【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物，尤其涉及一种谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系的制备方法及其应用。
技术介绍
1、中国仓鼠卵巢(cho)细胞是一种来源于中国仓鼠卵巢的上皮细胞系，是生物制药行业制造治疗性蛋白主要手段之一，也是生产单克隆抗体的主要工具之一。可以快速识别大量低产和非生产性细胞中的那些稀有高产细胞系，达成有效和高效的临床细胞系开发过程，对于加速生物药物开发具有重大意义。
2、在细胞培养中，谷氨酰胺一方面用于细胞的能量代谢，另一方面参与蛋白质的合成和核酸代谢。在没有或低谷氨酰胺的培养条件下，谷氨酰胺合成酶(gs)催化谷氨酸和铵离子合成生成谷氨酰胺，供给细胞代谢和蛋白质合成。甲硫氨酸磺酸盐(msx)是gs的竞争型抑制剂，msx结合到gs的谷氨酸盐位点之后，会被atp磷酸化，从而不可逆的抑制gs活性。gs/msx筛选系统广泛应用于筛选基于cho细胞的蛋白类药品工程细胞株。通常目的蛋白基因和gs基因被共同转染到细胞内，gs基因作为筛选标记基因表达谷氨酰胺合成酶，使阳性细胞能在低或无谷氨酰胺条件下生长。随后，通过逐渐提高msx...
【技术保护点】
1.一种同源重组打靶序列，其特征在于，所述同源重组打靶序列的核酸序列包括SEQID NO.1所示的序列。
2.一种谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除CHO细胞系的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：使用权利要求1所述的同源重组打靶序列敲除CHO细胞的谷氨酰胺合成酶基因。
3.根据权利要求2所述的谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除CHO细胞系的制备方法，其特征在于，所述打靶序列的DNA包含于重组腺相关病毒载体中；
4.根据权利要求2或3所述的谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除CHO细胞系的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种同源重组打靶序列，其特征在于，所述同源重组打靶序列的核酸序列包括seqid no.1所示的序列。
2.一种谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：使用权利要求1所述的同源重组打靶序列敲除cho细胞的谷氨酰胺合成酶基因。
3.根据权利要求2所述的谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系的制备方法，其特征在于，所述打靶序列的dna包含于重组腺相关病毒载体中；
4.根据权利要求2或3所述的谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系的制备方法，其特征在于，所述获得谷氨酰胺合成酶双等位基因敲除cho细胞系前，还包括获取单克隆cho细胞系的基因组dna，通过基因组dna的测序数据筛选所述谷氨酰胺合成酶双等位...
【专利技术属性】
技术研发人员：高大伟，蔺智勇，马燕，王耀楠，阚子义，罗顺，
申请(专利权)人：澳斯康生物南通股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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