片剂形式的灭活的霍乱弧菌疫苗制造技术

本发明专利技术涉及疫苗领域，特别是口服霍乱疫苗。本发明专利技术的目的是制备等剂形成的灭活的完整细胞霍乱弧菌疫苗。本发明专利技术描述了该疫苗制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】片剂形式的灭活的霍乱弧菌疫苗本专利技术具有疫苗学领域的应用，特别是一种用于霍乱感染的口服疫苗。本专利技术公开了一种新的疫苗配方和它的治疗性的应用。更具体地说，本专利技术提出了对霍乱孤菌发生反应，能以片剂形式口服的由灭活疫苗配方的组成。霍乱是一种传染病，它最显著的症状是以急剧和大量地排出液体粪便为特征的急性腹泻。腹泻可以很严重，如果病人没有受到足够的医疗重视，甚至可以在症状开始后5小时之内致死。它经口从被污染的食品或液体获得。到目前，已经报道了7种导致提高的发病率和死亡率指标的传染病。在导致很差的卫生条件的不发达地区或受自然灾害、战争或其它破坏性事件影响区域居住的群体中，感染最常见，具有目的地的并因此而受影响的旅行者也容易受到感染(CDC/NCID.Organización Panamericana de la Salud.Métodos de laboratoriopara el diagnóstico de Vibrio cholerae.En：Programa especialde publicaciones.Ed.Washington，D.C.，Estados Unidos 1994)。尽管用抗菌素和盐水合物治疗是有效的，仍然需要全面和协调的医药处理对这种疾病的急剧效应作出反应。另一方面，已经表明该感染诱导与血清中的杀孤菌抗体的存在相关的特异的免疫防护，作为人体保护的指标(Glass，R.I.，Svennerholm，A.M.，Stoll，B.J.，Khan，M.R.，Hossain，K.M.，Huq，M.I.，Holmgren，J.1983.Protectionagainst cholera in breast-fed children by antibodies in breastmilk.N.Engl.J.Med.308：1389-1392 and Jer tborn，M.，Svennerholm，A.M.，Holmgren，J.1993.Evaluation of differentimmunization schedules for oral B subunit vaccine in Swedishvolunteers.Vaccine.10：130-2)。这已经导致来源于完整的灭活-->细胞或者来自活减毒细胞的不同种类的霍乱疫苗的开发。由于其短期的活性(3到6个月)和低水平(30到60％)的保护，以及它们导致红斑、局部的疼痛、硬化、发烧和cephalia的高水平的反应性，非肠道使用的来源于用苯酚灭活的完整的细胞的疫苗已经从市场除去(OMS.1991.Reunión sobre la vacuna contra el cólera.Informe final.Washington，D.C.)。在用胆汁灭活的整个细胞中(胆汁菌苗)发现了一种选择。该口服疫苗提供中等的防护水平，还没有在工业上开发(Svennerholm，A.M.and Holmgren，J.1986.Oral combined B subunit-whole cellcholera vaccine.In J.Holmgren A.Lindberg and R.Mollby(ed).Development of vaccines and drugs against diarrhea.11th NovelConference，Stockholm，1985.Student litteratur，Lund，Sweden.p.33-43)。已经表明用加热和甲醛灭活的与霍乱菌毒素B亚单位(B-WC)结合的整个细胞在给药后3年提供中等的保护水平(60％)(Holmgren，J.，Svennerholm，A.，M.，Lonroth，I.，Fall-Persson，M.，Markham，B.and Lundback，H.1977.Development of improved choleravaccine based on subunit toxoid.Nature 269：602-604)；但是由于需要获得和纯化霍乱毒素的B亚单位，该疫苗的生产十分昂贵和复杂(Tayot，J.L.，Holmgren，J.，Svennerholm，L.，Lindblad，M.，Tardy，M.1981.Receptor-specific large scale purification ofcholera toxin on silica beads derivatized with lyso-GMIgaglioside.Eur.J.Biochem.113：249-258)。上述的选择的一种变体采用通过重组方法获得的霍乱菌毒素的B亚单位(rB-WC)，证明是可靠的，但是在给药后3年仍然提供了仅仅60％的保护水平，并且它包括繁琐的制备过程。该疫苗在两个多层封套中制备，一个含粉末形式的盐混合物，另一个含冻干的霍乱孤菌菌株。当给药时，第一个必须在水中重新悬浮，第二个悬浮在盐溶液和水中；然后必须口服含盐溶液，接着在15分钟后按照同样的方式服-->用包含菌株的悬浮液(Sánchez，J.L.，Holmgren，J.1989.Recombinant system for overexpression of cholera toxin BSubunit in Vibrio cholerae as basis for vaccine development.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：481-485)。另一种类似于最后一种的最新的疫苗来源于灭活的完整的细胞，用569B菌株(El Tor，Inaba)代替了霍乱弧菌Cairo 50菌株(Classic，Ogawa)。它提供一种给药后直到8到10个月的可接受的水平的保护(66％)。它是一种不同的血清型和生物类型的霍乱孤菌菌株的混合物，在含有悬浮菌株的瓶子中和含有盐混合物的封套中制备(Trach，D.D.，Clemens，J.D.，Ke，N.T.，Thuy，H.T.，Son，N.D.，Canh，D.G.，Hang，P.V.D，Rao，M.R.1997.Field trial of a locally produced，killed，oral cholera vaccine in Vietnam.Lancet.349：231-235)。作为上述的疫苗，它的应用要求盐混合物溶于水并且口服，而且包含细胞株的瓶子的内容物在15分钟后给药，导致需要时间以及技术人员的缓慢的和慎重的过程，并且过程更加昂贵。以CVD103菌株为基础的CVD103 HgR疫苗，为了区分流行株，补充了另外插入菌株中的耐汞基因，该疫苗包括安全的给药方法并在志愿者中实施的试验中导致良好水平的保护，但是它必须高剂量给药以获得实质性的免疫原性反应(OMS.1991.Reunión sobre la vacunacontra el cólera.Informe final.Washington，D.C.and Holmgren，J.，and Svennerholm，A.M.1999.Vaccines against DiarrhealDisease本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于霍乱的疫苗组合物，由下列成分组成：ａ．霍乱弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａ）灭活细胞ｂ．凝集素ｃ．润滑剂ｄ．包衣物质ｅ．填充物质ｆ．崩解物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】CU 2003-3-20 2003-00611.用于霍乱的疫苗组合物，由下列成分组成：a.霍乱弧菌(Vibrio cholera)灭活细胞b.凝集素c.润滑剂d.包衣物质e.填充物质f.崩解物质。2.如权利要求1所述的疫苗组合物，灭活细胞由霍乱弧菌减毒菌株组成。3.如权利要求2所述的疫苗组合物，灭活细胞属于血清型0139。4.如权利要求3所述的疫苗组合物，灭活细胞属于血清型01。5.如权利要求4所述的疫苗组合物，具有El Tor或Classic型细胞。6.如权利要求5所述的疫苗组合物，灭活细胞属于Ogawa或Inaba血清型。7.如权利要求2所述的疫苗组合物，灭活细胞由由霍乱弧菌的野生菌株组成。8.如权利要求7所述的疫苗组合物，灭活细胞属于血清型0139。9.如权利要求8所述的疫苗组合物，灭活细胞属于血清型01。10.如权利要求9所述的疫苗组合物，具有El Tor或Classic生物型细胞。11.如权利要求10所述的疫苗组合物，具有Ogawa或Inaba血清型细胞。12.  如权利要求1到11所述的疫苗组合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：A塔拉韦拉科罗内尔，G阿内洛佩斯，JL卡斯塔尼奥费尔南德斯，E乌里巴里埃尔南德斯，Y皮诺纳瓦罗，HM加西亚桑谢斯，T巴尔马塞达佩雷斯，B塞德雷马雷罗，L加西亚伊米亚，JL佩雷基尼奥伊，C托雷斯苏亚雷斯，
申请(专利权)人：血清疫苗研究生产中心芬雷学院，
类型：发明
国别省市：CU[古巴]