方式说明合成质量标签(16)、 (17)、 (18)、 (19)和 (20)的一般方案。图19以图示方式说明质量标签(21)、 (22)、 (23)和(24)的合成。 图20以图示方式说明质量标签(25)的合成。图21以图示方式说明质量标签(26)的合成。图22以图示方式说明质量标签(27)的合成。图23以图示方式说明质量标签(28)的合成。图24以图示方式说明FmocGly-Ser(Bzl-13C6) (29)的合成。图25以图示方式说明树脂结合的质量标签(30)、 (31)和(32) 的合成。图26以图示方式说明含有胸腺嘧啶核苷碱基的标记试剂/质量标签 (XX) ((37a))的合成。图27A以图示方式说明合成6-甲基尿嘧咬的公知步骤，可由所述6-曱基尿嘧咬制备含有6-甲基尿嘧咬核苷碱基的标记试剂(质量标签) ((37b))。图27B以图示方式说明可用于制备同位素富集形式的6-甲基尿嘧啶 的多种可从商业渠道得到的同位素取代形式的乙酰乙酸乙酯。图27C以图示方式说明可用于制备同位素富集形式的6-甲基尿嘧啶 中的多种可从商业渠道得到的同位素取代形式的脲。图28A和28B以图示方式说明可利用图27B和27C中所示化合物 与图27A中所示步骤相组合进行制备的多种同位素富集形式的6-甲基 尿嘧啶。用*标记的原子是重原子同位素。图29A-E以图示方式说明可利用图26、 27A、 27B、 27C中所示步 骤和可从商业渠道得到的化合物以及图28A和28B中所示同位素取代 的6-甲基尿嘧啶进行制备的多种同位素编码的标记试剂。图30以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(38 )和(39 )的 化学结构。图31以图示方式i兌明质量标签标记的Glu-Fib肽(40)的化学结构。图32以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(41)的合成。图33以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(42 )的合成。图34以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(43 )的合成。图35以图示方式说明质量标签(44)和(45)的合成。图36以图示方式+兌明质量标签标记的Glu-Fib肽(46)的合成。图37以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(47)和质量标签 (48)的化学结构。图38以图示方式说明质量标签标记的Glu-Fib肽(49)的合成。1引言本专利技术涉及利用质量分析测定一种或多种分析物的方法、混合物、 试剂盒和/或组合物。分析物可以是任何感兴趣的分子。分析物的非限 制性实例包括但不限于蛋白质、肽、寡核苷酸、碳水化合物、脂质、类固醇、氨基酸和小于1500道尔顿的小分子。标记试剂和被标记分析物可表示为下述通式化合物或其盐形式和/ 或水合物形式RP-X-LK-Y-RG S'r S't Iw其中RG可以是与分析物反应的反应活性基团或所述反应活性基团与所 述分析物的反应产物。因此，被标记分析物可具有下述通式RP-X-LK-Y-分析物所述化合物可附着到固相栽体上或用于通过s，将其连接到固相载体的结构部分上。在下文中更详细地描述变量RG、 RP、 X、 LK、 S，、 r、 t和Y。同分异构或同量异位的标记试剂组可用于标记两个或更多个不同 样品的分析物，其中对于每种不同的样品而言，所述标记试剂可以不同 并且其本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，其包含至少两种不同的由下式所代表的化合物或其盐形式和／或水合物形式：　＊Ｐ－Ｘ－ＬＫ－Ｙ－ＲＧ，　其中独立地对各种不同化合物而言：　ＲＧ是亲核基团或亲电基团，或是分析物与亲核基团或亲电基团的反应产物；　ｒ 是０～１的整数；　Ｓ’是与固相载体或亲和配体偶联的可断开连接物；　Ｘ和Ｙ各自是键，其中Ｘ偶联ＲＰ和ＬＫ中每一个的原子或任选的取代基从而将ＲＰ与ＬＫ相连接，Ｙ将ＬＫ的原子或任选的取代基与ＲＧ偶联；　ＲＰ和ＬＫ各自任选地并且独 立地被取代，其中ＲＰ是报告物基团并且ＬＫ是由结构式Ｅ所代表的连接部分ＬＫ↑［５］：　＊＊＊　Ｅ，　其中每个ｎ独立地是１～３的整数，并且每个Ｒ独立地是Ｈ、Ｄ、烷基、杂烷基、芳基、杂芳基、或卤素基团；和　每个化合物的ＲＰ具有 独特的总质量，并且每个化合物的ＬＫ具有独特的总质量以补偿每个化合物的ＲＰ之间的独特总质量的差异使得每个化合物的ＲＰ和ＬＫ的合计总质量相同。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：严雄伟，袁保淼，袁咏莲，奚国良，乔Y拉姆，克里希纳G乌帕德亚，苏巴卡尔戴伊，达里尔JC帕平，萨西皮拉伊，海伦娜黄，苏巴西什普尔卡亚斯塔，
申请(专利权)人：阿普里拉股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]