用于合成９α－羟基甾体化合物的工艺方法技术

本发明专利技术涉及了通过使用保藏号为ＮＣＡＩＭ（Ｐ）－Ｂ　００１３４２的鼻疽诺卡氏菌（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｆａｒｃｉｎｉｃａ）细菌菌株作为生物转化中的羟化微生物，通式（Ⅰ）的９α－羟基甾体衍生物的新的选择性合成，如式Ⅰ，其中－Ａ－Ａ′－表示－ＣＨ↓［２］－ＣＨ↓［２］－或－ＣＨ＝ＣＨ－基团，所述合成通过通式（Ⅱ）的化合物的生物转化实现，如式Ⅱ，其中－Ａ－Ａ′－表示－ＣＨ↓［２］－ＣＨ↓［２］－或－ＣＨ＝ＣＨ－基团。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于合成9a-羟基甾体化合物的工艺方法 本专利技术涉及通式(I)的9oc-羟基甾体衍生物的新的选择性合成，其中_八-八'-表示-012-(^^2-或-(:1^(:11-基团，所述合成通过通式(ii)的化合物的生物转化实现，其中-A-A'-表示-CH2-CH2-或-CHK:H-基团。已知9a-羟基甾体化合物广泛用于治疗中，例如孕甾烷甾体化合物 的9a-羟基衍生物具有糖皮质激素活性，雄甾烷衍生物的9a-羟基衍生 物用作抗雄激素和抗雌激素药物的活性成分。那些在U位上不具有取代基的9a-羟基甾体化合物可以容易地通 过已知的化学方法脱水，这样获得的9(11)-脱氢甾体化合物在具有高的 生物活性的化合物的合成中是重要的中间体。这样的化合物是例如具 有抗炎活性的氢化可的松(化学名称11卩,17，21-三羟基-孕甾-4-烯-3,20-二酮)和脱氢皮质甾醇(化学名称1lp,17，21-三羟基-孕甾-l,4-二烯 -3，20-二酮)，或依普利酮(eplerenone)(化学名称9a，1 la-环氧-17p-羟基-3-氧-孕甾-4-烯-7，21-二羧酸Y内酯)，后者具有广泛的指征分布；例如它作为(3-阻断剂降低由心脏和血管问题引起的死亡风险，并且它 可用于治疗高血压和作为利尿剂。厶4_3-酮-孕甾烷家族的成员在9a-位的首次羟化，是由Hanze及同 事在1958年使用上坎定安霉属(Cunninghamella)和巻枝霉属 (Helicostylum)丝状真菌菌株进行的(参见美国专利3,038,913) 。 1960 年，Sih及同事描述了使用具有V-脱氢酶酶活性的微生物，在存在A1-脱氢酶抑制剂的情况下对甾体化合物进行了 9a-羟化(参见美国专利 3,065,146)。两年后，Sebek通过使用Ascochyta linecola菌株，进行了 甾体化合物的9a-羟化(参见美国专利3,116,220)。在上面提到的专利中，Sih及同事还列出了分枝杆菌菌株作为具有 甾体9a-羟化酶的微生物(参见美国专利3,065,146)。已知，在1977年，Frederick及同事通过诱变处理产生了一株新的 分枝杆菌菌株，它只部分降解所检测的甾醇底物，因此积累了9a-羟基 衍生物(参见美国专利4,029,549) 。 Wovcha使用了同样的菌株一一偶 发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum) NRRL B-8119菌株，合成了新 的9a-羟基衍生物(参见美国专利4,035,236)。Wovcha及同事研究了偶发分枝杆菌ATCC 6842菌株在甾体骨架 降解中的作用。他们发现，在降解成二氧化碳和水的过程中的关键步 骤是随后的A"-脱氢酶和9a-羟化酶的功能。这两个转化步骤可以互换， 两个反应步骤可以通过两两的酶(酶的组)来进行；例如，它们中的 一个、V-脱氢酶转化起始原料，另一个A'-脱氢9a-羟基衍生物。在他 们的实验中，他们提出上述的酶可以被诱导；并且通过使用不同的诱 导物，形成的产物的量和组成变化显著。1981年，Marsheck及同事，通过使用新的突变的犬股诺卡氏菌4(Nocardiacanicruria )菌株，以不需要使用A'-脱氢酶抑制剂的方式， 进行了甾体化合物的9a-羟化。在上面提到的实施例中，9a-羟基-酮内 酯(化学名称9a，17-二羟基-3-氧-17a-孕甾-4-烯-21-羧酸y内酯)的合 成，被描述为从酮内酯(化学名称17-羟基-3-氧-17a-孕甾-4-烯-21-羧 酸Y内酯)开始；使用0.5 g/diT^浓度的酮内酯底物，所需的羟化产物 以30%的转化率形成(参见美国专利4,397,947)。此外，Mutafov及同事使用红球菌(Rhodococcus sp.)菌株研究了 甾体9a-羟化酶的可诱导性，发现作为产物形成的9a-羟基-4-雄甾烯 -3，17-二酮是非常差的诱导物，因为使用它作为诱导物时，反应速度只 有一半，形成的9a-羟基产物的量为使用4-雄甾烯-3,17-二酮作为诱导 物时的四分之一。Brzostek及同事在基因水平上研究了甾体骨架的降解，发现阻断 合成9a-羟基甾体衍生物所需的A、脱氢酶酶活性是困难的，因为不仅 存在着不同类型的V-脱氢酶，而且在某些情况下基因组含有5个 脱氢酶基因。已知在依普利酮(eplerenone)的合成中，除了化学反应步骤之外， 还进行了微生物步骤，其中， 一种有价值的中间体坎利酮(canrenone)(化学名称17-羟基-3-氧-17a-孕甾-4，6-二烯-21-羧酸Y内酯)的羟化， 也使用了微生物(色二孢(Diplodia)、曲霉(Aspergillus)、犁头霉(Absidia sp.))来进行(参见美国专利申请No. 2004/087562禾口 2004/097475，以及PCT国际专利申请No 2005/000865)。依普利酮的另一种合成可以通过坎利酮的9a-羟化来进行。9a-羟 基坎利酮(化学名称9a，17-二羟基-3-氧-17a-孕甾-4，6-二烯-21-羧酸Y 内酯)首先由Ng及同事通过微生物羟化来合成(参见PCT国际专利 申请No 97/21720和匈牙利专利No 222,453)，并描述在上面提到的 专利的实施例17中。作为产物的9a-羟基坎利酮是在1998年，在Ng及同事的专利的 专利权利要求书中首次描述的(参见PCT国际专利申请No 98/25948; 或后来的美国专利7,129,345)。国际检索审查机构在PCT专禾U申请No 97/21720和98/25948中发 现了 18个独立的专利技术，因此他们建议专利技术人提交选择专利申请。结果， 提交了超过100项专利申请，其中有几个包含了上面提到的专利No. WO-97/21720 (参见PCT No 2005/239761)的实施例17。上面提到的实施例17描述了83种潜在具有甾体9a-羟化酶活性的 微生物的筛选数据，并给出了在坎利酮的生物转化过程中形成的产物 的TLC、 HPLC/UV禾(J LC/MS数据。从其中给出的表，只能看出是否 能够通过上面提到的分析方法在可能的产物中检测到9a-羟基-坎利酮。 在该表中有一株分枝杆菌，偶发分枝杆菌ATCC 6842菌株，但是在适 当的列中没有给出分析数据。该菌株的生物转化能力是从文献中得知 的，因此可以 推测，发生了坎利酮的分解(参见美国专利No4，029，549和4,035,236)。这种推测得到了文献的支持，该文献在2003年由上面提到的专利 族的微生物学家专利技术人撰写。该文献含有同样的表，但是该表中的偶 发分枝杆菌菌株是上述的变异体，被开发用于甾体化合物的9a-羟化， 登记号为NRRL B-8119 [J. Nat. Prod. 66， 350-356 (2003)〗。在这种情况 下，根据作者，偶发分枝杆菌NRRLB- 8119不产生羟基或脱氢的产物， 也不存在代谢。在上面提到的实施例17中，有3种类型的诺卡氏菌属的菌株，即 Nocardia aurentis、 Nocardia cancicruria禾口珊瑚色诺卡氏菌(Nocardia coralline)菌株。根据TLC和HPLC测量，两株菌株的转化产物类似于 9a-本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于选择性合成通式（Ⅰ）化合物的方法，　＊＊＊　（Ⅰ）　其中－Ａ－Ａ′－表示－ＣＨ↓［２］－ＣＨ↓［２］－或－ＣＨ＝ＣＨ－基团，所述合成通过通式（Ⅱ）的化合物的生物转化实现，　＊＊＊　（Ⅱ）　其中－Ａ－Ａ′－表示－ＣＨ↓［２］－ＣＨ ↓［２］－或－ＣＨ＝ＣＨ－基团，其特征在于通过使用保藏号为ＮＣＡＩＭ（Ｐ）－Ｂ　００１３４２的鼻疽诺卡氏菌细菌菌株作为生物转化中的羟化微生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：卡塔林欧洛斯，阿尼克泰格代什，维拉利甘乔什，加博尔洪托什，卡尔曼科恩策尔，加博尔鲍洛格，桑多埃尔代伊，
申请(专利权)人：里克特格登有限公司，
类型：发明
国别省市：HU[匈牙利]