降低可溶性免疫受体CD28的方法和组合物技术

本申请涉及降低可溶性免疫受体CD28的方法和组合物。提供了治疗癌症和改善免疫疗法的方法，所述方法包括降低可溶性免疫受体水平。还提供了结合膜免疫受体并抑制该受体的蛋白酶剪切的试剂和结合可溶性免疫受体并且既非受体激动剂也非拮抗剂的试剂，以及产生这些试剂的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于免疫调节和免疫疗法领域。

技术介绍

1、适应性免疫系统主要通过协调刺激抗原特异性辅助因子cd4+和细胞毒性cd8+t细胞，在调节和防卫病原体和癌细胞方面发挥关键作用。抗原呈递细胞(apc)对t细胞的持久且持续的激活涉及：i)t细胞受体(tcr)与apc上的主要组织相容性复合体(mhc)呈递的肽结相互作用(engagement)；ii)t细胞上的共刺激cd28受体与也由apc表达的b7-1(cd80)和b7-2(cd86)配体结合。cd28共刺激的生物学后果是多种多样的，并且包括控制t细胞周期、扩增、分化以及通过降低实现免疫效应子功能所需的阈值来放大tcr刺激。

2、与激活性共刺激分子cd28相反，结构上的同源物——细胞毒性t淋巴细胞相关4(ctla-4)是一种抑制性共刺激受体，其膜表达由cd28的触发来驱动。ctla-4和cd28均为i型跨膜蛋白。它们的细胞外部分由一个v-set免疫球蛋白超家族(ig-v)结构域构成，该结构域由位于igv结构域外部，邻近跨膜区域的半胱氨酸残基同共价(homo-covalently)连接。尽管有相似之处，但ctla-4和cd28在亲和力和四级结构布置方面有所不同。发现ctla-4对b7分子具有更高的结合亲和力，并且具有与cd28不同的二聚化模式，导致与共享配体的化学计量结合不同。cd28表现出单价结合化学计量，而ctla-4以二价方式相互作用。因此，ctla-4以比cd28高得多的亲和力和亲合力结合b7分子，因此使t细胞响应下调并有利于抗原特异性耐受的起始。

3、已经表明某些共刺激分子具有几种生理形式。除膜结合形式外，还描述了在幼稚免疫细胞中表达的可溶形式，这增加了t细胞生物学的复杂性。cd28的可溶性形式(scd28)已被归因于选择性剪接的基因产物。剪接事件导致移码，其结果是：在翻译终止之前，在第137位的甘氨酸后添加了两个谷氨酸残基。最终产物缺少整个跨膜和胞质区域，并且重要的是在第141位缺少介导(促成，mediates)二聚体cd28的二硫键的半胱氨酸残基(magistrelli g.,biochem biophy res commun,1999)。单体cd28可溶形式的生物学功能和反受体结合受到检查(hebbar,m.,clin exp immunol,2004)并且显示也抑制t细胞增殖。然而，在二聚体scd28的情况下，已经表明具有通过与b7分子结合来抑制t细胞功能性的调节作用(sun,z.,centr eur j immunol,2014；hebbar,m.,clin exp immunol,2004)。值得注意的是，已经报道了患有自身免疫性障碍的患者的血清中scd28分子数量的升高(wong,ck,rheumatol,2005；hamzaoui,k.,clin exp rheumatol,2005；hebbar,m.,clin expimmunol,2004；sun,z.,clin immunol,2014)。scd28的确切来源尚有争议。利用t细胞激活的体外模型，反映自身免疫患者中t细胞的持久炎症状态，已表明在t细胞激活过程中，可选的可溶形式的转录被抑制，并且只有cd28的全长膜形式是明显的，而培养物中scd28的量升高(hebbar,m.,clin exp immunol,2004)。这种现象导致人们提出这样的主张：cd28的膜形式的主动脱落(shedding)是血清中可溶性分子升高的原因，但是，这尚未得到证实。过去将t细胞激活过程中的主动脱落描述为一种调节机理，通过粘附分子的蛋白水解作用抵消持续激活。

4、尽管ctla-4限制早期t细胞响应的幅度，但另一种抑制性受体——pd-1抑制外周t细胞功能。pd-1的表达在t细胞的激活期间升高，并且其已知的配体是b7家族的同源物：b7-h1(pd-l1)和b7-h2(pd-l2)。这些同源物经发现是在apc和癌细胞上，并且驱使激活的t细胞进入细胞无反应状态，导致免疫响应减弱。因此，有关ctla-4和pd-1/pd-l1轴的靶向疗法已显示出在广泛多种癌症类型中的临床活性。最近，研究表明，cd28的信号传导途径受pd-1靶向和抑制(hui,e.,science,2017)，而同时要进行有效的pd-1疗法，完整的活性cd28/b7轴必不可少(kamphorst,a.o.,science,2017)。

5、然而，并非所有患者一般都会对基于pd-1的免疫疗法或免疫疗法有反应，还有那些确实经常复发的患者。因此，迫切需要能够提高患者的免疫细胞攻击癌症的能力的方法和分子。

技术实现思路

1、本专利技术提供了治疗癌症和改善基于pd-1/pd-l1的免疫疗法的方法，所述方法包括降低可溶性cd28水平。还提供了结合膜cd28并抑制mcd28蛋白酶剪切(proteolyticcleavage)的试剂(药剂，agent)和结合可溶性cd28并且既非cd28激动剂也非cd28拮抗剂的试剂，以及产生这些试剂的方法。

2、根据第一方面，提供了治疗和/或预防对其需要的对象中的癌症的方法，所述方法包括降低对象中的可溶性cd28(scd28)水平。

3、根据另一方面，提供了改善对其需要的对象中的基于pd-1和/或pd-l1的免疫疗法的方法，所述方法包括降低对象中的scd28水平。

4、根据另一方面，提供了结合可溶性cd28(scd28)并且既非cd28激动剂也非cd28拮抗剂的试剂。

5、根据一些实施方式，需要免疫疗法的对象患有癌症。根据一些实施方式，对象对基于pd-1和/或pd-l1的免疫疗法不响应或响应低。

6、根据一些实施方式，降低发生在对象的血液、外周血或肿瘤微环境中。根据一些实施方式，降低包括以下中的至少一项：

7、a.给予对象与scd28结合的试剂，并且其中所述试剂在结合后降解scd28或靶向scd28以降解；

8、b.给予对象抑制性核酸分子，其中所述分子与编码scd28的mrna结合而不与编码膜cd28(mcd28)的mrna结合；

9、c.给予对象结合mcd28并抑制mcd28的蛋白酶剪切的试剂；

10、d.给予对象包含人cd28的茎部区域(stalk region)的二聚体肽(dimericpeptide)；

11、e.给予对象抑制能够剪切mcd28的蛋白酶的试剂，和

12、f.从对象中抽血，降低血液中scd28的量并将血液返回对象。

13、根据一些实施方式，茎部区域，

14、a.包含氨基酸序列gkhlcpsplfpgpskp(seq id no:9)或kgkhlcpsplfpgps(seq idno:36)；

15、b.由氨基酸序列hvkgkhlcpsplfpgpskp(seq id no:10)组成；或

16、c.(a)和(b)两者。

17、根据一些实施方式，所述方法不降解mcd28或不降低m本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于产生结合膜CD28(mCD28)并且抑制所述mCD28的蛋白酶剪切的试剂的方法，所述方法包括：

2.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶选自ADAM 10和ADAM 17。

3.权利要求1或2所述的方法，其中获得与CD28胞外结构域或其片段特异性结合的试剂是获得与CD28茎部结构域特异性结合的试剂。

4.权利要求3所述的方法，其中所述茎部区域包含氨基酸序列GKHLCPSPLFPGPSKP(SEQID NO:9)或KGKHLCPSPLFPGPS(SEQ ID NO:36)。

5.权利要求3所述的方法，其中所述茎部区域由氨基酸序列HVKGKHLCPSPLFPGPSKP(SEQID NO:10)组成。

6.权利要求1或2所述的方法，进一步包括在所述获得的试剂存在下测定mCD28下游信号传导，和选择至少一种既不大幅激动也不大幅拮抗mCD28信号传导的试剂。

7.用于产生结合可溶性CD28(sCD28)并且既非CD28激动剂也非CD28拮抗剂的试剂的方法，所述方法包括：

8.权利要求7所述的方法，进一步包括测试所述获得的试剂与mCD28的结合，和选择至少一种不结合mCD28的试剂。

9.权利要求7或8所述的方法，进一步包括测试所述获得的试剂与来自癌症患者的sCD28的结合，和选择至少一种与来自癌症患者的所述sCD28结合的试剂。

10.权利要求1、2、7和8中任一项所述的方法，其中所述获得所述试剂包括筛选与CD28胞外结构域或其片段结合的试剂库，和选择结合的试剂。

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【技术特征摘要】

1.用于产生结合膜cd28(mcd28)并且抑制所述mcd28的蛋白酶剪切的试剂的方法，所述方法包括：

2.权利要求1所述的方法，其中所述蛋白酶选自adam 10和adam 17。

3.权利要求1或2所述的方法，其中获得与cd28胞外结构域或其片段特异性结合的试剂是获得与cd28茎部结构域特异性结合的试剂。

4.权利要求3所述的方法，其中所述茎部区域包含氨基酸序列gkhlcpsplfpgpskp(seqid no:9)或kgkhlcpsplfpgps(seq id no:36)。

5.权利要求3所述的方法，其中所述茎部区域由氨基酸序列hvkgkhlcpsplfpgpskp(seqid no:10)组成。

6.权利要求1或2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈基姆，D·阿里什凯维兹，D·哈维兹，E·梅琳，Y·萨皮尔，A·舒尔曼，T·本摩西，I·曼德尔，
申请(专利权)人：比昂生物制剂公司，
类型：发明
国别省市：