灭活的嵌合疫苗和相关的使用方法技术

本发明专利技术的实施方案总地提供灭活的嵌合病毒疫苗和／或免疫原性组合物用来治疗或预防病毒感染。另外，本发明专利技术的多种其它实施方案总地涉及用所述灭活的疫苗和／或免疫原性组合物预防和治疗这些动物中的病毒感染的方法。其它实施方案包括制备用来治疗或预防这些动物中的病毒感染的疫苗或免疫原性组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】 交叉引用相关的申请本申请依据35 U. S.C. § 119要求2005-06-24提交的美国临时申 请60/693， 629的权益，特此将其全部内容以参考方式并入本文。专利
本专利技术涉及新的和改进的预防和治疗动物中黄病毒和其它密切相 关病毒感染的方法。专利技术背景黄病毒是小的有包膜的正链RNA病毒，其在全世界涉及许多医学 和兽医学问题。例如，黄病毒家族的一员-西尼罗病毒(WN，或WNV)，是 WN脑炎的致病因子，所述WN脑炎是一种感染性的，非传染性的，节 肢动物携带的病毒性疾病 (Virology, Fields (ed.) ， Raven-Lippincott， New York, 1996， pp. 961-1034)。该病毒在非洲、西 亚、中东、欧洲地中海地区以及最近在美国发现。蚊子在叮咬了受感 染的野生鸟类后感染病毒，随后通过叮咬人类、鸟类和动物如马、羊、 牛和猪来传播病毒。西尼罗病毒是一种新出现的感染性疾病。西尼罗病毒于1937在乌 干达首次分离。今天它最常见于非洲、西亚、欧洲和中东。不过，它在 1999年第一次出现在美国。到2004年，该病毒已经在除了阿拉斯加 和夏威夷外的每个州的鸟类和蚊子中发现。由黄病毒引发的其它公知疾病包括黄热病，日本脑炎，登革热， 和圣路易斯脑炎。黄病毒感染通常由蜱和/或蚊子传播。西尼罗病毒的初感染宿主只是蚊子和鸟类。据信其它动物物种如 人类和动物如马、羊、牛和猪等等只是当感染的雌蚊叮咬偶见的宿主时而被感染的偶见宿主。感染西尼罗病毒的人通常只经历轻微症状，包括发热，头痛，身 体疼痛，皮渗，和淋巴腺肿胀。不过，如果西尼罗病毒进入脑，它能够 引发威胁生命的脑炎或脑膜炎。威胁生命的情况主要发生在老年人中。 最近的研究显示西尼罗病毒可以通过输血和器官移植而传播。 一些健 康专家也相信西尼罗病毒可能从母亲传递到她的未出生孩子并通过母 乳传播。对于西尼罗病毒疫苗方法有许多开发项目，包括活的嵌合疫苗(其将来自一种以上病毒的基因合并到单一疫苗中)，棵DNA疫苗，和包 含各西尼罗病毒蛋白的混合物的疫苗，等等。不过，没有使用灭活的 嵌合疫苗的方法。通过翻译单一的，长的可读框以生成多蛋白来生产黄病毒蛋白质， 所述多蛋白质经历由宿主和病毒蛋白酶的組合进行的复杂系列的翻译 后蛋白水解剪切，以生成成熟的病毒蛋白质。在多蛋白中病毒结构蛋 白质以C-prM-E的顺序排列，其中"C"是衣壳，"prM"是病毒包膜结 合的M(膜)蛋白的前体，而"E"是包膜蛋白。这些蛋白质存在于多蛋 白的N-末端区域,而非结构蛋白(NS1, NS2A， NS2B, NS3, NS4A， NS4B， 和NS5)位于多肽的C-末端区域。2003年，Acambis (Cambridge, MA)开始了西尼罗病毒的活减毒 病毒疫苗的人类临床试验。Acambis的活减毒疫苗是基于已经用于预 防黄热病的疫苗，所述黄热病是由不同的黄病毒引发的疾病。一种Acambis活减毒疫苗包含来自两种不同病毒-黄热病毒和西 尼罗病毒的基因，是嵌合病毒的实例。这种Acambis活减毒疫苗包含 黄热病毒，其少数基因被西尼罗病毒的表面蛋白基因所替换。在例如美国专利号6， 962， 708和6, 696,281和Chambers等，J. Virol. 73: 3095-3101， 1999中提供了制备这种活减毒嵌合Acambis 疫苗的细节，将其各自全部以参考方式并入本文。在美国专利号 6， 682， 883和6， 878， 372中提供了对于Acambis活减毒嵌合疫苗的其 它使用方法和诊断学，将每一篇的全部内容以参考方式并入本文。这种活减毒疫苗的结果已经证明是成功的并且试验继续进行。不 过，活减毒疫苗的使用可能伴随着某些危险。对于免疫受损的受试者， 老年受试者，孕妇受试者，和其它免疫系统削弱或应激的受试者来i兌， 这些危险更加显著。经常地，活减毒病毒疫苗被证明减毒不足(引发疾 病)或过度减毒(不能免疫)。对于最佳减毒的活病毒疫苗来说也有可能通过突变复原成毒性(引发疾病)的形式。不过，应当注意来自Acambis 的YF-WN没有显示复原毒性迹象。对于活减毒疫苗有另外的忧虑。例 如，活登革热病毒对于热也是敏感的，这使得在一些热带和亚热带国 家保存疫苗困难并且成本高，而在这些国家可能最需要该疫苗。因此， 该领域需要一种疫苗来安全治疗和/或预防在具有这些或其它类似危 险的受试者中的黄病毒感染，如西尼罗病毒。特别是对于免疫受损的 那些或其它最为处于风险的受试者。不过，现有技术是，灭活的嵌合病毒疫苗是不理想的并且不会有 效。美国专利号6， 432，411报道制备死黄病毒疫苗的尝试只获得了非 常有限的成功。所述研究主要的局限在于不能从细胞培养系统中获得 足够的病毒产量。来自昆虫细胞的病毒产量通常在104到105pfu/ml范 围内，明显低于产生具有成本效益的死疫苗所必需的水平。来自哺乳 动物细胞包括LLC-MK2和Vero细胞的产量较高，但峰产量-来自独 特Vero细胞系的大约108pfu/ml，仍然低于获得真正具成本效益的疫 苗产品所必需的。因此，现有技术的教导背离使用灭活的黄病毒作为可行的疫苗候 选物。另外，没有教导灭活的嵌合疫苗用于治疗或预防任何黄病毒感 染。专利技术概述本专利技术的各种实施方案包括用于治疗或预防动物中的黄病毒感染 的疫苗或免疫原性组合物。本专利技术还提供预防或治疗易感动物中黄病毒感染的方法，其包括 向受试者施用灭活的嵌合黄病毒。本专利技术还提供灭活的嵌合黄病毒在制备用在这些方法中的药物和疫苗和/或免疫原性组合物中的用途。在 本专利技术的一个实施方案中，灭活的嵌合黄病毒可以包括，例如，第一种黄病毒的衣壳和非结构蛋白质，以及第二种黄病毒的prM和包膜蛋 白。在一个实施方案中，本专利技术涉及灭活的嵌合黄病毒，包含第一种 黄病毒，其中编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列被第二种黄病毒的编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列所替换。第 一种黄病毒可以是黄热病 毒，包括源自17D林的黄热病毒。嵌合病毒可以在前膜蛋白的氨基酸 末端包含信号序列，而该信号序列可以是黄热病毒的信号序列。第二 种黄病毒可以是西尼罗病毒。在另一个实施方案中，本专利技术涉及免疫原性组合物，包含灭活的 嵌合黄病毒，其包含第一种黄病毒，其中编码前膜和包膜蛋白的核苷 酸序列被第二种黄病毒的编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列所替换。在另一个实施方案中，本专利技术涉及疫苗，包含灭活的嵌合黄病毒， 其包含第一种黄病毒，其中编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列被第二 种黄病毒的编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列所替换。疫苗可以进一 步包括i)一种或多种经修饰的活病毒；ii)一种或多种失活的病毒； 或iii) 一种或多种细菌抗原。疫苗可以进一步包括失活的东方脑脊 髓炎病毒，失活的西方脑脊髓炎病毒，失活的委内瑞拉脑脊髓炎病毒， 失活的马疱渗病毒l型，失活的马疱渗病毒4型，失活的马流感病毒 林Kentucky 1993/A2,失活的马流感病毒林Kentucky 2002/A2,失 活的马流感病毒林New Market/2/93/A2和破伤风类毒素组分 (fractions)中的一种或多种。在另一个实施方案中，本专利技术涉及预防或治疗动物中黄病毒感染 本文档来自技高网...

【技术保护点】
灭活的嵌合黄病毒，包含第一种黄病毒，其中编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列被第二种黄病毒的编码前膜和包膜蛋白的核苷酸序列所替换。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：FJ斯特纳，DGE古沃尔茨，MA鲁姆，MW梅兰坎普，
申请(专利权)人：英特威国际有限公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]