灯盏细辛药材的质量控制方法技术

本发明专利技术涉及中药质量控制领域，具体来说为一种灯盏细辛药材的质量控制方法。该方法包括灯盏细辛药材的指纹图谱检测方法和多指标含量测定方法。其中发明专利技术所述的指纹图谱检测方法是采用ＵＰＬＣ测定，它具有２４个特征峰，归属了８个特征峰。本发明专利技术还提供了灯盏细辛药材的含量测定方法，采用ＵＰＬＣ－ＰＤＡ法同时测定飞蓬苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩苷、３，４－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸、３，５－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸、灯盏甲素、４，５－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸的含量。与现有技术相比，本发明专利技术改进了灯盏细辛药材的指纹图谱检测方法和含量测定方法，可方便、快速、准确地全面监控灯盏细辛药材的质量，保证其稳定、均一、可控。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药质量控制领域，更具体的说是一种灯盏细辛药材的质量控制方 法。
技术介绍
中药质量控制与保障是中药现代化、产业化以及国际化中的核心问题。中药化学 成分的多样性与复杂性是发挥其疗效的物质基础，也是质量评价的难点与重点。传统的以 单一成分作为指标进行质量控制手段越来越不能适应目前中药质量控制的要求。在中药现 代化过程中，具有整体性和模糊性两个基本特性的中药指纹图谱已成为现阶段可以全面反 映中药内在质量的有效手段。在指纹图谱分析基础上结合多指标成分定量分析，能同时兼 顾定性和定量分析，既能客观反应中药的多样性与复杂性，又能更加真实反映中药的内在 质量。可以说中药指纹图谱技术与多指标成分定量分析相结合的模式将是现今很长一段时 间较为科学、合理的中药质量控制模式。目前HPLC(高效液相色谱)是中药质量控制最常用的分析手段，但为保证中药复 杂体系的较好分离，存在分析时间较长的缺点。UPLC(超高效液相色谱)作为HPLC分析方 法的一种突破，因采用了填料粒径更细(1.7μπι)和内径更小(2. Imm)的色谱柱，从而大大 短缩了分析时间，提高了分离效率，为中药多成分复杂体系的分析提供了一种新的强有力 工具。因此以UPLC分析为基础建立的中药指纹图谱与多指标成分定量分析，能够更快速、 更有效地实现对中药整体物质群的质量控制，将在中药质量控制中得到广泛应用。灯盏细辛又名灯盏花，为菊科植物短葶飞蓬[Erigeron breviscapus (Vant.) hand-Mazz.]的干燥全草，主产于云南、贵州、广西、四川等地，在《云南中草药》、《云南中草 药选》、《贵州中药资源》、《苗族医药学》、《中药大辞典》等均有记载。《中国药典》2005年版 对其有收载具有祛风散寒，活血活络止痛等功效；用于风寒湿痹痛，中风瘫痪，胸痹心痛。 目前，对于灯盏细辛的化学成分和药理活性已经进行了较多的研究。灯盏细辛中 的化学成分主要含有黄酮类、咖啡酸酯类、酚酸类化合物；灯盏细辛及其提取物可扩张冠状 动脉，增加心肌血流，减少血小板积聚、改善微循环；增强急性缺血性脑卒中患者神经功能 的恢复、对脑缺血有明显保护作用、对青光眼视神经有保护作用等。国内市场上已开发出 该药的冻干粉针、注射液、胶囊剂、片剂、滴丸等单味药制剂，主要用于治疗心脑血管疾病、 眼科疾病及老年性疾病，具有广阔的开发应用前景。研究表明，灯盏细辛的药理作用是其 所含多种化学成分的“多靶点”综合作用结果。但在现有灯盏细辛药材中多采用HPLC对 其主要活性成分野黄芩苷进行含量测定(刘鹏，周军，秦向阳，第四军医大学学报，2006， 27(9) 781 ；林燕芝，陈晓辉，唐星，药物分析杂志，2005，25 (5) :594 ；杨文字，张艺，段俊国， 成都中医药大学学报，2001，24(3) :37)，仅有一篇文献报道了灯盏细辛药材中3，5_双咖啡 酰氧基奎宁酸的测定(杨理会，张卫东，李廷钊，中国预防医学杂志，2005，6(3) :216)，未能 较好控制其所含的黄酮类、咖啡酸酯类、酚酸类成分，不能全面反映其质量；研究建立的灯 盏细辛HPLC指纹图谱因其所含化学成分复杂，不仅分离效果差而且分析时间过长，常需要60min 90min(高展，黄罗生，海峡药学，2005，17(3) 86 ；张平，中外健康文摘临床医师， 2008,5(7) :80 ；张旭，耿伯显，陈玲玲，中国医药工业杂志，2003，34(6) :270)。目前在分析 领域中，尚无利用UPLC建立灯盏细辛指纹图谱或多指标成分含量测定的相关文献报道。因 此，建立一种能快速、准确、全面地控制灯盏细辛药材质量的方法，实现对它物质群整体的 控制，具有重要的意义
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种灯盏细辛药材新的质量控 制方法，包括灯盏细辛指纹图谱与多指标成分定量分析，使灯盏细辛药材的质量控制技术 更为科学、全面，保证其稳定、均一、可控。本专利技术是通过以下技术方案实现的，包括灯盏细辛药材的指纹图谱检测方法和含量测 定方法；其中指纹图谱检测方法是采用UPLC测定，它具有24个特征峰；含量测定方法是选 取灯盏细辛中含量较高、具有代表性的多个成分采用UPLC-PDA法同时进行测定，定量指标 为其所含飞蓬苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩苷、3，4_ 二咖啡酰基奎宁酸、3，5_ 二咖啡酰基 奎宁酸、灯盏甲素、4，5-二咖啡酰基奎宁酸的全部或部分成分。灯盏细辛的指纹图谱检测方法由以下步骤组成(1)供试品溶液的制备精密称定灯盏细辛药材粉末约0. 25 0. 5g，精密加入 50%甲醇50mL，称定重量，加热回流1 3h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重 量，摇勻，离心，取上清液用微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。(2)色谱条件ACQUITY BEH为色谱柱；乙腈㈧-ο. 1 %磷酸⑶为流动相进行梯 度洗脱；流速为0. 2 0. 5mL. HIirT1 ；检测波长为290 300nm ；进样量为1 3 μ L。(3)标准指纹图谱的建立通过对10批次以上灯盏细辛药材UPLC指纹图谱的测 定，确定其共有指纹特征，并经中药指纹图谱相似度评价软件拟合建立灯盏细辛药材的对 照指纹图谱。(4)指纹图谱的质量控制将样品的UPLC指纹图谱与标准指纹图谱比较。计算相 似度应不得小于0.9。灯盏细辛的含量测定方法由以下步骤组成(1)对照品溶液的制备分别精密称取对照品飞蓬苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩 苷、3，4-0- 二咖啡酰基奎宁酸、3，5-0- 二咖啡酰基奎宁酸、灯盏甲素和4，5-0- 二咖啡酰基 奎宁酸中的几个或全部适量置容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备 液；精密吸取对照品贮备液，置容量瓶中并加50%甲醇定容，制成混合对照品溶液。(2)供试品溶液的制备精密称定粉碎过40目筛的灯盏细辛样品约0. 5g，精密加 入50%甲醇50mL，称定重量，加热回流2h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量， 摇勻，离心，取上清液用0. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。(3)色谱条件色谱柱ACQUITY BEH C18 (2. 1匪X 150匪，1. 7 μ m)；流动相乙 腈(A) -0. 1 % 磷酸(B)，梯度洗脱(0min,2% A ；1. 5min,5 % A ；1. 6min,8% A ；6min, 15 % A；6. Imin,18 % A；8. 5min,19 % A；10min，28 % A；13min，31% A；14min，80 % A；15. Imin, 100% ；16min,100% )；流速0. 35mL · mirT1 ；柱温 40°C ；PDA 检测器，检测波长为 260，326，335nm0(4)测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1 3μ L，注入液相色谱，测 定，记录16分钟的色谱图，即得。灯盏细辛药材指纹图谱检测方法中，优选的色谱条件为色谱柱ACQUITYBEH C18(2. 1讓 X15(kim，l. 7μπι)；流动相乙腈(A) -0. 磷酸(B)，梯度洗脱(0min,2% A ； 1. 5min,5% A ；1. 6min,8% A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灯盏细辛药材的质量控制方法，其特征在于：该方法包括灯盏细辛药材的指纹图谱检测方法和含量测定方法；其中指纹图谱检测方法是采用ＵＰＬＣ测定，它具有２４个特征峰，归属了８个特征峰；含量测定方法是采用ＵＰＬＣ－ＰＤＡ法同时测定灯盏细辛中所含的飞蓬苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩苷、３，４－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸、３，５－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸、灯盏甲素、４，５－Ｏ－二咖啡酰基奎宁酸全部或部分成分的含量。

【技术特征摘要】
1.一种灯盏细辛药材的质量控制方法，其特征在于该方法包括灯盏细辛药材的指纹 图谱检测方法和含量测定方法；其中指纹图谱检测方法是采用UPLC测定，它具有24个特征 峰，归属了 8个特征峰；含量测定方法是采用UPLC-PDA法同时测定灯盏细辛中所含的飞蓬 苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩苷、3，4-0_ 二咖啡酰基奎宁酸、3，5-0_ 二咖啡酰基奎宁酸、灯 盏甲素、4，5-0-二咖啡酰基奎宁酸全部或部分成分的含量。2.根据权利要求1所述的灯盏细辛药材的质量控制方法，其特征在于所述的指纹图谱 检测方法由以下步骤组成(1)供试品溶液的制备精密称定灯盏细辛药材粉末约0.25 0. 5g，精密加入50%甲 醇50mL，称定重量，加热回流1 3h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇勻， 离心，取上清液用微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。(2)色谱条件ACQUITYBEH为色谱柱；乙腈(A)-O. 磷酸(B)为流动相进行梯度洗 脱；流速为0. 2 0. 5mL · miiT1 ；检测波长为290 300nm ；进样量为1 3 μ L。(3)标准指纹图谱的建立通过对10批次以上灯盏细辛药材UPLC指纹图谱的测定，确 定其共有指纹特征，并经中药指纹图谱相似度评价软件拟合建立灯盏细辛药材的标准指纹 图谱。(4)指纹图谱的质量控制将样品的UPLC指纹图谱与标准指纹图谱比较。经中药指纹 图谱相似度评价软件计算相似度应不得小于0. 9。3.根据权利要求1所述的灯盏细辛药材的质量控制方法，其特征在于所述的含量测定 方法由以下步骤组成(1)对照品溶液的制备精密称取对照品飞蓬苷、绿原酸、灯盏花苷、野黄芩苷、3， 4-0- 二咖啡酰基奎宁酸、3，5-0- 二咖啡酰基奎宁酸、灯盏甲素、4，5-0- 二咖啡酰基奎宁酸 中的几个或全部适量置容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液；精 密吸取对照品贮备液，置容量瓶中并加50%甲醇定容，制成混合对照品溶液。(2)供试品溶液的制备精密称定粉碎过40目筛的灯盏细辛样品约0.5g，精密加入 50%甲醇50mL，称定重量，加热回流2h，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇 勻，离心，取上清液用0. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。(3)色谱条件色谱柱ACQUITYBEH C18 (2. ImmX 150mm, 1· 7 μ m)；流动相乙腈 (A) -0. 1 % 磷酸(B)，梯度洗脱(0min,2% A ；1. 5min,5 % A ；1. 6min,8% A ；6min, 15 % A ； 6.Imin,18 % A ；8.5min,19 % A ；10min，28 % A ；13min，31 % A ；14min，80 % A ；15.Imin, 100% ；16min,100% )；流速0. 35mL · ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永林，官志忠，郑林，齐晓岚，兰燕宇，王爱民，李勇军，何迅，黄勇，廖尚高，傅晓钟，周雯，刘童，
申请(专利权)人：贵阳医学院，
类型：发明
国别省市：52[中国|贵州]