一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。所述重组双歧杆菌为转化入含VP1蛋白的载体的重组双歧杆菌，是通过(1)、对重组双链E.SOD序列和pBAD/gIII载体进行酶切后连接得到pBAD/S载体；(2)、将双链EXS-(His)6-VP1基因插入双酶切后的pBAD/S载体中，转化大肠杆菌后获得阳性克隆pBAD-VP1载体；(3)、将pBAD-VP1载体转化双歧杆菌，筛选pBAD-VP1转化阳性的双岐杆菌，即得制备治疗EV71疫苗的重组双歧杆菌。本发明专利技术制备的益生菌口服疫苗既不需要注射给药，也较为经济，是一种新的预防EV71病毒感染的方式。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程
，涉及重组双歧杆菌，具体涉及一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌及其制备方法和应用。
技术介绍
手足口病是一种由肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)引起的常见传染病，被喻于二十一世纪的“脊髓灰质炎”，手足口病主要传染源是带病毒者和轻型散发病例，患者咽喉分泌物、唾液，疱疹液、粪便中均含有病毒，可通过人的消化道、呼吸道和分泌物密切接触等途径传播，其多种的传播途径及目前尚无有效的疫苗预防决定了 EV71病毒容易引起暴发性流行，因此开发有效的疫苗是手足口病防治中最为紧迫的问题之一。EV71病毒是小RNA病毒科肠道属的成员，流行范围遍及全球，1974年Schmidt等首次报道从美国加利福尼亚爆发的神经系统疾病患者中分离得到EV71。EV71核酸为单股正链RNA，基因组编码4个外壳蛋白，即VP1、VP2、VP3和VP4，4个蛋白通过拼装呈原聚体和亚单位，最终形成病毒外壳，VPU VP2、VP3暴露在病毒表面，VP4则包埋在病毒外壳内侧起连接作用。EV71病毒抗原决定簇基本上位于VPl VP3上，其中VPl蛋白集中了重要的T细胞和B细胞免疫表位，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌，其特征在于所述重组双歧杆菌为转化入外源载体的双歧杆菌，所述外源载体为含VPl蛋白编码序列的载体。2.根据权利要求I所述的重组双歧杆菌，其特征在于所述含VPl蛋白编码序列的载体为pBAD-VPl载体。3.根据权利要求2所述的重组双歧杆菌，其特征在于所述pBAD-VPl载体由pBAD/S载体和EXS-(His)6-VPl基因连接组成。4.根据权利要求3所述的重组双歧杆菌，其特征在于所述pBAD/S载体由pBAD/glll和重组双链E. SOD序列连接组成。5.根据权利要求4所述的重组双歧杆菌，其特征在于所述重组双链E.SOD序列由T7启动子和双链E. SOD序列的编码序列组成，其序列如序列表I所示。6.一种治疗EV71的疫苗，所述疫苗包括活性成分和药学上可接受的载体，其特征在于所述活性成分为权利要求I 5中任一权利要求所述的重组双歧杆菌。7.一种制备EV71疫苗的重组双歧杆菌的制备方法，包括下述步骤 (1)、对重组双链E.SOD序列和pBAD/glll载体分别进行酶切，用连接酶将双链E. SOD序列连接入双酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓启文，余治健，曾位森，
申请(专利权)人：邓启文，余治健，曾位森，
类型：发明
国别省市：