利用里氏木霉制备纤维素酶制造技术

发明专利技术名称利用里氏木霉制备纤维素酶。本发明专利技术提供了一种新的纤维素酶生产方法，其步骤包括：制备里氏木霉菌悬液置于３０℃恒温摇床，１８０ｒ／ｍｉｎ振荡培养４８ｈ，预处理玉米秸秆，用改良的Ｍｓｎｄｅｌｓ氏营养盐为底物配置液体发酵培养基。然后以１０％接种量将液体种子接入发酵培养基于３２℃、１５０ｒ／ｍｉｎ转速下放入恒温震荡培养箱中培养２４ｈ，下调温度至２８℃，继续培养３６ｈ。将发酵液以３０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，上清液为粗酶液，在上清中加浓度６０％（Ｗ／Ｖ）的硫铵，静置过夜，加适当过滤剂抽滤得酶泥，置于１０℃下真空干燥１ｄ，最后研磨成酶粉。本发明专利技术操作工艺简单、产率大，适于大规模工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
利用里氏木霉制备纤维素酶，其特征包括以下几个步骤：（１）里氏木霉菌种选育里氏木霉（ＴｒｉｅｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｌＲｕｔＣ一３０）接种在马铃薯、葡萄糖、琼脂的试管斜面上，在３０℃恒温箱中培养７天后，于冰箱内４℃以下保藏。（２）孢子悬浮液制备用无菌水将培养成熟布满孢子的斜面洗涤、振荡，以血球计数器计数，稀释至孢子数为１０↑［７］～１０↑［８］个／ｍＬ．（３）摇瓶液体种子制备按２％的接种量将孢子悬浮液接入装有５００ｍＬ培养液的２Ｌ三角瓶中，然后置于３０℃恒温摇床，１８０ｒ／ｍｉｎ振荡培养４８ｈ．（４）营养盐液的配置以Ｍｓｎｄｅｌｓ氏营养盐为基础再加入ＮａＮＯ↓［３］４．０ｇ／ｌ，配置成一种新的营养盐备用。（５）玉米秸秆预处理先对玉米秸秆进行预处理。用０．７５％稀Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］，在甘油浴上（１５０℃）加热５０ｍｉｎ（用３０ｍＬ小钢瓶装玉米皮，绝干料５ｇ），钢瓶从甘油浴中取出后迅速冷却（终止反应），热水洗３次，料风干备用。（６）配置液体发酵培养基用改良的Ｍｓｎｄｅｌｓ氏营养盐为底物配置液体发酵培养基，加入处理好的玉米秸秆８０ｇ／Ｌ，蛋白胨６ｇ／Ｌ，麦芽糖１０ｇ／Ｌ，再加入一定量的ＫＨ↓［２］ＰＯ↓［４］／Ｋ↓［２］ＨＰＯ↓［４］缓冲溶液调节ＰＨ于５．８左右，配２００ｍｌ装入１Ｌ的三角摇瓶。（７）发酵培养以１０％的接种量将培养成熟的三角瓶液体种子接入液体发酵培养基，于３２℃、１５０ｒ／ｍｉｎ转速下放入恒温震荡培养箱中培养２４ｈ，下调温度至２８℃，继续培养３６ｈ。（８）纤维素酶提取将发酵液以５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，上清液为粗酶液，在上清中加浓度硫酸铵至饱和度２０％，再取上清，加硫酸铵至饱和度６０％，取沉淀溶于ｐＨ６．０的Ｎａ↓［２］ＨＰＯ↓［４］－ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］缓冲液中，获得酶液，透析脱盐并浓缩，加适当过滤剂抽滤得酶泥，置于１０℃下真空干燥１ｄ，最后研磨成酶粉。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴菁，史利斌，
申请(专利权)人：湖州礼来生物技术有限公司，吴菁，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]