鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗制造技术

鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，它是用因鸡葡萄球病死亡鸡之肝脏，在血液琼脂平板上选取的黄色ＣＴＱＳ－１菌株，经２．５％葡萄糖牛肉汤培养基培养，制成３００亿／毫升的种子菌液；再将种子菌液接种到０．２５％葡萄糖普通营养琼脂板上培养，然后用生理盐水冲洗菌苔，制成增菌菌液；经灭活、离心分离、去上清、制成８００亿／毫升的灭活菌液；最后以１∶１加入由白油、司班、吐组成的油乳剂，即成菌苗，该菌苗具有良好的免疫效果。（*该技术在2008年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鸡病菌苗制备。随着养鸡事业的发展和鸡场规模的扩大，鸡疫病的防治日显重要，常见的鸡霍乱等已得到基本控制。但是，自1984年以来，鸡葡萄球菌病逐渐发展，成为我国许多养鸡场危害最大的病疫。鸡葡萄球菌病都见于90日龄以下的鸡，对40～60日龄的鸡危害尤为严重，其发病死亡率达20～50%;尤其麻烦的是经投药治疗后的鸡极易旧病复发，而且延续时间较长，严重影响鸡的成活，给鸡场造成重大的经济损失。鸡葡萄球菌病症状及其危害(一)病症①病鸡胸腹部、大腿内侧、翅膀背侧等大块脱毛，表皮水肿甚至破溃;②剖检时，皮下湿润充血，有的皮下有数量不等的黄色或粉红色胶冻状液体，胸部及大腿内侧有弥漫性出血班点或条纹;③肝脏肿大，有黄色条纹，有的肝脏变黄或者呈淡红色。(二)危害①鸡发病后死亡严重，投药后很易产生抗药性，疗效明显降低，有的鸡经治疗后又复发;②在鸡病流行时，容易引起人的疾病，在投大量药物后，人和鸡都会产生抗药性。目前，由于金黄色葡萄球菌噬菌体分型相当复杂，技术尚末成熟，市场没有对鸡葡萄球菌病防治有效的菌苗。本专利技术旨在提供一种制苗成本低廉、免疫期长(2.5～3个月)的、且无不良反应的鸡葡萄球菌病菌苗，以提高幼鸡成活率和鸡场人员健康水平。本专利技术是这样实现上述目的的本人从长期的观察和实验发现金黄色葡萄球菌菌型与菌株的血浆凝固酶有至为密切，目前供分型用噬菌体仅对血浆凝固酶阳性菌株敏感，不裂解凝固酶阴性菌株。故决定采用血浆凝固酶阳性金黄色葡萄球菌菌株作为生产菌苗用菌种，利用自身生物反馈试制鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗。菌苗的制备方法和步骤如下(一)选取CTQS-1菌株，制备菌苗生产用的种子菌液从40～90日龄的葡萄球菌病鸡或因该病死亡之鸡摘取肝脏，在血液琼脂平板(或普通营养琼脂平板)划线培养，选取其中的金黄色菌落，经如下检验确为CTQS-1株者作为生产菌苗的菌株。CTQS-1菌株的验证方法①血浆凝固酶试验为阳性;②在结晶紫琼脂平板上的菌苔为土黄色;③高盐甘露醇琼脂平板上的菌落为桔黄色;④在血液琼脂平板上菌落为金黄色，有溶血环产生;○糖发酵试验时，能在1～2天内发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、产生酸而无气体产生而不能发酵木糖、已矛醇;与上述结果符合时，该菌株必为CTQS-1株。将CTQS-1菌株洗入2.5%葡萄糖牛肉汤培养基培养，制成浓度约为300亿个/毫升的种子菌液备用。(二)制备增菌菌液将步骤(一)所制的种子菌液接种到0.25%葡萄糖普通营养琼脂平板上，在37℃下培养18～20小时后，用无菌生理盐水冲洗菌苔，冲下的菌苔即为制苗用的增菌菌液。(三)灭活与无菌试验在由步骤(二)所制得的增菌菌液中，以千分之六的比例加入福尔马林溶液，在37℃下经24小时灭活。将经灭活的菌液接种在血清肉汤及普通营养琼脂培养基中，经5～7天培养，结果无菌生长者为合格。(四)配制油乳剂菌苗和治疗用注射液将由步骤(三)所得的灭活菌液用离心机分离，弃去上清，制成浓度为800亿个/毫升的灭活菌液。将此灭活菌液以1∶1的比例与油乳佐剂混合，并经高速匀浆乳化，即成预防用“鸡葡萄球菌油乳剂灭活菌菌苗”;所述油乳佐剂最好用白油、司班、吐温混合制剂，其中白油、司班、吐温在混合制剂中的重量比以90∶7.6∶2.4为佳。将800亿个/毫升的灭活菌液制成400亿个/毫升的水剂，即成治疗用注射液。实施例与效果本人按上述方案和步骤，多次分别制备了预防用“鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗和治疗用水剂。其安全性与疫力试验如下①安全试验取25日龄鸡11只，每只注射油乳剂菌苗2毫升，观察一周，结果无任何不良反应。②免疫效力试验取35日龄健康鸡40只，以每组十只分为第1、2、3、4组，每一组每只鸡分别注射菌苗(油乳剂)0、0.3、0.4、0.5毫升，16天后将各组鸡进行攻毒，每只鸡注射15亿个金黄色葡萄球菌(CTQS-1株)。一周后，注射0毫升的对照组死亡5只，4只发病，一只无病;第2组有8只健活，1只发病，1只胸部水肿;第3组与第4组均是9只健活，1只发病。③免疫期试验挑取35日龄健康鸡24只，其中12只注射0.5毫升油乳菌苗作为免疫组，另12只鸡作为对照组，每月对二组鸡的三只鸡进行攻毒。结果第一个月攻毒后，免疫组3只鸡都健活;对照组有1只死亡，1只发病，1只健活。第二个月攻毒后，免疫组3只鸡都健活;对照组2只死亡，1只健活。第三个月攻毒后，免疫组3只鸡都健活;对照组有2只发病、1只健活。第四个月攻毒后，免疫组3只鸡都健活;对照组有2只健活，1只发病。④免疫力产生时间对免疫鸡攻毒试验，证明本苗免疫力产生时间为注射菌苗的第7天开始。经采血、分离血清作试管凝集试验，证明在接种菌苗的鸡在第七天开始出现凝集抗体，效价为1∶2～1∶8;到第14天，凝集抗体上升到1∶16～1∶32;而对照鸡的凝集抗体一直为零。实验证明本菌苗毒性小，对鸡无不良影响，使用安全;凡注射菌苗的鸡都有较强的免疫力，保护率约为90%;本苗的免疫期效为2.5～3个月，有效地控制了葡萄球菌病对90日龄以下的鸡的危害;本专利技术的目的完全得到了实现。用浓度为400亿个/毫升的治疗注射液，以每隔1天注射1次，连续3次，每次剂量为200亿个，对患有葡萄球菌病的鸡具有明显的治疗效果，愈者无反复。权利要求1.一种鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于本菌苗采用血浆凝固酶阳性金黄色葡萄球菌菌株作为生产用菌种，菌苗的制备方法和步骤如下①选取CTQS-1菌株，制备菌苗生产用的种子菌液，②制备增菌菌液，③灭活与无菌试验，④配制油乳剂菌苗和治疗用注射液。2.根据权利要求1所述的鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于所述CTQS-1菌株是用40～90日龄的葡萄球菌病鸡或死鸡肝脏，在血液琼脂平板(或普通营养琼脂平板)上划线培养，选取其中金黄色菌落，经检验确为CTQS-1株者作为生产菌苗用的菌株;所述的种子菌液是将CTQS-1菌株洗入2.5%的葡萄糖牛肉汤培养基培养的浓度约为300亿个/毫升的种子菌液。3.根据权利要求1所述的鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于所述的制备增菌菌液是将步骤(一)所制的种子菌液接种到0.25%葡萄糖普通营养琼脂板上，在37℃下培养18～20小时后，用无菌生理盐水冲洗菌苔而获得的。4.根据权利要求1所述的鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于灭活是将在步骤(二)所制得的增菌菌液中以千分之六的比例加入福尔马林溶液，在37℃下经24小时灭活。5.根据权利要求1所述的鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于所述的配制油乳剂菌苗和治疗注射液是将步骤(三)所得的灭活菌液，用离心机分离，弃去上清，制成浓度为800亿个/毫升的灭活菌液，然后将此菌液以1∶1的比例与油乳剂混合并经高速匀浆而制成的;治疗用注射液则是其浓度为400亿个/毫升的水剂。6.根据权利要求1或5所述的鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于所述的油乳剂佐料最好用白油、司班、吐温混合制剂，其中白油、司班、吐温在混合液制剂中的重量比以90∶7.6∶2.4为佳。全文摘要鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，它是用因鸡葡萄球病死亡鸡之肝脏，在血液琼脂平板上选取的黄色CTQS-1菌株，经2.5％葡萄糖牛肉汤培养基培养，制成300亿/毫升的种子菌液；再将种子菌液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡葡萄球菌油乳剂灭活死菌菌苗，其特征在于：本菌苗采用血浆凝固酶阳性金黄色葡萄球菌菌株作为生产用菌种，菌苗的制备方法和步骤如下：①选取ＣＴＱＳ－１菌株，制备菌苗生产用的种子菌液，②制备增菌菌液，③灭活与无菌试验，④配制油乳剂菌苗和治疗用注射液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：康利文，
申请(专利权)人：康利文，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]