具有增加的稳定性的脱落阻断剂制造技术

提供了包含由接头分开的至少两个部分的试剂，其中第一部分结合细胞表面上的mCD28并抑制mCD28的蛋白水解切割，并且其中第二部分增加第一部分的稳定性。还提供了包括施用试剂治疗癌症和改善免疫疗法的方法。治疗癌症和改善免疫疗法的方法。治疗癌症和改善免疫疗法的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有增加的稳定性的脱落阻断剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年3月12日提交的美国临时专利申请号62/988,503的优先权权益，其全部内容通过引用以其整体并入本文。


[0003]本专利技术属于免疫调节和免疫疗法领域。

技术介绍

[0004]适应性免疫系统在针对病原体和癌细胞的调节和保护中起关键作用，这主要通过协调结合(orchestrate)抗原特异性辅助CD4+和细胞毒性CD8+T细胞的刺激。抗原呈递细胞(APC)持久且连续的活化T细胞包括i)T细胞受体(TCR)与APC上主要组织相容性复合体(MHC)呈递的肽的接合；以及ii)结合也由APC表达的B7
‑
1(CD80)和B7
‑
2(CD86)配体的T细胞上的共刺激性CD28受体。CD28共刺激的生物学后果很多，并包括通过降低实现免疫效应功能所需的阈值来控制T细胞周期、扩增、分化以及TCR刺激的放大。
[0005]与活化性共刺激分子CD28不同，结构同系物，细胞毒性T淋巴细胞相关4(CTLA
‑
4)，是一种抑制性共刺激受体，其膜表达由CD28的触发驱动。CTLA
‑
4和CD28都是I型跨膜蛋白。它们的胞外部分由一个V组免疫球蛋白超家族(Ig
‑
V)结构域组成，该结构域由位于IgV结构域外靠近跨膜区的半胱氨酸残基同源共价连接。尽管相似，CTLA
‑
4和CD28在亲和力和四级结构排列方面有所不同。CTLA<br/>‑
4被发现对B7分子具有更高的结合亲和力，并且与CD28不同的二聚化模式导致与共享配体不同的化学计量结合。CD28表现出单价结合化学计量，而CTLA
‑
4以二价方式相互作用。因此，CTLA
‑
4以比CD28高得多的亲和力和抗体亲抗源性结合B7分子，并从而下调T细胞反应并助于抗原特异性耐受的起始。
[0006]已经表明一些共刺激分子具有几种生理形式。除了膜结合形式，已经描述了在稚免疫细胞中表达的可溶性形式，这增加了T细胞生物学的复杂性。CD28的可溶性形式(sCD28)已被归因于交替剪接的基因产物以及有效脱落(active shedding)。过去，T细胞活化期间的有效脱落被描述为通过粘附分子的蛋白水解来抵消连续活化的调节机制并且现在已经显示为也用于CD28。
[0007]膜CD28(mCD28)已被证明通过蛋白水解切割以产生sCD28。抑制这种切割被认为是抑制sCD28并从而抑制sCD28
‑
介导的免疫抑制的方法。因此，迫切需要药物上可行且血清半衰期长的可阻断mCD28的蛋白水解切割的试剂。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供包含由接头分开的至少两个部分的试剂，其中第一部分结合细胞表面上的膜的CD28(mCD28)并抑制mCD28的蛋白水解切割。还提供了治疗和预防癌症并改善基于PD
‑
1/PD
‑
L1的免疫疗法的方法，其包括施用所述试剂。
[0009]根据第一方面，提供了包含由接头分开的至少两个部分的试剂，其中第一部分结
合细胞表面上的膜的CD28(mCD28)并抑制mCD28的蛋白水解切割，并且其中第二部分增加第一部分的稳定性。
[0010]根据一些实施方式，第一部分、第二部分或两者小于100千道尔顿(kDa)。
[0011]根据一些实施方式，试剂小于100kDa。
[0012]根据一些实施方式，第一部分选自抗体的抗原结合片段、Fab片段、单链抗体、单结构域抗体、小分子和特异性结合CD28的肽。
[0013]根据一些实施方式，第一部分包含单结构域抗体或由其组成。
[0014]根据一些实施方式，单结构域抗体是骆驼科动物抗体或鲨鱼抗体。
[0015]根据一些实施方式，第一部分包含三个CDR，其中：
[0016]CDR1包含SEQ ID NO:1(INAMG)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:2(AISGGGDTYYADSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:3(DLYGSDYWD)中叙述的氨基酸序列；
[0017]CDR1包含SEQ ID NO:4(INAMA)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:5(AITSSGSTNYANSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:6(DEYGSDYWI)中叙述的氨基酸序列；或
[0018]CDR1包含SEQ ID NO:1(INAMG)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:7(AITSGGSTNYADSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:8(DLYGEDYWI)中叙述的氨基酸序列。
[0019]根据一些实施方式，第一部分包含选自以下的序列：
[0020]a.
[0021]EVQLVESGGGLVQAGESLRLSCAASGSIASINAMGWYRQAPGSQRELVAAISGGGDTYYADSVKGRFTISRDNAKTTVYLQMNSLRPEDTAVYYCVVDLYGSDYWDWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:9)；
[0022]b.
[0023]EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSLFSINAMAWYRQAPGKQRELVAAITSSGSTNYANSVKGRFTVSRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCVVDEYGSDYWIWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:10)；和
[0024]c.
[0025]QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIFSINAMGWYRQAPGKQRERVAAITSGGSTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNNLEPRDAGVYYCVVDLYGEDYWIWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:11)。
[0026]根据一些实施方式，第一部分包含三个重链CDR(CDR
‑
H)和三个轻链CDR(CDR
‑
L)，其中：CDR
‑
H1包含SEQ ID NO:12(GFTFSSYYMS)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
H2包含如SEQ ID NO:13(TISDGGDNTYYAGTVTG)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
H3包含如SEQ ID NO:14(IHWPYYFDS)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
L1包含如SEQ ID NO:15(RASSSVSYMN)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
L2包含如SEQ ID NO:16(ATSDLAS)中叙述的氨基酸序列，和CDR
‑
L3包含如SEQ ID NO:17(QQWSSHPPT)中叙述的氨基酸序列。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种试剂，其包含由接头分开的至少两个部分，其中第一部分结合细胞表面上的膜的CD28(mCD28)并抑制所述mCD28的蛋白水解切割，并且其中第二部分增加所述所述第一部分的稳定性。2.根据权利要求1所述的试剂，所述第一部分、所述第二部分或两者小于100千道尔顿(kDa)。3.根据权利要求2所述的试剂，其中所述试剂小于100kDa。4.根据权利要求1至3所述的试剂，其中所述第一部分选自抗体的抗原结合片段、Fab片段、单链抗体、单结构域抗体、小分子和特异性结合CD28的肽。5.根据权利要求1至4中任一项所述的试剂，其中所述第一部分包含单结构域抗体或由其组成。6.根据权利要求5所述的试剂，其中所述单结构域抗体是骆驼科动物抗体或鲨鱼抗体。7.根据权利要求4至6中任一项所述的试剂，其中所述第一部分包含三个CDR，其中：CDR1包含SEQ ID NO:1(INAMG)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:2(AISGGGDTYYADSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:3(DLYGSDYWD)中叙述的氨基酸序列；CDR1包含SEQ ID NO:4(INAMA)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:5(AITSSGSTNYANSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:6(DEYGSDYWI)中叙述的氨基酸序列；或CDR1包含SEQ ID NO:1(INAMG)中叙述的氨基酸序列，CDR2包含如SEQ ID NO:7(AITSGGSTNYADSVKG)中叙述的氨基酸序列，CDR3包含如SEQ ID NO:8(DLYGEDYWI)中叙述的氨基酸序列。8.根据权利要求7所述的试剂，其中所述第一部分包含选自以下的序列：a.EVQLVESGGGLVQAGESLRLSCAASGSIASINAMGWYRQAPGSQRELVAAISGGGDTYYADSVKGRFTISRDNAKTTVYLQMNSLRPEDTAVYYCVVDLYGSDYWDWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:9)；b.EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSLFSINAMAWYRQAPGKQRELVAAITSSGSTNYANSVKGRFTVSRDNAKNTMYLQMNSLKPEDTAVYYCVVDEYGSDYWIWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:10)；和c.QVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGSIFSINAMGWYRQAPGKQRERVAAITSGGSTNYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNNLEPRDAGVYYCVVDLYGEDYWIWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO:11)。9.根据权利要求1至4中任一项所述的试剂，其中所述第一部分包含三个重链CDR(CDR
‑
H)和三个轻链CDR(CDR
‑
L)，其中：CDR
‑
H1包含SEQ ID NO:12(GFTFSSYYMS)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
H2包含如SEQ ID NO:13(TISDGGDNTYYAGTVTG)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
H3包含如SEQ ID NO:14(IHWPYYFDS)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
L1包含如SEQ ID NO:15(RASSSVSYMN)中叙述的氨基酸序列，CDR
‑
L2包含如SEQ ID NO:16(ATSDLAS)中叙述的氨基酸序列，和CDR
‑
L3包含如SEQ ID NO:17(QQWSSHPPT)中叙述的氨基酸序列。10.根据权利要求1至9中任一项所述的试剂，其中所述试剂不是CD28激动剂。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的试剂，其中所述试剂不是CD28拮抗剂。12.根据权利要求1至11中任一项所述的试剂，其中所述第一部分的所述增加的稳定性包含增加血液中的稳定性。13.根据权利要求12所述的试剂，其中增加血液中的稳定性包含减少所述第一部分从血液中的清除。14.根据权利要求13所述的试剂，其中减少从血液中的清除包含减少肾滤过、减少溶酶体降解或两者。15.根据权利要求1至14中任一项所述的试剂，其中所述接头是刚性肽接头。16.根据权利要求15所述的试剂，其中所述刚性肽接头包含螺旋基序。17.根据权利要求15或16所述的试剂，其中所述刚性肽接头包含至少15个氨基酸。18.根据权利要求15至17中任一项所述的试剂，其中所述刚性肽接头包含至多30个氨基酸。19.根据权利要求1至18中任一项所述的试剂，其中所述接头包含至少一个半胱氨酸残基。20.根据权利要求19所述的试剂，其中所述至少一种半胱氨酸是C末端半胱氨酸。21.根据权利要求19或20所述的试剂，其中所述第二部分是聚乙二醇(PEG)并经由硫醇键附接到所述半胱氨酸。22.根据权利要求1至21中任一项所述的试剂，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：比昂生物制剂公司，
类型：发明
国别省市：