本发明专利技术公开了一种检测胰腺癌的基因芯片，包括固相载体和探针，所述探针与待测胰腺癌相关基因的核苷酸序列和／或其互补序列进行杂交，所述待测胰腺癌相关基因包括Ｐ２１，ｓｍａｄ４，Ｐ１６，ｃ－Ｍｙｃ，ｂｃｌ－２，Ｆａｓ，ＣＡ１９－９，ＳＥＲＰＩＮＢ９，ＲＨＯＴ１和Ｐ５３基因。本发明专利技术还公开了应用所述基因芯片对胰腺癌进行检测的方法。本发明专利技术的基因芯片能够在胰腺癌发生发展早期即进行有效检测，以提高治愈率降低死亡率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种基因芯片，尤其涉及一种检测胰腺癌的基因芯片及其应用。
技术介绍
胰腺癌是常见恶性肿瘤之一，近年来发病率呈升高趋势，且缺乏有效的诊断方法 和治疗措施，因此造成胰腺癌病人发现晚、预后差、死亡率高。对普通和高危人群进行定期 筛查，是提高早期诊断率并及时发现疾病的有效措施之一。事实上，胰腺癌的发生发展涉及多个基因表达改变。如果在胰腺癌发生早期就从 基因水平对癌症进行诊断，检测重要相关基因的表达变化，将有利于癌症的早期发现和早 期治疗，提高病人的生存率。基因芯片是人类基因组计划带来的最具应用价值的科研成果，它融合了生命科 学、化学、微电子技术、计算机科学、统计学和生命信息学等多种学科的最新技术。随着微加 工技术的发展，高密度寡核苷酸芯片最高密度可达上百万个探针，因此基因芯片通量水平 并不受芯片技术本身制约，而是受样本的处理和基因芯片设计方法的限制。基因芯片作为 一种高通量的、先进的分子生物学技术，可应用于疾病基因表达变化的检测，其具有高度的 灵敏性和准确性、快速便捷、并可同时检测多个基因表达变化等优点。目前有关胰腺癌的免疫学诊断产品及PCR产品单一标志物检测灵敏度和特异性 存在不能兼顾的缺点，鉴于目前检测胰腺癌的传统方法效果不佳，有必要利用基因芯片技 术开发一种检测胰腺癌的基因芯片，从而能够在胰腺癌发生发展早期即进行有效诊断，以 提高治愈率降低死亡率。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种检测胰腺癌的基因芯片，能够在胰腺癌发生 发展早期即进行有效检测，以提高治愈率降低死亡率。为此，本专利技术还要提供应用该基因芯 片检测胰腺癌的方法。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现在本专利技术的一个方面，提供了一种检测胰腺癌的基因芯片，包括固相载体和探针， 所述探针与待测胰腺癌相关基因的核苷酸序列和/或其互补序列进行杂交，所述待测胰腺 癌相关基因包括 P21，smad4, P16, c_Myc，bcl_2，Fas, CA19-9, SERPINB9, RHOTl 和 P53 基因。本专利技术中所述固相载体可选用领域周知的载体，只要所述载体与所述反应物相 容，不会影响检测结果就可以。优选的，本专利技术所述固相载体选材为玻片、硅片、硝酸纤维素 膜、尼龙膜和高分子材料中的一种或它们的任意组合。所述探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。所述探针的长度没 有限制，只要能完成与目的核苷酸序列特异性结合。由于不同的探针长度对杂交效率、信号 特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基 对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对之间的为最佳。所述探针的自身互补序列最好少于6个碱基对，以免影响杂交效率。本专利技术基因芯片的探针为DNA，包括(1)与待测P21基因杂交的(a) SEQ ID NO :1所示序列，(b) SEQ ID N0:1所示序 列的互补链，(c)与SEQ ID NO 1所示序列有至少70%同源性的序列；(2)与待测smad4基因杂交的(a) SEQ ID NO :2所示序列，(b) SEQ ID NO :2所示 序列的互补链，(c)与SEQ ID NO 2所示序列有至少70%同源性的序列；(3)与待测P16基因杂交的(a) SEQ ID NO :3所示序列，(b) SEQ ID NO 3所示序 列的互补链，(c)与SEQ ID NO 3所示序列有至少70%同源性的序列；(4)与待测c-Myc基因杂交的(a) SEQ ID NO :4所示序列，(b) SEQ ID NO :4所示 序列的互补链，(c)与SEQ ID NO :4所示序列有至少70%同源性的序列；(5)与待测bcl-2基因杂交的(a) SEQ ID NO :5所示序列，(b) SEQ ID NO :5所示 序列的互补链，(c)与SEQ ID NO 5所示序列有至少70%同源性的序列；(6)与待测Fas基因杂交的(a) SEQ ID NO :6所示序列，(b) SEQ ID NO :6所示序 列的互补链，(c)与SEQ ID NO 6所示序列有至少70%同源性的序列；(7)与待测CA19-9基因杂交的(a) SEQ ID NO 7所示序列，(b) SEQ ID NO 7所示 序列 的互补链，(c)与SEQ ID NO 7所示序列有至少70%同源性的序列；(8)与待测 SERPINB9 基因杂交的(a) SEQ ID NO 8 所示序列，(b) SEQ ID NO 8 所 示序列8的互补链，(c)与SEQ ID NO 8所示8序列有至少70%同源性的序列；(9)与待测RHOTl基因杂交的(a) SEQ ID NO :9所示序列，(b) SEQ ID NO :9所示 序列的互补链，(c)与SEQ ID NO 9所示序列有至少70%同源性的序列；(10)与待测P53基因杂交的(a) SEQ ID NO 10所示序列，(b) SEQ ID NO 10所示 序列的互补链，(c)与SEQ ID NO :10所示序列有至少70%同源性的序列。优选的，本专利技术基因芯片的探针选自SEQ ID NO 1 SEQ ID NO 10所示序列。所述探针可通过连接臂固定于固相载体上。连接臂可以为探针形成双链的部分 提供一个自由的空间以减少空间位阻，有助于杂交反应的进行。连接臂 越长，杂交效率越高。典型的连接臂包括15 30个功能基团长度。连接臂可以选用适当 形式的功能基团，如Poly T(A、C或G)、C原子或聚乙烯乙二醇与Poly T(A、C或G)的嵌合 体、聚乙醇、聚酷、聚氨、聚硫酸酷和其组合物。所述探针或连接臂通过连接分子固定于固相载体上。探针固定到载体上可以通过 C-C键实现，例如，聚三氟氯乙烯表面；或更好的用硅氧烷键(玻璃或二氧化硅作支持物时 使用)。硅氧烷键键合可以通过支持物和连接分子的三氯甲硅烷基或三烷氧基甲硅烷基等 基团反应完成。氨基烷基硅烷、轻基烷基硅烷、2—轻乙基一氨丙基三乙氧基硅烷、轻乙基一 氨丙基三乙氧基硅烷或轻丙基三乙氧基硅烷都是很有用的表面吸附基团。所述探针可以被修饰，修饰方法可以是5’ -NH2修饰、5’ -SH修饰、5’ -Poly T(A、C 或G)修饰、5’-生物素修饰、3’-NH2修饰、3’-SH修饰、3’-Poly T(A、C或G)修饰和3’-生 物素修饰等。所述探针可以有一条或几条，甚至全部都是经过标记的，所述标记包括荧光素标记、生物素标记、放射性元素标记、酶标记和荧光共振能量转移标记。在本专利技术的另一方面，提供了一种应用上述基因芯片对胰腺癌进行检测的方法， 包括如下步骤(1)在固相载体表面点载与待测胰腺癌相关基因的核苷酸序列和/或其互补序列 进行杂交的探针；(2)抽提待测样品的总RNA，纯化总RNA ；(3)反转录合成cDNA，标记cRNA合成，纯化cRNA ； (4)标记cRNA样品，纯化标记的cRNA样品；(5)cRNA样品片段化；(6)芯片杂交；(7)芯片洗涤，芯片扫描，检测杂交反应的结果。本专利技术步骤(3)和步骤(4)中合适的标记包括荧光标记、放射性同位素标记、发色 团、发光体、FRET、酶、生物素或有特殊结合配体的配基。本专利技术方法的芯片杂交可本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测胰腺癌的基因芯片，包括固相载体和探针，其特征在于，所述探针与待测胰腺癌相关基因的核苷酸序列和／或其互补序列进行杂交，所述待测胰腺癌相关基因包括Ｐ２１，ｓｍａｄ４，Ｐ１６，ｃ－Ｍｙｃ，ｂｃｌ－２，Ｆａｓ，ＣＡ１９－９，ＳＥＲＰＩＮＢ９，ＲＨＯＴ１和Ｐ５３基因。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：江华，
申请(专利权)人：上海市东方医院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。