本发明专利技术公开了灯盏细辛提取物在制备抑制β-淀粉样多肽聚集及纤维形成的药物中的用途，所述的灯盏细辛提取物是由菊科植物灯盏细辛的全草提取制备的含有黄酮类化合物和咖啡酰基奎宁酸酯类化合物的总酚提取物。实验研究表明，灯盏细辛提取物能显著抑制Aβ1-42的聚集，并在细胞内改善因Aβ1-42诱导产生的细胞凋亡、炎症，通过清除ROS(如MDA)，降低细胞内氧化应激，从而达到对神经细胞的保护作用，增加神经细胞活力；同时，灯盏细辛提取物本身对神经细胞毒性很小；因此，灯盏细辛提取物可用于由于β-淀粉样多肽聚集和纤维形成引起的相关疾病的治疗或预防药物制备中。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及灯盏细辛提取物在制备抑制β -淀粉样多肽聚集及纤维形成的药物中的用途，属于中药
技术介绍
阿尔茨海默症(Alzheimers Disease, AD)是ー种发生于老年人的原发性中枢神经系统退化性疾病，其主要病理特征包括大脑局部，尤其是海马和皮层神经元退行性变化， 細胞内神经原纤维缠结和細胞外老年斑沉淀。AD的发病率高，给病人的生活和工作带来了很多不便，给个人、家庭、社会造成了沉重的社会负担和经济负担。研究AD的发病机理，揭示其病理生理过程，提供进ー步的治疗机会及新药物的开发具有重大的社会价值和经济价值，有着重要的研究意义。关于AD的病理损伤过程提出了很多假说(Kaltschmidt B，et al. Proc Natl Acad Sci USA，1999，96 (16) :9409-9414)。轴浆运输障碍导致的神经退行性疾病假说认为，相关基因突变导致Tau蛋白聚集态结构变化及功能改变是AD的诱因。胆固醇变化学说则认为胆固醇稳态改变是引起突触可塑性损害、神经元退化等AD病理变化的关键原因，淀粉样斑块、Tau磷酸化及細胞骨架、氧化压力等变化都是针脑内胆固醇动力学变化的代偿反应。 Αβ (β-amyloid pepide, β -淀粉样多肽)假说认为，AD是ー种由于基因缺陷直接或间接改变淀粉样前蛋白(APP)表达或蛋白酶解过程从而影响Αβ聚集稳定性的病理综合征，Αβ 产生和清除之间的平衡逐渐改变，聚集态的Αβ累积引发连串的复杂反应，包括突触/突起的变化，Tau蛋白磷酸化，递质丢失，神经胶质增生和炎症反应等，最终出现神经元功能失调、死亡，斑块形成，神经原纤维缠积等病理现象。随着对AD研究的深入，关于疾病发生的A β假说得到了深入的发展，越来越多的证据显示Αβ可能是AD发生的原发性病理因子。首先几乎在所有AD病人的脑中都发现了大量的淀粉样斑块沉积和神经末梢退化等改变，而在与学习记忆相关的关键区域斑块的数量直接与脑カ损害程度成正比。老年斑的主要毒性成分即为淀粉样前体(APP)产生的 β -淀粉样肽，早期的A β弥散性斑块类似于胆固醇脂肪纹，而成熟的老年斑与动脉粥样硬化斑块相似。人类的其他淀粉样变性疾病，往往只要抑制病源性淀粉肽的产生就能够成功地治疗这类疾病，也给研究人员带来希望，一旦阐明Αβ的发生发展机制就有可能找到治疗AD的方法，甚至解开人类学习记忆的谜底。因此，若能够①抑制Αβ肽的形成；②抑制 Αβ的聚集(抑制Αβ的神经毒性)，加速Αβ的降解与清除；便能够减轻AD患者的症状， 甚至达到治疗AD病的目的。同吋，Αβ聚集和纤维形成还能导致血管性淀粉样病变，进而诱发中分等疾患。迄今，尚未找到能有效根治血管性淀粉样病变的药物。灯盏细辛为菊科飞蓬属植物短葶飞蓬(Erigeron breviscapus)，能够散寒解表， 祛风除湿，活络止痛。常用于感冒头痛，牙痛，胃痛，风湿疼痛，脑血管意外引起的瘫痪等。在临床上常以灯盏花为主，结合其它中西医疗法，治疗高血压脑溢血、脑血栓形成、脑栓塞、多发性神经炎、慢性蛛网膜炎等后遗瘫痪症。已有多个专利围绕灯盏细辛在治疗心脑血管方面的应用(中国专利技术专利 ZL03117754、ZL01115358. X、ZL0213750. X、ZL03117753. 0 等)，同时，还有关于灯盏细辛用于治疗血管性老年痴呆症报道(李富慧，灯盏细辛注射液联合吡拉西坦治疗血管性痴呆临床研究，中国实用神经疾病杂志，2011，14 :10-13)。但关于灯盏细辛抑制β -淀粉样多肽聚集和纤维形成活性以及基于β -淀粉样多肽假说用于抗老年痴呆药物均未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在干提供一种灯盏细辛提取物在制备药物中的新用途。研究表明， 灯盏细辛提取物对Αβ的聚集有显著的抑制作用，并且对Αβ诱导的神经细胞毒性有良好的保护作用，可用于制备抑制β-淀粉样多肽聚集及纤维形成的药物。本专利技术的技术方案灯盏细辛提取物在制备抑制β -淀粉样多肽聚集及纤维形成的药物中的用途。灯盏细辛提取物还可用于制备治疗或预防由于β-淀粉样多肽聚集和纤维形成引起的病症的药物。前述的灯盏细辛提取物是由菊科植物灯盏细辛(Erigeron breviscapus)的全草提取制备的含有黄酮类化合物和咖啡酰基奎宁酸酯类化合物的总酚提取物。前述灯盏细辛提取物是这样制备的取灯盏细辛全草，粉碎，用低级醇溶剂提取 2 3次，合并提取液，减压浓缩回收溶剤，浓缩液用水稀释，过滤，滤液上苯乙烯类大孔吸附树脂，水洗脱至无色后，用30% 95%的醇溶液洗脱，洗脱体积为3 20倍柱体积；洗脱液浓縮，用10%氢氧化钠溶液调pH值为7. 0 7. 5，然后喷雾干燥，得棕黄色粉末，即灯盏细辛总酚提取物。前述灯盏细辛提取物也可以这样制备取灯盏细辛全草，粉碎，用低级醇溶剂提取 2 3次，合并提取液，减压浓缩回收溶剤，浓缩液用水稀释，先用120号汽油萃取脱脂，水层用乙酸乙酯萃取3 4次，合并乙酸乙酯部分，浓縮，除去溶剤，得棕黄色粉末，即灯盏细辛总酚提取物。前述灯盏细辛提取物制备时所用低级醇为甲醇或乙醇。前述灯盏细辛提取物中含有的黄酮类化合物中野黄芩苷的含量为0. 50%。前述灯盏细辛提取物中含有的咖啡酰基奎宁酸酯类化合物中总咖啡酰基奎宁酸酷的含量为10% 99%。前述咖啡酰基奎宁酸酯类化合物中含有4，5- ニ咖啡酰基奎宁酸酷、3，5- ニ咖啡酰基奎宁酸酷、1，3_ ニ咖啡酰基奎宁酸酷、1，5_ ニ咖啡酰基奎宁酸酯和飞蓬酯乙。为了确保本专利技术的效果，申请人对所述的灯盏细辛提取物进行了药理实验研究， 具体如下1、灯盏细辛提取物及其中主要成分对β -淀粉样多肽聚集的抑制作用A β !_42冻干粉用少量0. 1 %氨水溶解，再加入50mM的PBS (pH = 7. 4)缓冲溶液，配成ImM的A βト42储备液，再用50mM的PBS (pH = 7. 4)缓冲溶液稀释，配成含A βト4245 μ M的溶液，或者分別加入100 μ g/mL的下列样品灯盏细辛提取物、野黄芩苷、飞蓬酯乙、4，5-ニ 咖啡酰基奎宁酸酷、3，5- ニ咖啡酰基奎宁酸酷、1，3- ニ咖啡酰基奎宁酸酷、1，5- ニ咖啡酰基奎宁酸酷，每种样品溶液同时配制18份，每份体积200 μし不同样品溶液各取2份分别在37°C水浴下孵育0、1、2、4、6、8、12、24、36小吋。孵育到规定时刻吋，取出样品溶液，用冰浴冷却猝灭聚集反应。然后加入含3 μ M的荧光黄ThT的PBS缓冲液200 μ L，混合均勻，马上在F-4600荧光分光光度计上测定其荧光值。激发波长为445 λ m,发射波长为490 λ m，一个时间点上每个样品取2份溶液測定，取平均值。如附图1所示，Ai^_42溶液在37°C水浴下孵育不同的时间后，在溶液中开始形成聚集体，体系中加入ThT后，与聚集的A β ^42结合，在445 λ m光线激发下，于490 λ m处产生最大吸收的发射光，其荧光值随着Αβト42聚集度的増加而增加。当到达一定时间后，聚集基本完全，荧光值也基本稳定。从图1可看出，12小时以后，聚集基本达到平衡。当样品溶液中含有一定浓度的聚集抑制剂时，A βト42聚集程度受到抑制，荧光值显著下降。从附图1可看出，灯盏细辛提取物能显本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨庆雄，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：
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