磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法技术

一种磁标记免疫蛋白检测卡及检测方法，属于生物检测技术领域，其特征是：检测卡的正表面上有加样孔和上检测孔，卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔，检测卡内有内膜，内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。其方法是：将标本加到检测卡样品孔中，而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中，当反应完成后，多功能磁免疫蛋白质分析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁变化，进而测定出待测成分的浓度。有益效果是：结合现代物理学与生物学技术原理，研发生产的磁性检测方法，具有高灵敏度、灵活性强、干扰性低及经济实用等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测
，涉及一种医药卫生、疾病监测、 畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它工农业质量检测设备的改 进。
技术介绍
蛋白质测定是临床常规检査项目，对疾病的初步诊断具有一定的 临床参考意义。蛋白质分析可分为湿式和干式化学系统两大类。湿式 系统实际上是机械化了的试管法，采用光电比色分析，属于自动生化 分析仪。自动生化分析仪具有检测速度快、准确和检测项目多的特点。 适用于大、中型医院使用。干式系统即卡式蛋白质测定仪，它具有自 动识别、扫描、数据分析及报告等功能，有较高检验灵敏度、特异性、准确性，测定时间为3-15分钟。检测卡均为一次性胶体金或荧光标 记，目前只有德国、美国、日本等少数发达国家拥有此项技术和产品， 由于检测卡的成本较高，国内目前仅有大、中型医院使用卡式蛋白质 测定仪。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种，它是利用抗体-抗原-抗体-磁双夹心的免疫层析原理，制备一种蛋白质检测卡和与 其配套使用的磁敏传感设备，建立一种对生物样品中蛋白质(抗原/ 抗体)含量进行测定的检测方法。通过检测磁卡测试区磁标记抗体(抗 原)的磁强度来反映标记在样品区域的蛋白质含量，利用标记的免疫 复合物-磁场强度的标准曲线，计算出待测生物样品中蛋白质的量。
技术实现思路
本专利技术技术方案是 检测卡的结构是检测卡的正表面上有加样孔和前检测孔，卡的背表面上有一条与 检测孔长、宽度一致的后检测孔，检测卡内有内膜，内膜由样本吸收 垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。玻璃纤维素膜预先与磁标记单克隆抗体结合。硝酸纤维膜预先已喷涂上多克隆抗体检测线和抗鼠单克隆抗体 质控线。检测方法是将标本加到检测卡样品孔中，而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋 白质分析仪中，标本由于毛细作用沿着膜渗透，标本中的待测定成分 与磁标记抗体结合而形成抗原抗体复合物；此复合物和磁标记抗体随 后在检测区和质控区被固定；当反应完成后，多功能磁免疫蛋白质分 析仪扫描分析检测卡检测区和质控区磁变化，进而测定出待测成分的 浓度。本专利技术的有益效果是结合现代物理学与生物学技术原理，研发生产的磁性检测方法， 具有高灵敏度、灵活性强、干扰性低及经济实用等特点，可广泛应用 于医药卫生、疾病监测、畜禽检疫、食品卫生安全、环境监测及其它 工农业质量检测领域。附图说明图l是本专利技术的立体剖视图2是本专利技术主视图3是本专利技术后视图4是本专利技术检测卡检测前侧视图5是本专利技术检测卡检测中侧视图6是本专利技术空白检测卡图7是本专利技术阳性检测卡图8是本专利技术阴性检测卡图9是本专利技术失效检测卡具体实施例方式下面结合附图对本专利技术做进一步描述如图所示，l是检测卡内膜、2是上检测孔、3是加样孔、4是多功能磁免疫蛋白质分析仪磁传感器、5是多功能磁免疫蛋白质分析仪 偏置磁场、6是下检测孔、7是卡的正表面、8是卡的背表面；11是 内膜样本吸收垫、12是内膜玻璃纤维素膜、13是内膜硝酸纤维膜、 14是抗3 a -HSD多克隆抗体检测线、15是抗鼠单克隆抗体质控线、 16是内膜液体吸收垫。检测卡为干片小包装单人份形式。每个检测卡均内置一个或多 个检测项目特异的聚酯薄膜硝化纤维免疫层析带。检测反应及独立的 内部质控反应均在该层析带上进行。通过调控检测间的各种变异而提 供可靠的检测结果。最根本的特性是省去了标本的复杂预处理过程， 在采样现场即刻进行分析，快速得到检验结果，这是其他检验方法无 法实现的。测定分析时，操作者将标本加到检测卡样品孔中，而后将检测卡 插入多功能磁免疫蛋白质分析仪中，标本由于毛细作用沿着膜渗透， 标本中的待测定成分与标记抗体结合而形成抗原抗体复合物。此复合 物和标记抗体随后在检测区和质控区被固定。当反应完成后，多功能 磁免疫蛋白质分析仪扫描分析层析带并检测检测区和质控区磁的变 化，进而测定出待测成分的浓度。实施例1 (以3 a -HSD检测为例) 1.材料与方法1.1抗原、抗体及实验材料的来源3a-HSD抗原、3ci-HSD单克隆及多克隆抗体均为自制；羊抗鼠 IgG多抗、纳米磁粉和检测卡外壳、玻璃纤维素膜和硝酸纤维素膜外 购。1. 2磁免疫抗体的制备方法将空白磁珠用pH 3.6， 0.05 MHAc-NaAc缓冲液洗两遍后悬浮，每 mg磁珠加入10 mg碳二亚胺(CMC)禾B 5 u L3 a -HSD单克隆抗体，于室 温缓慢摇动2 h，在磁场中去除上清，洗涤后除未结合的3a-HSD单克隆抗体，真空冷冻干燥备用。1.3.磁标记免疫蛋白检测卡的制备检测卡为干片小包装单人份形式。为一个7X3X0. 6 cm的塑料 扁卡(图1)，卡的正表面(图2)上(7)有加样孔(3)和上检测孔(2)，卡的背表面(图3)上(8)有一条与检测孔长、宽度一致的 下检测孔(6)。检测卡内膜(1)由四部分组成，其结构依次为样本 吸收垫(11)、玻璃纤维素膜(12)、硝酸纤维膜(13)和液体吸收 垫(16);其中样本吸收垫(11)负责吸收样品并为玻璃纤维素膜(12)提供样品；玻璃纤维素膜(12)预先与磁标记3 a-HSD单克隆 抗体结合，它可使样品在此与磁标记3 a -HSD单克隆抗体进行反应， 并使液体继续向硝酸纤维素膜(13)流动；硝酸纤维膜(13)(孔径 0.45 ym)预先已喷涂上抗3a-HSD多克隆抗体检测线(14)和抗鼠 多克隆抗体质控线(15)，它接受已在玻璃纤维素膜与磁标记3 a -HSD 单克隆抗体反应后的液体样品，使之在层析流动过程中与在膜上的抗 3ct-HSD多克隆抗体(14)和抗鼠多克隆抗体(15)结合，形成磁聚 集区；液体吸收垫(16)负责吸收反应完成后多余的液体。将包被后 的玻璃纤维素膜、硝酸纤维素膜和样本/液体吸收垫按11、 12、 13、 16顺序，衔接咬合组装成检测卡的内膜(1)。下面以3a-羟类固醇脱氢酶(3a-HSD)检测为例介绍卡的基本 原理检测卡的基本原理是抗体-抗原-抗体-磁夹心法。生成磁标 记试剂的关键是筛选特异性强、灵敏度高的抗体以及磁标记抗体的制备。其原理是在玻璃纤维素膜上(12)预包被磁标抗3 a -HSD单抗 (磁Abl)，硝酸纤维素膜上(13)检测线(14)和对照线上(15) 分别包被抗3 a-HSD多抗(Ab2)和抗鼠多克隆抗体。检测时，样本 中3 a -HSD可与磁-抗体(磁Abl)结合形成复合物，由于层析作用 复合物沿纸条向前移动。如为阳性样本，则与检测线预包被的抗体 (Ab2)结合形成磁-Abl- 3 a-HSD -Ab2夹心物而形成磁凝聚。 滴加被检样本后，吸水材料使待检样品缓慢移动，反应体系开始启动。 空白检测前在检测卡的检测区(14)和对照区(15)无磁沉积 对照线出现(图6)。阳性若被检样品中3 a-HSD浓度大于检测临界值，3 a-HSD在 玻璃纤维素膜(12)先与反应体系的磁标鼠抗人抗体(磁Abl)发生 反应，形成磁标抗原-抗体复合物。此复合物继续移动，再与反应体 中包被在硝酸纤维膜(13)的抗体相遇，在硝酸纤维膜上形成磁Abl-3 a-HSD _ Ab2的免疫复合物，在检测区有一条磁沉积反应线(14) 出现。同时，过量的磁Abl继续移动与反应膜包被的抗鼠多克隆抗体 结合，在对照区形成第二条磁沉积反应线(15)。这表明被检样品中 有3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磁标记免疫蛋白检测卡，其特征是：检测卡的正表面上有加样孔和上检测孔，卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔，检测卡内有内膜，内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。

【技术特征摘要】
1、一种磁标记免疫蛋白检测卡，其特征是检测卡的正表面上有加样孔和上检测孔，卡的背表面上有一条与检测孔长、宽度一致的下检测孔，检测卡内有内膜，内膜由样本吸收垫、玻璃纤维素膜、硝酸纤维膜和液体吸收垫依次衔接咬合组装。2、 一种磁标记免疫蛋白检测卡的检测方法，其方法是将标本 加到检测卡样品孔中，而后将检测卡插入多功能磁免疫蛋白质分析仪 中，标本由于毛细作用沿着膜渗透，标本中的待测定成分与磁标记抗 体结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯玥，于源华，马书林，许淑芬，于化东，史国全，
申请(专利权)人：侯玥，于源华，马书林，许淑芬，于化东，史国全，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]