本发明专利技术涉及一株噬菌体及其抑菌应用，尤其是一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其抑菌应用，属于生物工程领域。一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，保藏号为:CCTCC NO：M2014145，保藏日期为2014年4月24日，该噬菌体对沙门氏菌有强的裂解作用。在本发明专利技术中，该株噬菌体从电镜形态上分析，属于肌尾噬菌体科，将其命名为沙门氏菌噬菌体STP4-a；在40-60℃和pH为4-12的条件下都能够存活；-20℃保存1年后活性稳定；噬菌体保存的保护剂为含20%甘油的培养溶液。采用本发明专利技术的噬菌体特异性裂解沙门氏菌可以杀死具有耐药性的沙门氏菌。
【技术实现步骤摘要】
一种宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其抑菌应用
本专利技术涉及一株噬菌体及其抑菌应用，尤其是一种宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其抑菌应用，属于生物工程领域。
技术介绍
沙门氏菌(Salmonella)为革兰氏阴性直杆菌，是一种重要的人畜共患病原菌。国内外研究表明，由沙门氏菌引起的食源性疾病屡居前位。随着抗生素的大量和长期使用，在食品和环境中，日趋严重的耐药型沙门氏菌已影响人类感染沙门氏菌疾病的治疗，能否研究出新型的生物抑菌剂来替代化学抗生素是目前科研人员面临的一个挑战。噬菌体是一类细菌病毒，烈性噬菌体感染细菌后，能够快速裂解细菌导致宿主菌的死亡。沙门氏菌噬菌体可以特异性感染并裂解沙门氏菌，因而具有杀菌作用。在感染模型中，噬菌体能够特异性杀死沙门氏菌，而在食品中，噬菌体能够作为抗菌剂来控制细菌污染，具有潜在的开发价值。
技术实现思路
本专利技术提供一种宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，对沙门氏菌具有强裂解作用的噬菌体制剂，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性的灭活多种沙门氏菌，为目前防控沙门氏菌污染提供一种安全、无毒副作用的噬菌体产品来源。本专利技术还提供一种所述宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的抑菌应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，保藏号为:CCTCCNO：M2014145，保藏日期为2014年4月24日，该噬菌体对沙门氏菌有强的裂解作用。在本专利技术中，该株噬菌体从电镜形态上分析，属于肌尾噬菌体科，将其命名为沙门氏菌噬菌体STP4-a；在40-60℃和pH为4-12的条件下都能够存活；-20℃保存1年后活性稳定；噬菌体保存的保护剂为含20％甘油的培养溶液。一种所述噬菌体在制备杀灭沙门氏菌的药物中的应用，其特征在于：将沙门氏菌噬菌体纯化后，用于抑制和杀灭沙门氏菌。该噬菌体用于防止沙门氏菌污染和沙门氏菌过度生长，其中所述的沙门氏菌包括鼠伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、伤寒沙门氏菌和乙型伤寒沙门氏菌。一种所述的宽裂解谱沙门氏菌噬菌体在防治食品污染沙门氏菌方面的应用。将噬菌体用水稀释后，作为喷洒液或淋洗液，用于对食品的生产环境或生产器具或生产设备进行喷洒消杀，用于控制沙门氏菌对所述的环境或器具或设备的污染。所述食品是指：由粮食、肉类、蔬菜、蛋类中择一的加工制品，或由它们组合的加工制品。一种含有所述的宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的噬菌体制剂。该噬菌体制剂对沙门氏菌具有强裂解作用，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性的灭活多种沙门氏菌，为目前防控沙门氏菌污染提供一种安全、无毒副作用的噬菌体产品来源。当噬菌体以109pfu/g饲料的添加量添加到鸡饲料中，可使鸡肠道内沙门氏菌的数量降低1个数量级，抑菌效果显著，对其他细菌则没有影响。本专利技术的有益效果主要体现在：采用噬菌体特异性裂解沙门氏菌可以杀死具有耐药性的沙门氏菌。附图说明图1为噬菌体电镜照片(×40K)；图2为噬菌体温度敏感性检测结果；图3为噬菌体pH敏感性检测结果；图4为噬菌体保存温度分析图；图5为不同组小鼠肝脏组织切片图(H.E×400)；图6为不同组小鼠脾脏组织切片图(H.E×200)；图7为不同组小鼠肾脏组织切片图(H.E×400)；图8为不同组小鼠胃组织切片图(H.E×200)；图9为不同组小鼠肠组织切片图(H.E×200)；图10为不同组小鼠心脏组织切片图(H.E×200)；图11为不同处理组、不同饲养时间鸡肠道内沙门氏菌含量。具体实施方式下面通过具体实施例，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本专利技术的实施并不局限于下面的实施例，对本专利技术所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本专利技术保护范围。在本专利技术中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。本专利技术试验涉及的菌株：两株鼠伤寒沙门氏菌(保藏号分别为ATCC14028和ATCC13311)，甲型副伤寒沙门氏菌(保藏号为CMCC(B)50001)，肠炎沙门氏菌(保藏号为CMCC50041)，伤寒沙门氏菌(保藏号为CMCC50071)和乙型伤寒沙门氏菌(保藏号为CMCC50094)分别购于美国ATCC中心和中国普通微生物菌种保藏管理中心。本噬菌体STP4-a保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCCNO：M2014145，分类学命名：沙门氏菌噬菌体STP4-a(SalmonellabacteriophageSTP4-a)。实施例1：噬菌体分离制备及纯化将鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028接种至10mL营养肉汤中，过夜振荡培养，得到宿主菌液。次日取山东省青岛市不同地点的污水样品分别与宿主菌液混合培养后，离心(3318g，10min)取上清液经过微孔滤膜(0.22μm)除菌得到含有噬菌体的溶液，取该溶液0.1mL，进行10倍稀释，取稀释液各0.1mL与过夜培养的宿主菌液0.1mL混匀，加入约5mL半固体培养基，混匀后迅速倾倒入营养琼脂平板上层，摇匀平置5min，待其凝固，置于37℃恒温培养箱培养12h后观察，获得形成噬菌斑的双层平板，然后连续重复至少3次单斑穿刺进行噬菌体的纯化，将纯化后的噬菌体加入到宿主菌液中进行增殖培养，离心(7607g，20min)上清液经微孔滤膜(0.22μm)除菌后得到噬菌体原液。半固体培养基：由19g/L营养肉汤培养基和33g/L营养琼脂培养基按照1:1的体积比配制而成。噬菌体电镜观察将噬菌体原液滴于石蜡板上，将铜片网置于滴液中，15min后用滤纸吸去多余液体，滴一滴磷钨酸水溶液，染色10min后吸去多余液体，在空气中干燥10-15min，在透射电镜下观察噬菌体的形态。如图1所示，噬菌体STP4-a为蝌蚪状，头部长度为100nm，横径为80nm，具有长度约为120nm的细长尾部，属于肌尾噬菌体科。实施例2温度及pH对噬菌体的影响将含有900μL液体培养基的EP管放于不同温度值的水浴中预热60min，待温度稳定后，加入100μL噬菌体原液，经过60min培养后测定噬菌体效价；将900μL不同pH值的液体培养基分别加入到2mL的EP管内，置于温度为37℃的恒温培养箱中预热30min，待温度稳定后，加入100μL噬菌体原液，经过60min培养后测定噬菌体效价。结果如图2所示，40℃条件下噬菌体的活性在30min内保持不变；在50℃条件下15min和30min时仍分别有90％和75％的活性，但经过60-80℃，15min处理后，噬菌体的活性仅保留了不到0.1％。30min处理后，噬菌体的存活数低于10pfu/mL。结果如图3所示，STP4-a在pH为4-7的条件下，存活率为100％。pH为8-10时，噬菌体的存活率仍有90％。pH为11和12时，噬菌体的存活率分别为70％和56％。实施例3噬菌体保存条件分析利用不同的方法保存噬菌体①将纯化好的噬菌体溶液加入终浓度为20％的甘油后保存在4℃和-20℃条件下。②将纯化好的噬菌体溶液加入终浓度为30％的脱脂牛奶后立即用液氮冻干，保存在-80℃条件下。分别保存一年后通过测定噬菌体的效价来判断保存方法的可行性。结果如图4所示，-20℃低温保存效果最好。4℃和-80℃低温保存噬菌体1年后，噬菌体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：保藏号为: CCTCC NO：M 2014145，该噬菌体对沙门氏菌具有有效的裂解作用。
【技术特征摘要】
1.一株宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：保藏号为：CCTCCNO：M2014145，该噬菌体对沙门氏菌具有有效的裂解作用。2.一种如权利要求1所述噬菌体在制备杀灭沙门氏菌的药物中的应用，其特征在于：将沙门氏菌噬菌体纯化后，用于抑制和杀灭沙门氏菌。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：该噬菌体用于防止沙门氏菌污染和沙门氏菌过度生长，其中所述的沙门氏菌包括鼠伤寒沙门氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、伤寒...
【专利技术属性】
技术研发人员：王静雪，林洪，李梦哲，李萌，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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