HGF冻干制剂制造技术

含有肝细胞生长因子（ＨＧＦ）、精氨酸或赖氨酸等稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，它由浓度不超过５ｍｇ／ｍＬ的肝细胞生长因子的水溶液制备得到，和／或用于制备再溶解后肝细胞生长因子的浓度不超过５ｍｇ／ｍＬ的水溶液，并且保存稳定性优良。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及含有肝细胞生长因子的冻干制剂。hHGF是一种糖蛋白，它是由非还原状态下分子量约为80-90KDa或还原状态下分子量约为52-56KDa的α亚基和分子量约为30-36KDa的β亚基构成的异二聚体。除具有肝细胞生长因子的活性之外，hHGF还具有扩散因子(scatter factor；SF)活性、肾小管上皮细胞生长因子活性、损伤组织修复因子活性、血管内皮细胞生长因子活性等多种生物活性，且该蛋白有望作为肝脏疾病治疗药、肾脏疾病治疗药、脑神经障碍治疗药、毛发生长促进剂、创伤治疗药、抗肿瘤治疗药等进行开发。关于HGF的药物制剂，WO90/10651公报、特开平6-247872号公报以及特开平9-25241号公报均有报道。在上述WO90/10651公报中报道了和HGF的比较缺失5个氨基酸残基的缺失型HGF(TCF)的水性制剂，并指出白蛋白、人血清、明胶、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇等能够稳定水溶液中的TCF。特开平6-247872号公报报道了通过将TCF与碱性氨基酸等共存，制备出含有5-10mg/mL的高浓度TCF的注射液。该刊物谈及了TCF在水溶液中的溶解性，并报道了含有高浓度TCF的水溶液，其中使用了碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸)作为注射剂的“助溶剂”。可是，HGF的水溶液制剂在中性pH时HGF的溶解性急剧降低，而在低温或者室温保存数日时该制剂存在出现凝集、白色混浊、凝胶化的问题。另外，该制剂的物理化学稳定性低，例如形成降解产物和聚集体；并且作为药物制剂也不是很稳定，例如生物活性降低。因此从生物活性的角度来说，该制剂不适合长期保存。再者，HGF的水溶液制剂在振动搅拌后产生的发泡等可引起凝集、白色混浊、凝胶化，进而长期保存、销售及搬运时会造成药物制剂的品质下降，药效减低。因此HGF制剂以冻干制剂为佳。特开平9-25241号公报报道了HGF(TCF)的冻干制剂，但是与本专利技术不同，该公报中阐述了用柠檬酸盐作为缓冲液，以甘氨酸、丙氨酸、山梨糖醇、甘露醇等作为稳定剂，制备长期稳定的高浓度HGF(TCF)冻干制剂的方法。不过，该冻干制剂中由于将柠檬酸作为缓冲液，再溶解后制剂的pH为酸性条件。其结果溶液的高渗透压高，并可导致注射给药时产生疼痛、给药部位出现炎症反应和溶血现象等问题。HGF作为具有极强生理活性的物质，作为医药使用时，需要为临床提供极低浓度的药物制剂。据本专利技术者等人的研究，特开平9-25241号公报记载的含有甘氨酸以及丙氨酸的HGF(TCF)冻干制剂中，由含有高浓度HGF的水溶液制得的冻干制剂，保存时生成的聚集体少，而适于临床应用的含有低浓度HGF(一般情况下，HGF的浓度不超过5mg/mL，例如2mg/mL的程度。)的水溶液，在甘氨酸和丙氨酸存在的情况下冻干所得的制剂在保存时出现了聚集体。因此，特开平9-25241号公报上所记载的甘氨酸和丙氨酸作为高浓度HGF冻干时使用的稳定剂很有效，但是作为低浓度HGF冻干时使用的稳定剂效果不佳。因此需要开发出由低浓度HGF的水溶液制备不易生成聚集体，且长期保存稳定性优良的冻干制剂的制备方法。本专利技术者等人为解决上述课题进行了悉心研究，结果表明将浓度不超过5mg/mL的HGF，在稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂存在的条件下进行冻干，能够制备出结块形成性、溶解性、长期保存稳定性良好的冻干制剂，并且在该冻干制剂制备过程中以及冻干制剂的保存过程中不生成聚集体，以及该冻干制剂具有极高的稳定性。另外，发现由此冻干制剂制备的水溶液不产生凝集、白色混浊、凝胶化等现象，以及这种含低浓度HGF的水溶液在临床能够充分发挥药效。本专利技术是基于以上发现而完成的。即，本专利技术提供含有肝细胞生长因子、阻止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，且该冻干制剂是从肝细胞生长因子浓度不超过5mg/mL的水溶液制备得到的制剂；含有肝细胞生长因子、阻止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，且该冻干制剂可用于制备再溶解后肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液；以及，含有肝细胞生长因子、阻止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，且该冻干制剂是从肝细胞生长因子浓度不超过5mg/mL的水溶液中制备得到，以及该冻干制剂可用于制备再溶解后肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液。这些HGF冻干制剂在冻干时以及冻干后的长期保存过程中，不生成HGF的聚集体，且具有优良的稳定性。另外，这些冻干制剂具有由冻干制剂制备的水溶液不产生凝集、白色混浊、凝胶化等现象，甚至在保存该水溶液时也难以生成聚集体的特征。通常情况下，希望用于在小瓶中制备冻干制剂的水溶液与将得到的冻干制剂在小瓶中溶解并制备的水溶液中含有同浓度的有效成分。因此，优选将HGF浓度不超过5mg/mL的水溶液在小瓶中或在安瓿瓶中冻干而制备本专利技术的制剂。并且，本专利技术的制剂在冻干前和/或再溶解后的水溶液的pH优选在注射剂适宜的5到6.5范围，再者，本专利技术的制剂在冻干前和/或再溶解后的水溶液优选具有注射剂适宜的渗透压，例如与生物体几乎等渗或注射剂允许的渗透压比(1～2)。根据本专利技术的优选方案，本专利技术提供稳定剂是从精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、硫酸化多糖类、及它们的可药用盐构成的组中选出的上述HGF冻干制剂；稳定剂是从精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的上述HGF冻干制剂；稳定剂是从精氨酸、赖氨酸、组氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的上述HGF冻干制剂；稳定剂是从精氨酸、赖氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的上述HGF冻干制剂。这些稳定剂优选按冻干时和/或冻干后保存时可防止生成HGF聚集体的充分有效的用量，在上述制剂中配合使用。另外，根据本专利技术的其它优选方案，本专利技术提供磷酸盐作为缓冲剂的上述HGF冻干制剂，进而还含有表面活性剂的上述HGF冻干制剂；表面活性剂为非离子性表面活性剂的上述HGF冻干制剂；非离子性表面活性剂为聚氧乙烯醚类表面活性剂的上述冻干制剂。根据其它的观点，本专利技术提供将HGF浓度不超过5mg/mL的水溶液进行冻干时所用的HGF稳定剂，它是从精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、硫酸化多糖类、及它们的可药用盐构成的组中选出的稳定剂。优选从精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的稳定剂，特别优选从精氨酸、赖氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的稳定剂。这些稳定剂可防止HGF浓度不超过5mg/mL的水溶液在冻干时及冻干后保存时HGF聚集体的生成。其次，根据本专利技术，本专利技术还提供可由冻干含有上述稳定剂和HGF浓度不超过5mg/mL的水溶液而得到的，用于制备再溶解后HGF浓度不超过5mg/mL的水溶液的HGF冻干制剂。上述冻干制剂优选的制剂可通过将含有稳定剂(优选从精氨酸、赖氨酸、及它们的可药用盐构成的组中选出的稳定剂)、浓度不超过5mg/mL的HGF、氯化钠、以及缓冲剂的水溶液在小瓶中进行冻干而得到。此外，作为HGF也可以应用具有信号序列的蛋白质等前体蛋白质，在不损伤肝细胞增殖活性的范围内一部分氨基酸发生置换、缺失、和/或插入的修饰蛋白，或缺失或置换了糖基的本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有肝细胞生长因子、防止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，它由肝细胞生长因子的浓度不超过５ｍｇ／ｍＬ的水溶液制备得到。

【技术特征摘要】
JP 1999-5-31 151769/991.含有肝细胞生长因子、防止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，它由肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液制备得到。2.含有肝细胞生长因子、防止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，它用于制备再溶解后肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液。3.含有肝细胞生长因子、防止肝细胞生长因子生成聚集体的稳定剂、氯化钠、以及缓冲剂的冻干制剂，它由肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液中制备得到，且用于制备再溶解后肝细胞生长因子的浓度不超过5mg/mL的水溶液。4.权利要求1至3任一项所述的冻干制剂，其中，稳定剂选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、硫酸化多糖类、以及这些物质的可药用盐构成的组。5.权利要求1至3任一项所述的冻干制剂，其中，稳定剂选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、以及这些物质的可药用盐构成的组。6.权利要求1至3任一项所述的冻干制剂，其中，稳定剂选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、以及这些物质的可药用盐构成的组。7.权利要求1至6任一项所述的冻干制剂，其中，缓冲剂为磷酸盐。8.权利要求1至7任一项所述的冻干制剂，其中，冻干前的水溶液具有注射剂适宜的pH和渗透压比。9.权利要求1至7任一项所述的冻干...

【专利技术属性】
技术研发人员：千叶雅俊，
申请(专利权)人：三菱化学株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]