植物乳杆菌活菌制剂的制备方法及其在防治仔猪拉稀上的应用技术

本发明专利技术公开了一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法及其在防治仔猪拉稀上的应用，其特征在于，它采用一种或一种以上植物乳酸杆菌，通过一套实用的发酵培养工艺，制成单一或者复合活菌制剂：菌水和干粉菌。产品质量要求为：液体菌要求为活菌数ＣＦＵ＞１０８／ｍｌ，为透明浅黄色液体，ｐＨ为２．５－４．５之间；干粉菌为粉末，活菌数ＣＦＵ＞１０８／ｇ，粉末粒度为１００％过６０目；在断奶期间或其他阶段的仔猪发生细菌性拉稀时，在猪的饮水中加入万分之一到百分之二菌水，在饲料中添加万分之一到百分之二的菌粉，用量依照症状的严重程度和产品有效活菌含量增减，给小猪饮水和采食，能有效地减轻或治疗细菌性拉稀、消化不良引起的拉稀。

Application of Lactobacillus preparation method of live bacteria preparation and the prevention and treatment of diarrhea in piglets

The invention discloses a method for preparing probiotics Lactobacillus plantarum and its application in the prevention and treatment of piglet diarrhea, which is characterized in that it uses one or more plant lactobacillus, through a set of practical fermentation process, made of single or compound probiotics bacteria and bacteria powder: water. Product quality requirements: requirements for liquid bacteria living bacteria number > 108 CFU / ml, for light yellow transparent liquid, pH was 2.5 - 4.5; dry powder for bacteria, bacteria number > 108 CFU / g 100% powder particle size is 60 mesh; during the weaning period or other stage of bacterial piglet diarrhea, add 1/10000 to two percent water bacteria in pigs in drinking water, 1/10000 to two percent bacteria powder added in the feed amount, in accordance with the severity of symptoms and living bacteria quantity, water and feed to pigs, can effectively reduce or treat bacterial diarrhea caused by indigestion, diarrhea.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物科技
，更具体地说是涉及微生物技术在动物生产中应用。
技术介绍
目前，仔猪拉稀是养猪生产中常见的疾病，也是影响养猪生产发展、经营效益的最关键的环节之一。目前生产中经常的防治措施主要有抗生素，抗菌天然物质，包括中药添加剂、高铜技术、益生素等技术。 抗生素是最经常使用的技术措施，饲料中抗生素长期使用有严重的后果，这点越来越被业界和社会认识到。1、细菌产生耐药性；2、药物在动物体内或肉、蛋、奶中的残留；3、通过食物链危害人类健康；4、严重的环境(水、土壤)污染；5、动物体内微生态遭到破坏。 各国政府和机构出台了一系列的有关法律法规，对抗生素的使用加以限制严禁人畜抗生素共用；2001年我国规范了饲料药物添加剂的使用目录；2001年我国规定处方兽药不得在商品饲料中添加，只能现场用药；2005年12月31日前，所有兽药生产企业必须通过GMP验收；从2006年1月1日开始，欧盟全面禁止在饲料中添加抗生素。 由于抗生素使用的问题，天然植物提取物包括中药添加剂使用，是过去一段时间开始的发展方向，他避免了抗生素使用的一些问题。但这个领域的研究工作量很大，还有漫长的路要走。 高铜为主的微量元素的超量添加技术，在养猪业中也应用了二十多年，在防治断奶仔猪拉稀方面很有成效，但铜本身是重金属，对猪肉、肥料、土地的污染，在不久的将来就会显现出来。 益生素是指在动物微生态理论指导下，采用体内有益微生物，经培养、发酵、干燥等特殊工艺制成的生物制剂或活菌制剂。益生素用于防治猪拉稀、促进生长、饲料利用，这是过去二十年来，动物饲养领域的重要发展。 益生素调节动物消化道的微生态平衡，促进动物生长；增强机体对疾病的抵抗能力，提高免疫力；无毒副、无残留，绿色、环保、安全；改善肉蛋品质，显著提高经济、生态和社会效益这些已为行业所普遍接受。 高活性的益生菌可以产生多种消化酶，促进营养物质的吸收；益生菌可以产生多种活性物质，以调节机体对营养物质的利用；益生菌可以产生B族维生素和维生素K，促进动物的代谢机能；益生菌可以产生多种非特异性免疫调节因子，增强动物机体对疾病的抵抗力；益生菌有利于维持消化道菌群的正常化，抑制病原微生物的繁殖。 初生仔猪的胃肠道是无菌的；仔猪出生3小时内即可以检测出肠道的小型微生物群落；仔猪出生后24小时内，空肠、回肠、盲肠和直肠就定植了双歧杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌、肠球菌、类杆菌、小梭菌、优杆菌和酵母菌等；仔猪出生后8-22日龄达到高峰并逐步形成一个定型的菌群，随日龄增长各菌群数略下降。 仔猪消化道微生物的主要来源是母体的粪便微生物；正常情况下乳酸杆菌为优势菌，猪肠道的嗜酸乳酸杆菌和发酵乳酸杆菌是主要的乳酸杆菌；病态情况下，特别是消化到疾病(如下痢)时则以大肠杆菌为优势菌；肠道内的天然菌群至少由400多种不同类型的细菌，胃、十二指肠、回肠、盲肠和直肠都由乳酸杆菌和大肠杆菌，但芽孢杆菌和肠球菌则不出现于胃和十二指肠。 大多数单胃动物的肠道微生物群落是相似的，其区系和数量与人类似；消化道前段主要是耐氧的格兰氏阳性菌，后段为厌氧菌；仔猪断奶前以乳酸杆菌、双歧杆菌等为优势菌，2月龄后以乳酸杆菌为优势菌；成年猪消化道各部位的微生物以乳酸杆菌为优势菌。断奶时，由动物性营养改变为植物性营养，动物本身必须迅速调节并适应日粮的变化，肠道里的微生物也必须迅速调整并适应日粮底物的不同，这一过程往往下痢死亡率高； 断奶时，仔猪小肠内出现大量的溶血性大肠杆菌和轮状病毒；断奶时，仔猪肠道ra值上升，使乳酸杆菌数量减少，大肠杆菌数量增加，菌群平衡打破；胃肠道内产酸乳酸杆菌数量减少，加剧消化道ra值升高；仔猪断奶后3天肠道内乳酸杆菌数量最少，并于第7天升至最高点，同时，大肠杆菌在第3-7天数量最多。 基于上述众多动物微生物研究成果，如何为养猪等动物养殖行业提供了一个有效防治幼仔拉稀的技术途径已成为人们值得探讨的课题。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了解决现有技术之不足而提供的一种菌种的培养条件要求不苛刻，发酵培养简便，而且培养基简单、便宜、容易获得的植物乳杆菌活菌制剂的制备方法。 本专利技术的另一目的是提供一种有效防治仔猪拉稀的方法，这方法不使用抗生素、以及传统的中草药、也不使用超量铜等重金属添加。 本专利技术是采用如下技术解决方案来实现上述目的一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤 a、活化菌种，取两株植物乳杆菌作为母菌，采用MRS培养基，在培养温度为30士2t:环境下，斜面活化培养24 48小时； b、放大培养，将活化的母菌在三角瓶中液体发酵，三角瓶放大培养时间为24 48小时，培养温度30±2°C ; c、生产发酵，在发酵槽内培养24 48小时，培养温度30士2t:; d、制备活菌制剂，包括制成液体和干粉两种形态，在生产液体发酵后，取上清液，过10微米真空纤维过滤器过滤取清液，即成所需菌液；将所得菌液和固体饲料载体按每10 35升菌水加入100公斤的饲料载体的比例，混合，在30士5t:的环境下，发酵8 24小时，然后在45±21:的条件下干燥至水分低于10%，粉碎，包装即得所需的固体菌。 作为上述方案的进一步说明，在所述方法步骤a中培养母菌过程中，采用的MRS培养基的成份配方为在每升蒸馏水中加入酪蛋白胨8 10g，牛肉膏8 10g，酵母提取物4 6g，葡萄糖4 5g，乙酸纳4 5g，柠檬酸二胺2 3g，吐温80 0. 5 1. 5g， K2HP04 1 2g， MgS04. 7H20 0. 1 0. 3g， MnS04. H20 0. 04 0. 06g， CaC03 18 22g，琼脂10 15g。 在所述方法步骤b活化的母菌在三角瓶中发大培养过程中，放大用培养基以脱脂大豆粉和蔗糖为基础成分，该放大用培养基的配方为在25L的蒸馏水中加入脱脂大豆粉75 80g，蔗糖18 20g，柠檬酸二胺1 2g， K2HP04 1 3g， MgS04. 7H20 0. 1 0. 3g，MnS04. H20 0. 04 0. 06g， CaC0318 22g。 在所述方法步骤c的生产发酵过程中，以豆粕、玉米、麸皮、水为培养基成份，该培养基的配方为在25L的纯净水中加入豆粕45 50g，玉米30 33g，麸皮15 18g。 在所述方法步骤d的制备活菌制剂过程中，用于接种固体发酵，并作为载体的固体饲料配方(按重量百分比算)为玉米粉28 31%，豆粕49 52%，麸皮19 20%，猪复合微量元素、维生素0. 4 0. 5% 。 在所述方法步骤d的制备活菌制剂过程中，得到的液体菌活菌数CFU > 107ml，为透明浅黄色液体，^为2. 5-4. 5之间；干粉菌为粉末，活菌数CFU〉 107g，粉末粒度为100%过60目。 —种植物乳杆菌活菌制剂在防治仔猪拉稀上的应用方法，其特征在于，它是在断奶期间或其他阶段的仔猪发生细菌性拉稀时，在猪的饮水中加入万分之一到百分之二菌水，在饲料中添加万分之一到百分之二的干粉菌，给小猪饮水和采食。 本专利技术采用上述技术解决方案所能达到的有益效果是 1、本专利技术采用一种或一种以上植物乳酸杆菌，通过一套实用的发酵培养工艺，制成单一或者复合活菌制剂菌水和干粉菌；在断奶期间或其他阶段的仔猪发生细菌性拉稀时，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：　　　　ａ、活化菌种，取两株植物乳杆菌作为母菌，采用ＭＲＳ培养基，在培养温度为３０±２℃环境下，斜面活化培养２４～４８小时；　　　　ｂ、放大培养，将活化的母菌在三角瓶中液体发酵，三角瓶放大培养时间为２４～４８小时，培养温度３０±２℃；　　　　ｃ、生产发酵，在发酵槽内培养２４～４８小时，培养温度３０±２℃；　　　　ｄ、制备活菌制剂，包括制成液体和干粉两种形态，在生产液体发酵后，取上清液，过１０微米过滤器过滤取清液，即成所需菌液；将所得菌液和固体饲料载体按每１０～３５升菌水加入１００公斤的饲料载体的比例，混合，在３０±５℃的环境下，发酵８～２４小时，然后在４５±２℃的条件下干燥至水分低于１０％，粉碎，包装即得所需的固体菌。

【技术特征摘要】
一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤a、活化菌种，取两株植物乳杆菌作为母菌，采用MRS培养基，在培养温度为30±2℃环境下，斜面活化培养24～48小时；b、放大培养，将活化的母菌在三角瓶中液体发酵，三角瓶放大培养时间为24～48小时，培养温度30±2℃；c、生产发酵，在发酵槽内培养24～48小时，培养温度30±2℃；d、制备活菌制剂，包括制成液体和干粉两种形态，在生产液体发酵后，取上清液，过10微米过滤器过滤取清液，即成所需菌液；将所得菌液和固体饲料载体按每10～35升菌水加入100公斤的饲料载体的比例，混合，在30±5℃的环境下，发酵8～24小时，然后在45±2℃的条件下干燥至水分低于10％，粉碎，包装即得所需的固体菌。2. 根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于在所述 方法步骤a中培养母菌过程中，采用的MRS培养基的成份配方为在每升蒸馏水中加入酪蛋 白胨8 10g，牛肉膏8 10g，酵母提取物4 6g，葡萄糖4 5g，乙酸纳4 5g，柠檬酸二 胺2 3g，吐温800. 5 1. 5g， K2HP04 1 2g， MgS04. 7H20 0. 1 0. 3g， MnS04. H20 0. 04 0. 06g， CaC03 18 22g，琼月旨10 15g。3. 根据权利要求1所述的一种植物乳杆菌活菌制剂的制备方法，其特征在于在所述 方法步骤b活化的母菌在三角瓶中发大培养过程中，放大用培养基以脱脂大豆粉和蔗糖为 基...

【专利技术属性】
技术研发人员：许民强，黄宇慧，张生秘，张方西，
申请(专利权)人：许民强，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]