结合生长因子的融合蛋白制造技术

本申请披露了一种分离的核酸分子，该核酸分子编码能够同时结合两种不同生长因子多肽部分的多肽。这样的多肽能够同时结合ＶＥＧＦ多肽和血管生成素多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合生长因子的融合蛋白
本专利技术涉及抗-血管发生组合物领域。本专利技术还涉及一种同时结合两种不同生长因子或细胞因子的组合物。
技术介绍
人体中存在三种已知的VEGF受体，即VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。人类VEGFR1由1338个氨基酸组成，被分成三个主要区域：由7个免疫球蛋白(Ig)-样结构域构成的胞外结构域、跨膜结构域和胞内酪氨酸激酶结构域(UniProKB/Swiss-ProtentryP17948)(图1)。VEGFR2和VEGFR3具有类似的构成并且在酪氨酸激酶结构域上显示与VEGFR1约80％的同一性。VEGFR1和VEGFR2通过结合VEGF-A的激活对于血管内皮细胞的生长、迁移和存活(它们是血管发生和血管生成的基本过程)起关键作用，而VEGFR3通过结合VEGF-C和VEGF-D的激活对于淋巴内皮细胞的生长、迁移和存活(它们是另外具体指出的淋巴管形成的基本过程)起主要作用(ShibuyaMandClaessson-WelshL，Exp.CellResearch312：549-560，2006；AlitaloK，etal.，Nature438：946-953)。VEGF-A对VEGFR1的亲和力比对VEGFR2的亲和力高大约10倍。在VEGFR1的7个Ig-样结构域中，Ig-样结构域2对于VEGF-A结合是必需的(图2)。然而，VEGFR1的Ig-样结构域2包含许多碱性氨基酸并且它的理论等电点(pI)为9.19(ComputepI/MwtoolforSwiss-Prot/TrEMBLentries，http://kr.expasy.org/tools/pi_tool.html)。因此，VEGFR1的Ig-样结构域2本身不能被用作具有诱饵受体性能的治疗蛋白，因为它具有低的药代动力学性能。具有免疫球蛋白和表皮生长因子同源性结构域-2的酪氨酸激酶(Tie2)是主要在内皮和造血细胞上表达的一种受体酪氨酸激酶(RTK)(DumontDJ，etal.，Oncogene8：1293-1301，1993)。Tie2对于血管形成、血管发生和造血很关键(YancopoulosGD，etal.，Nature407：242-248，2000)。4种Tie2配体已被鉴定：血管生成素-1(Ang1)、血管生成素-2(Ang2)、血管生成素-3(Ang3)和血管生成素-4(Ang4)(YancopoulosGD，etal.，Nature407：242-248，2000)。尽管Ang1似乎是Tie2的专性(obligate)激活剂，但是Ang2似乎具有上下文中所述的特定作用，在一些细胞上激活这种受体而在其他细胞上或在不同条件下阻断Tie2激活(YancopoulosGD，etal.，Nature407：242-248，2000)。人类Tie2由1124个氨基酸构成，被分成三个主要区域：由两个Ig-样结构域、三个EGF-样结构域、一个Ig-样结构域、三个III型纤连蛋白组成的胞外结构域；跨膜结构域和胞内酪氨酸激酶结构域(UniProtKB/Swiss-ProtentryQ02763)(图1)。在Tie2的胞外亚结构域中，Ig-样结构域2对于血管生成素结合是必需的，但Ig-样结构域1和三个EGF-样结构域看起来是与血管生成素的稳定结合所必需的(图2)。重要地，这些亚结构域包含许多酸性氨基酸并且它的理论等电点(pI)为6.55(ComputepI/MwtoolforSwiss-Prot/TrEMBLentries，http://kr.expasy.org/tools/pitool.html)。因此，这些结构域本身能够用作治疗蛋白，因为它可以具有高的药代动力学值。在VEGF和血管生成素家族蛋白中，VEGF-A和血管生成素-2(Ang2)是对于以下的关键分子：肿瘤血管发生(Holash，J.etal.，Science1999；284：1994-1998；Holash，J.etal.，Oncogene1999；18：5356-5362)和转移(Saaristo，A.etal.，Oncogene2000；19：6122-6129)、老年性黄斑退化症((Otani，A.etal.，InvestOphthalmol.Vis.ScI，1999；40：1912-1920)、糖尿病视网膜病变(Watanabe，D.etal.，Am.J.Ophthalmol.2005；139：476-481)、风湿性关节炎(Fearon，U.etal.，J.Rheumatol2003；30：260-268；Paleolog，E.M.etal.，ArthritisRes.2002；4：S81-S90)、银屑病(Kuroda，K.etal.，J.InvestDermatol.2001；116：713-720)、急性和慢性炎症(McDonald，D.M.etal.，Am.J.Respi.Cri.CareMed.2001；164：S39-S45；Roviezzo，F.etal.，J.Pharmacol.Exp.Ther.2005；314：738-744)、动脉粥样硬化(LimHS，etal.，Atherosclerosis，2005；180：113-118)以及淋巴增生性疾病如肿瘤淋巴管生成(Scavelli，C.etal.，Leukemia2004；18：1054-1058)和淋巴转移(Sfiligoi，C.etal.，Int.J.Cancer2003；103：466-474)。因此，本专利技术对于治疗VEGF-A和/或Ang2相关疾病提供VEGF-A和Ang2的同时阻断，优选地利用诱饵受体、内双特异抗体(intradiabody)(双抗体)或RNA干扰。
技术实现思路
本专利技术还提供一种组合物，其结合两种不同生长因子或细胞因子。优选地，这样的组合物是能够同时结合两种蛋白的融合蛋白。在一个方面，这样的融合多肽不是抗体。在一个优选方面，这样的融合多肽包括该生长因子或细胞因子的天然结合伴侣的全长形式或片段。更优选地，该融合多肽能够同时地结合血管内皮生长因子(VEGF)和血管生成素，即“双抗-血管生成蛋白(DAAP)”。披露的DAAP对于治疗VEGF和血管生成素相关病症和疾病如癌症、老年性黄斑退化症、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎、银屑病、急性和慢性炎症、动脉粥样硬化及淋巴增生性疾病是治疗有用的。在一个特定方面，本专利技术涉及一种分离的核酸分子，该核酸分子编码能够同时结合VEGF多肽和血管生成素多肽的多肽，其包括编码Tie2部分(组成部分，component)和VEGFR部分的核苷酸序列。该Tie2和VEGFR部分可以可操作地连接至编码多聚化部分(形成多聚体的部分，multimerizingcomponent)的核苷酸序列。VEGFR可以是VEGFR1或VEGFR3，并不限于此没有限制。并且该多聚体部分可以是免疫球蛋白结构域。在一个方面，免疫球蛋白结构域可以是IgG的Fc结构域、IgG的重链、或IgG的轻链。而且，Tie2部分可以位于VEGFR部分的上游或下游。在另一方面，在该核酸分子中，Tie2部分可以包括编码Tie2的胞外结构域的Ig-样结构域1、Ig-样结构域本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的核酸分子，编码具有两个部分的多肽，所述多肽能够同时结合两种不同的细胞因子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-2-27 60/891,7691.一种分离的核酸分子，编码具有两个部分的多肽，所述多肽能够同时结合VEGF和Ang2，所述分离的核酸分子选自下列核苷酸序列：(a)在表1中列出的SEQIDNO:1的核苷酸序列；或者(b)一个核苷酸序列，其由于遗传密码的简并而不同于(a)的核苷酸序列，但其编码由它表达的相同氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中，编码所述部分的核苷酸序列可操作地连接至编码多聚化部分的核苷酸序列。3.根据权利要求2所述的核酸分子，其中，所述多聚化部分是免疫球蛋白结构域。4.根据权利要求3所述的核酸分子，其中，所述免疫球蛋白结构域选自由IgG的Fc结构域、IgG的重链和IgG的轻链组成的组。5.一种包含权利要求1所述的核酸分子的表达载体，其中，所述核酸分子可操作地连接至表达控制序列。6.一种宿主-载体系统，用于在合适的宿主细胞中生产融合多肽，所述系统包含权利要求5所述的表达载体。7.根据权利要求6所述的宿主-载体系统，其中，所述合适的宿主细胞是细菌细胞、酵母细胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞。8.一种由权利要求1所述的分离的核酸分子编码的融合多肽。9.一种生产融合多肽的方法，包括在允许生产所述融合多肽的条件下生长权利要求6所述的宿主-载体系统的细胞，以及回收这样生产的所述融...

【专利技术属性】
技术研发人员：金学祖，高永俊，金昊民，郑基勋，全春周，高古泳，
申请(专利权)人：金克赛尔森株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]