一种Cox A16及EV71病毒抗原的鉴别检测方法技术

本发明专利技术提供一种Cox A16及EV71病毒抗原的鉴别检测方法，将待检COX A16或/和EV71病毒抗原、抗原阳性对照和抗原阴性对照分别加入酶标板的检测孔中，再在酶标板的其他孔加入辣根过氧化物酶标记的Cox A16抗体/EV71抗体，TMB显色液A和B，最后在酶标板的各孔中加入终止液后，用酶标仪上检测吸光度A值，所得检测结果对照情形判定。本发明专利技术特异性好、灵敏度高、方便快捷，适用于Cox A16及EV71病毒抗原两用。本发明专利技术可从一般细胞培养病变法的3～5天缩短为数小时，在较短时间内确诊患者感染的病原体，且在基层医院和疾控中心就可完成检测，能及时对症治疗和对疫情进行预防控制，是一种特异性好、灵敏度高、方便快捷的Cox A16/EV71病毒抗原检测方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种Cox A16及EV71病毒抗原的鉴别检测方法，其特征在于经过下列步骤：A、将待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品加入酶标板的孔中，再在该酶标版上分别设置Cox A16和/或EV71抗原阳性对照孔和PBS阴性对照孔，控制50～100µL/孔的加入量，并留空白调零孔，放入湿盒中，于37℃保温1～2小时后用磷酸盐缓冲液洗板3～5次；B、按50～100µL/孔的量，在A步骤的酶标板各孔中，加入辣根过氧化物酶标记的Cox A16型抗体和/或EV71抗体，放入湿盒中，于37℃保温0.5～1小时后用磷酸盐缓冲液洗板3～5次；C、在B步骤的酶标板的各孔中，分别加入TMB显色液A和TMB显色液B各50µL/孔，混匀，放入湿盒中，37℃保温10～15分钟；D、在C步骤的酶标板的各孔中按50～100µL/孔的量加入终止液后置于酶标仪上，在450nm波长下，以空白孔调零检测吸光度A值，即得检测结果，并进行下列判定：阳性对照平均A值‑阴性对照平均A值≥0.4时，则试验成立，反之应重试；Cutoff值=阴性对照的平均A值×2.1；当阴性对照的平均A值≥0.05时，则按实际值计算；当阴性对照的平均A值＜0.05时，则按0.05计算；待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品的A值≥Cutoff值，该待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品判定为阳性，待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品A值＜Cutoff值，该待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品判定为阴性；进一步地，对照下列情形判定：a、待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的Cox A16型抗体的，该孔为阳性，判定为Cox A16感染或鉴别为Cox A16病毒；该孔为阴性，判定为非Cox A16感染或鉴别为非Cox A16病毒；b、待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的EV71抗体的，该孔为阳性，判定为EV71感染或鉴别为EV71病毒；该孔为阴性，判定为非EV71感染或鉴别为非EV71病毒；c、待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的Cox A16型抗体的，以及待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的EV71抗体的，两种孔均为阳性，判定为Cox A16及EV71混合感染或鉴别为Cox A16、EV71混合病毒；待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的Cox A16型抗体的，以及待检疑含Cox A16和/或EV71病毒抗原样品中加入辣根过氧化物酶标记的EV71抗体的，两种孔均为阴性，判定为非Cox A16、非EV71感染或鉴别为非Cox A16、非EV71病毒。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢忠平，李华，龙润乡，刘正玲，杨婷，罗芳宇，谢天宏，宋霞，杨蓉，岳磊，
申请(专利权)人：中国医学科学院医学生物学研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53