与小麦白粉病抗性基因ＰｍＨＮＫ５４连锁的标记引物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及与小麦白粉病抗病基因ＰｍＨＮＫ５４紧密连锁的标记引物及其在分子标记辅助育种中的应用。标记引物在遗传图谱上的顺序为Ｘｂａｒｃ５、ＰｍＨＮＫ５４、Ｘｇｗｍ３１２，Ｘｂａｒｃ５、Ｘｇｗｍ３１２与ＰｍＨＮＫ５４的遗传距离分别为５．０ｃＭ、６．０ｃＭ。ＳＳＲ标记筛选时ＰＣＲ反应体系１０μｌ，含１０×ｂｕｆｆｅｒ１μｌ，１０ｍＭ／μｌｄＮＴＰ０．２μＬ、２０ｕＭ／μＬ引物０．２μｌ、５Ｕ／ｕｌＴａｑ酶０．１ｕｌ、去离子水８．１μｌ、２０ｎｇ／μｌ基因组ＤＮＡ０．４μｌ；扩增程序为：９４℃预变性３ｍｉｎ，９４℃变性１ｍｉｎ，５５℃或６０℃复性１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ，４０个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ；扩增产物用６％变性聚丙烯酰胺凝胶或８％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。本发明专利技术首次定位了小麦亲本材料郑９７５４中的白粉病抗性新基因ＰｍＨＮＫ５４，标记特异性强、稳定性高，适合大批次、高通量、自动化的优点，节约成本，提高选择效率。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
与小麦白粉病抗性基因ＰｍＨＮＫ５４连锁的标记引物，其特征在于，所述标记引物的核苷酸序列为：　　标记引物Ｘｂａｒｃ５，　　Ｐ１：５’－ＧＣＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＴＴＴＣＴＡＴＴＴＴ－３’，　　Ｐ２：５’－ＧＣＧＴＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＴＧＡＡＣＡＴＴＴＴ　－３’，　　或者标记引物Ｘｇｗｍ３１２，　　Ｐ３：５’－ＡＴＣＧＣＡＴＧＡＴＧＣＡＣＧＴＡＧＡＧ　－３’，　　Ｐ４：５’－ＡＣＡＴＧＣＡＴＧＣＣＴＡＣＣＴＡＡＴＧＧ　－３’。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许为钢，李春鑫，胡琳，张磊，王会伟，董海滨，张建周，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]