基于噬菌体专一性裂解原理的生物发光法快速检测致病菌制造技术

本发明专利技术涉及了一种基于噬菌体专一性裂解原理的生物发光法快速检测致病菌的技术。本发明专利技术所用菌株鳆发光杆菌（Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｉｏｇｎａｔｈｉ）于２００６年１２月２７日委托中国典型培养物保藏中心（简称ＣＣＴＣＣ）保藏，保藏号为Ｍ２０６１３９。该菌株的１６Ｓ　ｒＤＮＡ基因序列已经提交ＧｅｎＢａｎｋ核酸序列数据库，存取号为ＥＦ０１７２２７。本发明专利技术借助噬菌体专一性裂解目的菌释放出胞内ＮＡＤＨ，通过提取发光细菌胞内荧光素酶和ＦＭＮ：ＮＡＤＨ氧化还原酶粗酶制剂，建立了荧光素酶－ＦＭＮ：ＮＡＤＨ氧化还原酶体外发光的体系，通过双酶体系对ＮＡＤＨ的测定来确定目的菌菌数。该方法具有快速、简便、专一性等特点，能够满足致病菌快速检测的需要。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种快速检测致病菌的方法，特别是涉及一种噬菌体专一性裂解联合 海洋发光细菌WiOtobacterium Ieiognathi 1菌株胞内荧光素酶和FMN: NADH氧化还原酶 的体外发光体系进行致病菌快速检测的方法。
技术介绍
据本专利技术人通过查阅资料、文献检索所知，目前已知的海洋发光细菌只有三属， 分别是弧菌属(Vibrio)，明亮发光菌属(PhotcAacterium)，及希瓦氏菌属(Shewanella)， 陆地上则有异短杆菌属(Xenorhabdus)。在有氧的自然环境下，发光细菌可产生荧光素酶 (LE)，催化黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛类发生氧化反应，而发出监绿色的荧光。发光细菌的发光机理的研究表明，不同种类的发光细菌的发光机理是相同的，属 酶促氧化反应。是由分子氧作用，胞内荧光酶(LE)催化，将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2) 及八碳以上的长链脂肪醛(RCHO)氧化为FMN及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在波 长为450 490nm的蓝绿光。荧光素酶和FMN:NADH氧化还原酶共同存在下的酶促氧化反应的原理如下FMN:NADH氧化还原酶对本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于噬菌体专一性裂解原理联合海洋发光细菌Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｌｅｉｏｇｎａｔｈｉ　ＹＬ菌株胞内荧光素酶和ＦＭＮ：ＮＡＤＨ氧化还原酶的体外发光体系进行快速检测致病菌的方法。其双酶体系特征是：（１）双酶体系最佳底物配比：十二烷醛１００μＬ（２７ｍＭ）、ＦＭＮ－Ｎａ　０．５μＬ（１０ｍＭ）和ＮＡＤＨ　３００μＬ（０．１４ｍＭ），体系ｐＨ　７．０。（２）发光检测在微弱发光仪中进行，检测条件是：设置波长４７４ｎｍ，１ｍＬ酶液中，快速加入各底物，立刻进行定时跟踪测定，连续测定间隔时间为１ｓ。其检测体系特征是：目的菌由其对应噬菌体专一裂解，释放胞内ＮＡＤＨ，应用从发光细菌胞内提取的产物作为荧光...

【技术特征摘要】
1. 一种基于噬菌体专一性裂解原理联合海洋发光细菌WiOtobacterium Ieiognathi YL菌株胞内荧光素酶和FMN:NADH氧化还原酶的体外发光体系进行快速检测致病菌的方法。其双酶体系特征是(1)双酶体系最佳底物配比十二烷醛100μ L(27mM)、FMN-Na 0. 5 μ L(IOmM)和NADH 300 μ L (0. ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王静雪，林洪，梅册霞，李萌，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]