本发明专利技术公开了一种用于检测ＧＤＭ易感人群的基因芯片、检测试剂和试剂盒，本发明专利技术用于检测ＧＤＭ易感人群的基因芯片、检测试剂和试剂盒构建了筛查ＧＤＭ各相关基因多态性高危人群的基因芯片检测系统，可快速、准确检测临床样本中的ＧＤＭ各相关ＳＮＰｓ，通量大、灵敏度高，对于ＧＤＭ的临床诊断和高危人群早期筛查、早期预防干预有重要的意义，可广泛用于临床高效筛查ＧＤＭ高危人群。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测
，涉及一种基因芯片(或称为DNA微阵列)及其检测试 剂和试剂盒，尤其涉及一种妊娠期糖尿病易患人群SNP检测和分型的基因芯片及其检测试 剂和检测分型试剂盒。
技术介绍
妊娠期糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus GDM)是 指妊娠期间发生的或首 次发现的糖尿病，其发生率世界各国报道为 14%。我国GDM的发生率已由1996年的 2%增加到2003年的4.6%。现有证据表明中国女性是患GDM的最危险人群之一。GDM的 主要并发症为巨大儿、羊水过多、妊娠期高血压疾病、感染、早产、酮症酸中毒等。且常由于 难产而致新生儿头颅血肿、帽状腱膜下血肿、臂丛神经损伤、锁骨骨折等。GDM不但会造成 孕妇一系列代谢紊乱，也会造成胎儿、新生儿生长发育异常，甚至在儿童期、青春期以后出 现更远期的影响，其中最多见的是糖代谢异常问题。糖尿病母亲所生婴儿出生后极易发生 低血糖、器官发育不成熟现象、脏器功能低于实际孕龄、常有脑发育不成熟现象。某些GDM 患者的孩子虽然智能发育在正常范围，却存在一些心理行为问题，如自述各种不适的感觉， 学习困难，不同程度的焦虑、抑郁等。由外GDM患者产后随访转变为2型糖尿病的发生率为 60% 70%，母亲糖尿病带来的短期和长期影响以及不断上升的GDM患病率，使之成为在 不远的将来困扰中国人健康的严重问题之一。在孕期甚至更早期及时加以干预，不仅可以降低甚至消除GDM对母儿的不良影 响，可能成为本世纪最重要的医疗预防措施之一。GDM是多基因遗传性疾病，遗传学上称之 复杂病(complex disease)，它具有下列特点参与发病的基因不止1个，每个基因的作用 程度不同，起主要作用者称为主效基因，作用较小者为次要基因，不同基因之间存在交互作 用；各个致病易感基因作用于代谢的不同环节。目前国内外的研究表明下列几种基因可能 与2型糖尿病相关，亦有可能与GDM有关(1)蛋白激酶Cl亚型基因，用单核苷酸多态性 (singlenucleotide polymorphism, SNP)方法发现其 rs36045 (A/G)与 2 型糖尿病相关；应 用连锁不平衡分析了位于rs36045上、下游共15个SNP的单倍型与2型糖尿病的相关性， 结果发现有5个SNP组成的C-G-T-A-G单倍型在病例组显著增多，进一步证实了该基因可 能为所研究人群的易感基因；(2)ALDHIAI-E3/56基因，在糖尿病和非糖尿病人群中，用高 频SNP筛查基因型，发现该基因存在非常显著性。该基因可能参与中国汉人2型糖尿病的 易感性；(3)编码脂肪细胞分化相关蛋白的基因(ADFP)基因，该基因对脂肪组织的分化和 功能非常重要，特别是与脂肪、胰岛素抵抗的形成有关。该基因突变有可能参与胰岛素抵抗 和2型糖尿病形成；(4) CAPN10基因，其产物是calpain-10蛋白，它可能与细胞内钙离子介 导的信号传导有关。该基因的单核苷酸多态性位点与2型糖尿病发病有关。统计学数据分 析，该基因的SNP43与组织胰岛素敏感性及糖负荷过程中胰岛素水平相关，该基因可能为 中国人2型糖尿病的相关基因；(5) IL-6基因启动子C-174G的多态性位点与2型糖尿病的 发生有很大关联。CC型与GC型相比，IL-6的转录水平更高，使得血清中IL-6水平增高，而IL-6又可以降低体内一些保护因子，如脂联素、瘦素等，从而使得个体更容易发生糖尿病。 基于上述这些基因可能与GDM发生有关，而国内外尚未涉及用基因芯片探针来预 测糖尿病高危人群的研究。本专利设计了检测GDM易感人群的基因芯片系统，确立SNP模式 和GDM对应关系。通过基因芯片可迅速便捷的对普通人群进行筛查，可在孕早期甚至孕前 检查就预测出GDM的高危人群，从而通过饮食控制和运动疗法尽早干预，减轻甚至消除GDM 对母儿的近远期影响。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用于检测GDM易感人群的基因 芯片、检测方法以及测试剂和试剂盒。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的—种用于GDM易感人群检测与分型的基因芯片，包括固相载体和固定在其上的寡 和谷氨酸探针，其中该芯片上的寡核苷酸探针是针对GDM易感SNP位点检测的DNA片段。上述SNP 位点包括rsl799884、rs2144908、rsl800629、rs361525、rs266729、 rsl7300539、rsl801278、rs4994 和 rsl2255372。它们的序列具有 Seq IDNo. 1-No. 9 所示的 核苷酸序列的DNA片段。一种包含上述基因芯片的检测试剂，该检测试剂还包含用于扩增各GDM相关SNPs 的PCR引物，这些PCR引物具有Seq ID No. 82_Νο· 90的核苷酸序列。一种用于GDM易感人群检测与分型的试剂盒，至少包括基因芯片，PCR扩增引物， 阴性对照和阳性对照样本。该试剂盒还包括杂交盒，杂交液。本专利技术对不同GDM易感相关SNP位点设计特异性探针进行检测，通过基因芯片杂 交结果进行判读，预测检测样本疾病易感性。本专利技术的有益效果是本专利技术用于检测GDM易感人群的基因芯片、检测试剂和试 剂盒构建了筛查GDM各相关基因多态性高危人群的基因芯片检测系统，可快速、准确检测 临床样本中的GDM各相关SNPs，通量大、灵敏度高，对于GDM的临床诊断和高危人群早期筛 查、早期预防干预有重要的意义，可广泛用于临床高效筛查GDM高危人群。附图说明图1为基因芯片的一般制作流程图；图2为PCR扩增流程图。 具体实施例方式以玻璃基质为载体的DNA芯片技术采用的是微量点样DNA微阵列技术，其基本原理如 下:DNA探针为含有特定DNA序列的寡核苷酸片段，其末端带有氨基标记。经化学修饰处理的玻 璃基质基片带有活化酸基基团，可以与DNA探针附带的修饰氨基共价结合，利用这种方法可将 DNA探针按一定的排列规律固定在基片表面。其主要优点是简便易行，能根据使用者的要求简 便的制出符合目的的芯片。在此基础上结合PCR技术对微量待测样品进行大量快速扩增，扩增 后含有荧光标记物的待测样品与芯片上的探针进行特异性杂交和扫描，此后对杂交信号强弱 和有无进行分析，即可判断样品中靴基因的数量和性质，基因芯片的制作流程如图1所示。本专利技术的基因芯片包括一基底和固定于该基底上的探针，固定于基片上的探针为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测ＧＤＭ易感人群的基因芯片，包括固相载体和固定在该载体上的寡核苷酸探针，其特征在于，该芯片上的探针可分别与ＧＤＭ相关ＳＮＰｓ杂交。所述固相载体为经过表面化学基团修饰的玻璃基质，所述探针的５’末端进行氨基标记。所述ＧＤＭ相关ＳＮＰｓ的ＤＮＡ片段具有Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．１－Ｎｏ．９的核苷酸序列。所述探针具有Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．１０－Ｎｏ．８１的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
一种用于检测GDM易感人群的基因芯片，包括固相载体和固定在该载体上的寡核苷酸探针，其特征在于，该芯片上的探针可分别与GDM相关SNPs杂交。所述固相载体为经过表面化学基团修饰的玻璃基质，所述探针的5’末端进行氨基标记。所述GDM相关SNPs的DNA片段具有Seq ID No.1 No.9的核苷酸序列。所述探针具有Seq ID ...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈丹青，陈怀增，柴芸，方勤，何奔腾，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属妇产科医院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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