禽霍乱油乳剂灭活苗及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种禽霍乱油乳剂灭活苗及其制备方法，该疫苗用于预防禽霍乱的发生，本发明专利技术的实质内容是取禽源的多杀性巴氏杆菌接种血琼脂斜面，３７℃培养２４小时，检验纯正，作为种子菌液接种鸡胚回收尿囊液和胚体，经灭活后制成水相（抗原）再与复方矿物油（１０＃白油）充分混合制成油包水乳剂而得，本发明专利技术提供的疫苗可有效保护家禽免受强毒株的攻击致死。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及含有抗原或抗体的医用制品，具体讲是预防禽霍乱发生的疫苗及其制备方法。禽霍乱是鸡最常见的传染病。它发病率高、死亡率高、往往造成家禽全群覆没、使养禽业遭受重大经济损失。由于禽群一旦感染，病菌就在禽群中长期存在，一旦停药又会再次发病，造成死亡率增高，药费增加，降低了经济效益。本专利技术的目的在于提供一种禽霍乱油乳油剂灭活苗，给家禽注射以保护家禽免受强毒株的攻击，增强免疫效果。为实现上述目的，本专利技术的技术方案是一种禽霍乱油乳剂灭活苗，该疫苗是将多杀性巴氏杆菌经鸡接种，回收鸡胚尿囊液和胚体，用其菌液经灭活作成水相与矿物油混合成油包水灭活苗。上述疫苗是通过以下方法制备的取禽源的多杀性巴氏杆菌接种血琼脂斜面，37℃培养24小时，经检验纯正，作为种子使用；以适量的种子培养物接种12日龄鸡胚经37℃孵化18～24小时，将致死鸡胚尿囊液和胚体回收，取样纯检，并计活菌数，用福尔马林灭活制得水相；将上述水相与矿物油按1∶3比例经胶体磨充分混合后制成油乳剂灭活苗。将多杀性巴氏杆菌经鸡胚接种，回收鸡胚尿囊液和胚体，其中的细菌含量可达100亿／ml，用其水相与矿物油制成疫苗，这样，可大大降低培养细菌的费用，还可提高细菌数量(浓度)，增强免疫效果；疫苗的制备方法具有操作简单、快速、成本低等特点。从而为禽霍乱疫苗的制备开辟了一条新途径。以下结合实施例对本专利技术作进一步的详细说明。实施例禽霍乱油乳剂灭活苗，它是油包水结构的灭活苗，采用多杀性巴氏杆菌高浓度菌液经福尔马林灭活制成，其油包水结构的载体为复方10#白油。本专利技术的疫苗是通过以下具体步骤制备的。步骤一制造禽霍乱油乳剂灭活苗所用的禽源多杀巴氏杆菌系从禽霍乱发病死亡鸡的肝脏分离而得，经鉴定其血清型为A型。菌种毒力用含0．1％裂解血及4％健康动物血清的马丁琼脂37℃24小时培养的菌液1～5个菌，肌肉注射，可致死4～6月龄的敏感鸡。步骤二取上述细菌接种血琼脂斜面，37℃培养24小时，经检验纯正，作为种子使用。步骤三制备制苗菌液，取上述种子培养物适量给12日龄健康鸡胚接种，置37℃孵化18～24小时后照蛋，经细菌致死的鸡胚用于回收菌液，收集尿囊液和胚体，将回收的菌液纯检和活菌计数，取样后加入福尔马林，一般用4％甲醛灭活，随加随摇，使甲醛最终浓度为0．1％，37℃灭活24小时，该菌液每100份加入4份吐温--80制成水相。其它一些制剂也可以进行灭活，具体方法aβ--丙内脂灭活，在菌液中加入10％的β--丙内脂，使其最终浓度为1／1500；b乙酰苯乙烯亚胺(Acety lethy lenimine--AEI)灭活，在菌液中加入10％的AEI，使最终浓度为0．1％，置30℃温箱中灭活8小时取出，加入20％Na2SO3·5H2O溶液，使最后含量为0．5％以中和AEI。另外，吐温--80(TWeen--80)属免疫增强剂、稳定剂，其化学名为聚山梨醇脂--80，同类品有吐温--20。步骤四将94份的矿物油(10#白油)加入6份司本--80混合后每100ml再加入2克硬脂酸铝制成油相。上述司本--80(Span--80)的化学名为失水山梨醇单油酸脂，用作乳化剂和增溶剂，同类品有Span--60，Span--40，Span--20。硬脂酸铝的用途是油质注射剂的助悬剂。步骤五将上述水相与油相按1∶3的比例经胶体磨充分混合制成油包水结构的灭活苗。取上述油乳剂灭活苗1ml给2～8月龄健康敏感鸡5只注射，于14天后连同对照鸡2只攻击致死量的A型多杀性巴氏杆菌强毒株，观察14天，免疫鸡应保护4／5以上，对照鸡2／2死亡。由此可见，本专利技术的实质在于用种子菌液接种鸡胚回收尿囊液和胚体，经灭活后制成水相(抗原)再与复方矿物油(10#白油)充分混合制成油包水乳剂而制得疫苗，本疫苗可保护家禽免受强毒株的功击致死。权利要求1．一种禽霍乱油乳剂灭活苗，其特征在于该疫苗是将多杀性巴氏杆菌经鸡接种，并回收鸡胚尿囊液和胚体，用其菌液经灭活作成水相与矿物油混合成油包水灭活苗。2．根据权利要求1所述的禽霍乱油乳剂灭活苗，其特征在于灭活苗的油包水结构的载体为复方10#白油。3．一种用于制备权利要求1所述的禽霍乱油乳剂灭活苗的方法，其特征在于取禽源的多杀性巴氏杆菌接种血琼脂斜面，37℃培养24小时，经检验纯正，作为种子使用；以适量的种子培养物接种12日龄鸡胚，经37℃孵化18～24小时，将致死鸡胚尿囊液和胚体回收，取样纯检，并计活菌数，用福尔马林灭活制得水相；将上述水相与矿物油按1∶3比例经胶体磨充分混合后制成油乳剂灭活苗。4．根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于将回收的菌液纯检和活菌计数后，取样加入甲醛溶液，使其含甲醛的最终浓度为0．1％，37℃灭活24小时，该菌液100份加入4份的吐温--80制成水相。5．根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于将94份的矿物油(10#白油)加入6份的司本--80混合后每100ml再加入2克硬脂酸铝制成油相，以该油相与所述的水相按1∶3的比例充分混合制成油包水灭活苗。全文摘要本专利技术提供一种,该疫苗用于预防禽霍乱的发生,本专利技术的实质内容是取禽源的多杀性巴氏杆菌接种血琼脂斜面,37℃培养24小时,检验纯正,作为种子菌液接种鸡胚回收尿囊液和胚体,经灭活后制成水相(抗原)再与复方矿物油(10＃白油)充分混合制成油包水乳剂而得,本专利技术提供的疫苗可有效保护家禽免受强毒株的攻击致死。文档编号A61K39/02GK1205897SQ9811655公开日1999年1月27日 申请日期1998年8月5日 优先权日1998年8月5日专利技术者曾明华, 魏建忠, 蔡文波 申请人:曾明华, 魏建忠, 蔡文波本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种禽震乱油乳剂灭活苗，其特征在于：该疫苗是将多杀性巴氏杆菌经鸡接种，并回收鸡胚尿囊液和胚体，用其菌液经灭活作成水相与矿物油混合成油包水灭活苗。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾明华，魏建忠，蔡文波，
申请(专利权)人：曾明华，魏建忠，蔡文波，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]