在易感哺乳动物中引起呼吸道疾病的病毒制造技术

本发明专利技术涉及病毒学领域。本发明专利技术提供一种分离的副粘病毒科肺病毒亚科内可鉴定为在系统发育上对应于Ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ及其组分的基本上为哺乳动物的负义单链ＲＮＡ病毒（ＭＰＶ）。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
在易感哺乳动物中引起呼吸道疾病的病毒本申请为分案申请，原申请的申请日为2002年1月18日，申请号为 02806763. 0(PCT/NL02/00040)，专利技术名称为“在易感哺乳动物中引起呼吸道疾病的病毒”。本专利技术涉及病毒学领域。在过去数十年中，已经鉴定了几种哺乳动物疾病的病原，尤其是呼吸道疾病(RTI) 的病原，特别是人类疾病的病原7。哺乳动物RTI的经典病原是在人类(hRSV)和反刍动 物如牛或绵羊(bRSV和/或oRSV)中发现的属于肺病毒属(Pneumovirus)的呼吸道合胞 病毒。在人RSV中，利用正反交中和测定中的差异、免疫测定中G蛋白的反应性和G基因 的核苷酸序列，确定了两个hRSV抗原性亚组。在所述亚组内，氨基酸序列显示出94% (A 亚组)或98% (B亚组)同一性，而在亚组之间仅发现53%的氨基酸序列同一性。基于 单克隆抗体、RT-PCR测定和RNA酶保护测定，在亚组内观察到额外的变异性。来自两个亚 组的病毒都有世界范围的分布，可以在一个季节中发生。在现有免疫存在下可能发生感 染，并且对于再感染，并不严格需要抗原性变异。参见例如Sullender，W. Μ.，Respiratory Syncytial Virus Genetic andAntigenie Diversity. Clinical Microbiology Reviews, 2000. 13(1) :p. 1-15 ；Collins, P. L. ，Milntosh, K.禾口 Chanock， R. Μ. ， Respiratory syncytial virus. Fields virology, B. N. Knipe, Howley, P. M.编著，1996, Philadelphia : 1 ippencott-raven. 1313-1351 ；Johnson, P. R.等，The G glycoprotein ofhuman respiratory syncytial viruses of subgroups A and B :extensivesequence divergence between antigenically related proteins. Proc NatlAcad Sci U S A,1987,84(16) p. 5625-9 ；Collins, P. L. , The moIecularBiοlogy of Human Respiratory Syncytial Virus (RSV) of the GenusPneumovirus,载于 The Paramyxoviruses, D. W. Kingsbury 编著， 1991，Plenum Press :New York,p.103-153。另一经典的肺病毒是小鼠肺炎病毒(PVM)，一般仅在实验室小鼠中发现。然而，在 哺乳动物中观察到的一定比率的疾病仍不能归因于已知的病原体。本专利技术提供一种分离的属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)肺病毒亚科 (Pneumovirinae)、可鉴定为在系统发育上对应于Metapneumovirus的基本上为哺乳动物 的负义(negative-sense)单链RNA病毒(MPV)。通过测定所述病毒的核酸序列并且在系 统发育分析中对其进行测试，例如其中采用100个引导程序和3个jumble生成最大似然进 化树，并且发现在系统发育上与对应于也称为火鸡鼻气管炎病毒(TRTV)(禽鼻气管炎的病 原)的禽肺病毒(APV)的基本禽病毒分离株相比，它更密切地对应于以1-2614保藏于巴黎 CNCM的病毒分离株，所述病毒可鉴定为在系统发育上对应于Metapneumovirus。对于所述 系统发育分析，最有用的是获得非MPV的核酸序列作为外类群(outgroup)，以便进行比较， 一种非常有用的外类群分离株可以得自禽肺病毒血清型C (APV-C)，这例如在此中的图5中 得到证实。虽然系统发育分析提供了一种鉴定病毒为MPV的便捷方法，但是此中也提供几种 其它可能更为直接但过程略多的、用于鉴定所述病毒或得自所述病毒病毒蛋白或核酸的方 法。根据经验，在用序列或保藏物与此中鉴定的分离株、病毒蛋白或核酸的比较中待鉴定病毒蛋白质或核酸的百分同源性，可以鉴定MPV。众所周知，病毒种、尤其是RNA病毒种通常构 成一个准种，其中所述病毒分类群(cluster)在其成员之间显示出异质性。因此，预期每个 分离株与此中提供的各种分离株之一的关系百分率可能略有差异。当人们希望与保藏的病毒1-2614进行比较时，本专利技术提供一种分离的属于副粘 病毒科肺病毒亚科的基本上为哺乳动物的负义单链RNA病毒(MPV)，通过测定所述病毒的 氨基酸序列，并且确定在L蛋白、M蛋白、N蛋白、P蛋白或F蛋白方面，所述氨基酸序列与 以1-2614保藏于巴黎CNCM的病毒分离株的氨基酸同源性的百分率基本上高于此中提供的 与APV-C相比的百分率，所述病毒可鉴定为在系统发育上对应于Metapneumovirus ；或者， 同样，提供一种分离的属于副粘病毒科肺病毒亚科的基本上为哺乳动物的负义单链RNA病 毒(MPV)，所述病毒通过以下步骤可鉴定为在系统发育上对应于Metapneumovirus 测定所 述病毒的核酸序列，并且确定在编码L蛋白、M蛋白、N蛋白、P蛋白或F蛋白的核酸方面，所 述核酸序列与以1-2614保藏于巴黎CNCM的病毒分离株的核酸同一性的百分率基本上高于 此中鉴定的与APV-C相比的百分率。再根据经验，当需要鉴定的分离株或者所述分离株的病毒蛋白或核酸的同源性百 分率落入本文鉴定的两个组(以分离株00-1或99-1作为相应的比较分离株)各自的所述 同源性百分率范围内，人们可以认为所述MPV属于本文鉴定的MPV两个血清学组之一。然 而，当所述同源性百分率较小，或者更需要区别所述病毒分离株与例如APV-C时，则建议优 选采用本文鉴定的系统发育分析。再者，当在测定同源性百分率时选择其它分离株时，人们应该记住，所述百分率可 能略有变化。由于提供了这种MPV，本专利技术提供用于诊断和/或治疗疾病、特别是呼吸道疾病、 特别是哺乳动物疾病、更特别是人类疾病的诊断工具和方法以及治疗工具和方法。然而， 由于基本上为哺乳动物的MPV与基本上为禽类的APV、特别是与APV-C的关系虽然远，但有 基因关联，本专利技术也提供用于诊断和治疗禽类疾病的工具和方法。在病毒学中，最好的忠 告是用对引起所述感染的所述特定病毒最具特异性的试剂，进行特定病毒感染的诊断和 /或治疗。在这种情况下，这意味着，优选用对MPV最具特异性的试剂，进行所述MPV感染 的诊断和/或治疗。然而，这决不排除使用特异性较低却有足够交叉反应性的试剂来替代 的可能性，例如因为它们更容易获得，并且足以完成眼前的任务。在此，例如提供用来源于 APV的试剂、特别是来源于APV-C的试剂来进行哺乳动物MPV感染的病毒学和/或血清学 诊断，在本文的详细描述中，例如表明，通过运用专门设计用于检测鸟类APV抗体的ELISA， 可以达到足够值得信赖的哺乳动物MPV感染的血清学诊断。用于此目的的一个特别有用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的基本上为哺乳动物的负义单链ＲＮＡ病毒（ＭＰＶ），所述病毒属于副粘病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）肺病毒亚科（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｎａｅ），并且可鉴定为在系统发育上对应于Ｍｅｔａｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ。

【技术特征摘要】
EP 2001-1-19 01200213.5;EP 2001-10-18 01203985.5一种分离的基本上为哺乳动物的负义单链RNA病毒(MPV)，所述病毒属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)肺病毒亚科(Pneumovirinae)，并且可鉴定为在系统发育上对应于Metapneumovirus。2.一种分离的负义单链RNA病毒(MPV)，所述病毒属于副粘病毒科肺病毒亚科，并且通 过测定所述病毒的核酸序列并且在系统发育进化树分析中对其进行测试，其中采用100个 引导程序和3个jumble生成最大似然进化树，并且发现在系统发育上与对应于也称为火鸡 鼻气管炎病毒(TRTV)即禽鼻气管炎的病原的禽肺病毒(APV)的病毒分离株相比，它更密切 地对应于以1-2614保藏于巴黎CNCM的病毒分离株，所述病毒可鉴定为在系统发育上对应 于 Metapneumovirus。3.—种权利要求2的病毒，其中所述禽肺病毒包括APV C型(APV-C)。4.一种权利要求1-3的病毒，其中所述核酸序列包含编码所述病毒的病毒蛋白的可读 框(0RF)。5.一种权利要求4的病毒，其中所述可读框选自编码N蛋白、P蛋白、M蛋白和F蛋白 的 0RF。6.一种权利要求5的病毒，其中所述可读框选自编码SH蛋白或G蛋白的0RF。7.—种权利要求1-6中任一项的病毒，所述病毒包含在系统发育上对应于图6所示的 序列的核酸或功能片段。8.—种权利要求1-7中任一项的病毒，所述病毒包括以1-2614保藏于巴黎巴斯德研究 所CNCM的MPV分离株或者与其在系统发育上对应的病毒分离株。9.一种可从患有呼吸道疾病的人中分离的权利要求8的病毒。10.一种可得自权利要求1-9中任一项的病毒的分离或重组的核酸或其MPV特异性功 能片段。11.一种载体，所述载体包含权利要求10的核酸。12.—种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求10的核酸或权利要求11的载体。13.一种由权利要求10的核酸编码的分离或重组的蛋白性分子或其MPV特异性功能片段。14.一种抗原，所述抗原包含权利要求13的蛋白性分子或其MPV特异性功能片段。15.一种抗体，所述抗体特异性地针对权利要求14的抗原。16.一种鉴定病毒分离株为MPV的方法，所述方法包括使所述病毒分离株或其组分与 权利要求15的抗体反应。17.一种鉴定病毒分离株为MPV的方法，所述方法包括使所述病毒分离株或其组分与 权利要求10的核酸反应。18.一种权利要求16或17的方法，其中所述MPV包括人MPV。19.一种病毒分离株，所述病毒分离株可用权利要求16-18中任一项的方法鉴定为副 粘病毒科肺病毒亚科的哺乳动物负义单链RNA病毒，并且可被鉴定为在系统发育上对应于 Metapneumovirus。20.一种用于病毒学诊断哺乳动物MPV感染的方法，所述方法包括通过使所述哺乳动 物的样品与权利要求10的核酸或权利要求15的抗体反应，测定所述样品中病毒分离株或 其组分的存在情况。21.一种用于血清学诊断哺乳动物MPV感染的方法，所述方法包括通过使所述哺乳动 物的样品与权利要求13的蛋白性分子或其片段或者权利要求14的抗原反应，测定所述样 品中特异性针对MPV或其组分的抗体的存在情况。22.一种用于诊断MPV感染的诊断试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-9中任一项的病 毒、权利要求10的核酸、权利要求13的蛋白性分子或其片段、权利要求14的抗原和/或权 利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：JC德永，RAM福基尔，BG范登霍根，ADME奥斯特豪斯，J格罗恩，
申请(专利权)人：维洛诺瓦蒂夫公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]