一种新的多肽——人启动结合因子13和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人启动子结合因子１３，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人启动子结合因子１３的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人启动子结合因子13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。真核生物RNA聚合酶Ⅱ启动子包含多种DNA元素及控制转录活性的元素。这些元素对许多不同的Ⅱ型启动子都是普遍存在的。对无亲缘关系的Ⅱ型启动子的比较序列分析显示，有几个共有元素的存在，包括the capsignal,TATA box,CCAAT box,GC boxes。在高等真核生物的启动子中，CCAATbox普遍存在于转录起始位点的80bp-100bp，通过在不同种属间的比较，发现CCAAT box是高度保守的。在这几个启动子中，CCAAT box和其它启动子特异元素间的空间在不同种属间也是保守的。CCAAT box是一个在真核生物中绝大多数基因的启动子和增强子中普遍存在的顺式元素。许多DNA结合蛋白都与CCAAT box结合。在这些蛋白质中已知的有一种CCAAT结合因子(CBF)或NF-Y。CBF是由两个不同的DNA必要元素组成的一个异数转录因子(heteromeric transcription factor)。CBF的第一个亚基，在脊椎动物中有CBF-A或NF-YB，在出芽酵母中为HAP3，在裂殖酵母中为php3，这个亚基有116到210个氨基酸残基，含有一段约90个残基的高度保守中心domain。这个domain参与DNA的结合，在此中央部分，我们发展了一个信号模式。CBF的第二个亚基，在脊椎动物中有CBF-B或NF-YA，在出芽酵母中为HAP2，在裂殖酵母中为php2，这个亚基有265到350个氨基酸残基，含有一段约60个残基的高度保守区域。这个区域被称为“essential core”，它含有两个亚结构域N端的亚基相关结构域和C端的DNA识别结构域。参与DNA的结合，在此中央部分，我们从亚基相关domain发展了一个信号模式。共有模式C-V-S-E-x-I-S-F--T--E-A----C存于所有CBF-A亚基中；共有模式Y-V-N-A-K-Q-Y-x-R-I-L-K-R-R-x-A-R-A-K-L-E此模式存于所有CBF-B亚基中。CBF与DNA结合的亲合力取决于CCAAT两侧的序列，在启动子中CCAAT序列的每一个核苷的突变都会减少或终止与CBF的结合。CBF能与许多真核基因的近启动子区域结合，这说明了CBF能控制这些启动子的转录。另外，在特定条件下几种细胞系中CBF-B的不同表达将导致依赖CBF的启动子活性的不同。CBF结合位点对单核细胞，巨噬细胞等的启动子的活性也是必需的。转录的激活应归于CBF与DNA的结合的增强。启动子活性的激活和表达是CBF结合位点介导的。在血清刺激细胞中，CBF对htk启动子活性的最大化是必需的，而且，在静止的细胞中，CBF结合位点与CCAAT转移蛋白(CDP/cut)相互作用，通过干预CBF依赖的转录活性抑制转录。这表明CDP/cut可以作为一个CBF活性的负调节剂。通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本专利技术的多肽的表达谱与人CCAAT结合因子9的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人启动子结合因子13。由于如上所述人启动子结合因子13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人启动子结合因子13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人启动子结合因子13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人启动子结合因子13以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人启动子结合因子13的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人启动子结合因子13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人启动子结合因子13的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人启动子结合因子13的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人启动子结合因子13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人启动子结合因子13异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中330-680位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1496位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人启动子结合因子13蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人启动子结合因子13蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人启动子结合因子13表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人启动子结合因子１３，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]