The invention discloses a method and application for detecting bar gene sugarcane. The present invention is processed in the herbicide solution by direct soaking of sugarcane leaves will be detected, while in sugarcane leaves do not contain bar gene as a control. The degree of injury can be judged by direct observation results. This method is applied to the identification of sugarcane plants containing bar gene, especially suitable for the rapid detection of transgenic plants, which can greatly reduce the molecular detection of transgenic plants, greatly improve the detection efficiency, reduce the cost of testing.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种检测转抗除草剂基因甘蔗的方法,特别涉及一种检测转bar基因 甘蔗的方法和应用。
技术介绍
随着分子生物学的发展,转基因技术在作物育种上的应用也越来越广泛。目前,转基因作物的面积逐年增加,含有抗除草剂转基因作物在目前种植的转基因作物中占比例最大。杂草每年给甘蔗生产带来巨大损失,研制抗除草剂转基因甘蔗有极大的经济价值。bar基因是现在应用比较广泛的抗除草剂基因,导入该基因能够提高甘蔗对除草剂BASTA的耐性,从而生产上通过喷洒除草剂能够有效的杀灭杂草而对抗除草剂转基因甘蔗没有危害。同时bar基因常常作为植物转基因研究中的抗性标记基因,在植物转基因研究中广泛应用。快速鉴定出bar基因在甘蔗生产和甘蔗转基因研究中都有重要的作用。 目前较为常规的bar基因检测方法包括PCR, SOUTHERN BLOT, NORTHERN BLOT和涂抹法等。这些方法都需要一定的实验条件,程序复杂、操作繁琐、成本高。特别是前两种方法还不能确定外源基因的表达量。涂抹法容易受到外界影响,而且不一致,给实验带来误差,导致结果不准确。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺点与不足,本专利技术的首要目的在于提供一种检测转bar基 因甘蔗的方法。 本专利技术的另一 目的在于提供上述检测转bar基因甘蔗方法的应用。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现一种检测转bar基因甘蔗的方法,包括以下步骤 (1)选取生长部位一致的野生型甘蔗叶片,剪成长度为2 5cm的小段,分别浸没 于5ml的不同浓度梯度的膦丝菌素溶液中,然后置于人工气候箱中进行培养3 5天观察 结果,确定能够伤害野生型甘 ...
【技术保护点】
一种检测转bar基因甘蔗的方法,其特征在于包括以下步骤: (1)选取生长部位一致的野生型甘蔗叶片,剪成长度为2~5cm的小段,分别浸没于5ml的不同浓度梯度的膦丝菌素溶液中,然后置于人工气候箱中进行培养3~5天观察结果,确定能够伤害野生型甘蔗叶片的膦丝菌素溶液的最低浓度,导致野生型甘蔗叶片刚刚全部变黄的膦丝菌素溶液的浓度为最低浓度; (2)取待检测的甘蔗叶片,剪成长度为2~5cm的小段,同时取与待测甘蔗叶片老嫩程度相同的野生型甘蔗叶片作为对照,同样剪成2~5cm小段,分别置于5ml能够伤害野生型甘蔗叶片的膦丝菌素溶液的最低浓度中,在人工气候箱中以与步骤(1)相同的培养条件培养3~5天;然后通过和作为对照的野生型甘蔗叶片比较,叶片保持绿色的即为抗除草剂转基因甘蔗,同时通过观察叶片的伤害程度还能初步判断bar基因在转基因甘蔗中的表达量的大小。
【技术特征摘要】
一种检测转bar基因甘蔗的方法,其特征在于包括以下步骤(1)选取生长部位一致的野生型甘蔗叶片,剪成长度为2~5cm的小段,分别浸没于5ml的不同浓度梯度的膦丝菌素溶液中,然后置于人工气候箱中进行培养3~5天观察结果,确定能够伤害野生型甘蔗叶片的膦丝菌素溶液的最低浓度,导致野生型甘蔗叶片刚刚全部变黄的膦丝菌素溶液的浓度为最低浓度;(2)取待检测的甘蔗叶片,剪成长度为2~5cm的小段,同时取与待测甘蔗叶片老嫩程度相同的野生型甘蔗叶片作为对照,同样剪成2~5cm小段,分别置于5ml能够伤害野生型甘蔗叶片的膦丝菌素溶液的最低浓度中,在人工气候箱中以与步骤(1)相同的培养条件培养3~5天;然后通过和作为对照的野生型甘蔗叶...
【专利技术属性】
技术研发人员:王继华,曹干,张剑亮,
申请(专利权)人:广东省农业科学院作物研究所,
类型:发明
国别省市:81[中国|广州]
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