一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种能够防治多种土传病害且效果稳定、能够适应不同环境的含有哈茨木霉的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，包括载体和复合微生物菌，所述的复合微生物菌包含有枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL259、生防性链霉菌(Streptomyces sp.)YL04和生防菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)T4，上述三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为0.3‑1：2‑7进行吸附后所得的粉末再分别按照质量比为3‑4：3‑3.5：2.5‑3.5均匀混合，均匀混合后的粉末内复合微生物菌的活菌数量为5.8‑6.7×10

Contains a Trichoderma biocontrol compound microbial preparation and preparation method thereof

The invention discloses a method which can control a variety of soil borne diseases and stable effect, can adapt to different environment with Hazm with Hazm biocontrol of composite microbial agents, including carrier and composite microorganisms, composite microorganisms comprising a Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) HL259, biocontrol of Streptomyces (Streptomyces sp.) and YL04 Hazm (Trichoderma biocontrol bacteria harzianum T4), the above three kinds of biocontrol bacteria fermentation liquid and the carrier in accordance with the separate respectively according to the mass ratio of 0.3 1:2 7 adsorption from powder respectively according to the mass ratio of 3 4:3 3.5:2.5 3.5 mixing the number of live bacteria composite microbial powder are uniformly mixed in the 5.8 6.7 x 10

【技术实现步骤摘要】
一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂及其制备方法
本专利技术属于植物病害防治领域，具体涉及一种含有哈茨木霉的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂及其制备方法。
技术介绍
我国植物病害生物防治研究经过多年的发展，在国家主管部门的扶持下，发展步伐逐年加快，在特异微生物选育技术、菌株遗传改造、生防农药作用机理以及代谢调控机理等方面取得了一定的研究进展。通过建立新的筛选体系，获得了一批高效的生防微生物资源。生防菌木霉已广泛应用于防治蔬菜根腐病等土传病害，木霉除了已明确的重寄生、竞争、抗性作用生防机理外，还发现木霉可定殖在植物根系组织内，与植物形成共生体，在互作区产生生物活性分子，诱导植物发生局部的系统抗病性。还能诱导植物蛋白质组变化，促进作物营养吸收和生长，提高作物产量。枯草芽孢杆菌通过定植在植物根际、体表或体内，同病原菌竞争植物周围的营养、分泌抗菌物质抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。枯草芽孢杆菌对稻瘟病菌Magnaporthegrisea、芋疫病菌Phytophthoracolocasia、西瓜枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.niveum、辣椒枯萎病菌Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum、瓜果腐霉Pythiumaphanidermatum等病原菌具有较强的抑制作用。放线菌产生的抗生素在植物病害生物防治方面发挥着重要作用。由放线菌制成的活细胞制剂，具有无毒、无残留、不伤害非靶标微生物、与环境兼容性好、防病持效期长等优点。生防链霉菌可产多种抗生素、胞外酶等活性物质，且孢子抗逆性强，在土传病害防治方面具有较好的应用前景。尽管枯草芽孢杆菌、生防性链霉菌和生防菌木霉作为生物杀菌剂在植物病害的生物防治中取得了一些成效，但还是存在不少问题。首先，作为生物杀菌剂，上述菌种在田间效果表现不稳定，经专利技术人研究发现可能是由于菌株在室内传代培养，与野生菌株活性有所差异。并且室内盆栽试验与不同地区田间环境不同，造成盆栽试验结果与田间应用效果有较大差异。其次，微生物菌剂也可能引起病原菌抗性。最后，微生物菌剂的防治成本一般高于化学药剂。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够防治多种土传病害且效果稳定、能够适应不同环境的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂及其制备方法。为实现上述目的，本专利技术提供了一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，包括载体和复合微生物菌，所述的复合微生物菌包含有枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL259、生防性链霉菌(Streptomycessp.)YL04和生防菌哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T4，上述三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为0.3-1：2-7进行吸附后所得的粉末再分别按照质量比为3-4：3-3.5：2.5-3.5均匀混合，均匀混合后的粉末内复合微生物菌的活菌数量为5.8-6.7×108个/克，水分保持在30％以内。进一步，所述的载体是氨基酸生产过程中产生的水解渣，所述的水解渣pH范围为5.5-8.5。进一步，所述的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的细度为60-80目。本专利技术还提供了上述含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：S1：制备水解渣，将水解渣敲碎成粉末或小颗粒，再与粉状石灰混合按照质量比为4：1混合均匀，再将混合均匀的粉末粉碎后堆放8-12小时，让其充分反应，最后调节其pH达到5.5-8.5；S2：制备发酵液，将生防性枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL259，生防性链霉菌(Streptomycessp.)YL04，生防菌哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T4的三种菌种分别转入单独的种子罐、发酵罐进行单独发酵，得到三种菌的发酵液；S3：将S2中单独发酵后的菌液与S1中制备的水解渣按质量比为0.3-1：2-7的量进行吸附，吸附后的三种固体粉状菌剂按照质量比为3-4：3-3.5：2.5-3.5的比例混合均匀。S4：粉碎，将S2中混合均匀的粉状菌剂粉碎，使其达到60-80目，且复合菌剂的有效活菌数量达5.8～6.7×108个/克以上，水分保持在30％以内，即得到成品复合微生物菌剂。进一步，S1中是通过加入石灰调节pH值。进一步，所述的生防性枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL259、生防性链霉菌(Streptomycessp.)YL04和生防菌哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T4通过斜面培养/摇瓶培养制备。一种用于制备含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL259发酵液的方法，包括以下步骤：S1：在发酵培养基中，以1-2％接种量至种子罐；S2：在种子罐内发酵液以3-5％接种量接种到发酵罐；S3：所述的种子罐和发酵罐的在28±1℃的温度内培养24-48h，其通气量为1:0.5-1:1.6，并加入消沫剂，以200-400rpm的速度进行搅拌。进一步，S1中所述培养基由以下组分按质量比：豆饼粉5～5.6％，玉米粉6.5～7.2％，Na2HPO40.5～0.8％，(NH4)2SO40.2～0.4％，NH4Cl0.10～0.13％，CaCl20.10～0.13％构成。进一步，S3中消沫剂为的植物油或有机硅油。优选地，所述的消沫剂加入量与培养基按质量比为植物油1％或有机硅油0.04％。进一步，所述的种子罐容积为30-50L，发酵罐容积为800-1000L。一种用于制备含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的生防性链霉菌(Streptomycessp.)YL04发酵液的方法，包括如下步骤：S1：在发酵培养基中，以1-2％接种量至种子罐；S2：种子罐内发酵液以3-5％接种量接种到发酵罐；S3：所述的种子罐和发酵罐在28±1℃的温度内培养48-72h，其通气量为1:0.5-1:1.6，并加入消沫剂，以180-200rpm的速度进行搅拌。进一步,S1中所述培养基由以下组分按质量比：大豆粉1～2％、(NH4)2SO45～6％、蛋白胨0.2～0.3％、葡萄糖3～4％、酵母粉0.4～0.6％、NaCl0.1～0.2％、K2HPO40.04～0.06％、CaCO30.1～0.2％构成。进一步，S3中消沫剂为的植物油或有机硅油。优选地，所述的消沫剂加入量与培养基按质量比为植物油1％或有机硅油0.04％。一种用于制备含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的生防菌哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T4发酵液的方法，包括如下步骤：S1：在发酵培养基中，以温度28～32℃、种子接种量5％～7％、种子浓度105～106个/mL、通气量为1:2-2:1，罐压0.03～0.05MPa的条件下发酵72～96小时，获得木霉菌发酵液。进一步，S1中所述培养基由以下组分按质量比：0.3～0.5％的麸皮，0.1～0.3％的(NH4)2·SO4，0.1～0.2％的KH2PO4，0.1～0.2％的CaCO3，1～3％的葡萄糖，0.2～0.5％的大豆油构成，且其pH为5.5～6.0。本专利技术的有益效果是：本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，包括载体和复合微生物菌，其特征是：所述的载体是氨基酸生产过程中产生的pH为5.5‑8.5的水解渣，所述的复合微生物菌包含有生防性枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HL259、生防性链霉菌(Streptomyces sp.)YL04和生防菌哈茨木霉(Trichoderma harzianum)T4上述三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为0.3‑1：2‑7进行吸附后所得的粉末再分别按照质量比为3‑4：3‑3.5：2.5‑3.5均匀混合，均匀混合后的粉末内复合微生物菌的活菌数量为5.8‑6.7×10

【技术特征摘要】
1.一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，包括载体和复合微生物菌，其特征是：所述的载体是氨基酸生产过程中产生的pH为5.5-8.5的水解渣，所述的复合微生物菌包含有生防性枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)HL259、生防性链霉菌(Streptomycessp.)YL04和生防菌哈茨木霉(Trichodermaharzianum)T4上述三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为0.3-1：2-7进行吸附后所得的粉末再分别按照质量比为3-4：3-3.5：2.5-3.5均匀混合，均匀混合后的粉末内复合微生物菌的活菌数量为5.8-6.7×108个/克，水分保持在30％以内。2.如权利要求1所述的一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，其特征是：所述的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的细度为60-80目。3.如权利要求1所述的一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，其特征是：所述的三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为1：10的比例进行吸附，吸附后的三种固体粉状菌剂按照质量比为3：3.5：3.5的比例混合均匀,复合菌剂的有效活菌数量达5.8×108个/克以上，水分保持在20％左右。4.如权利要求1所述的一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，其特征是：所述的三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为1：7的比例进行吸附，吸附后的三种固体粉状菌剂按照质量比为4：3：3混合均匀,所述的复合菌剂的有效活菌数量达6.0×108个/克以上，水分≈24％。5.如权利要求1所述的一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，其特征是：所述的三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为1：6的比例进行吸附，吸附后的三种固体粉状菌剂按照质量比为4：3.5：2.5混合均匀,所述的复合菌剂的有效活菌数量达6.2×108个/克以上，水分≈26％。6.如权利要求1所述的一种含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂，其特征是：所述的三种生防菌的单独发酵液分别与载体按照按质量比为1：4的比例进行吸附，吸附后的三种固体粉状菌剂按照质量比为3.5：3.5：3混合均匀,所述的复合菌剂的有效活菌数量达6.7×108个/克以上，水分保持在30％以内。7.一种制备权利要求1-6中所述的含有哈茨木霉的生防性复合微生物菌剂的方法，其特征是：包括如下步骤：S1：制备水解渣，将水解渣敲碎成粉末或小颗粒，再与粉状石灰混合按照质量比为4：1混合均匀，再将混合均匀的粉末粉碎后堆放8-12小时，让其充分反应，最后调节其pH达到5.5-8....

【专利技术属性】
技术研发人员：闫龙翔，陈露，王学娟，
申请(专利权)人：上海绿乐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31