基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法技术

本发明专利技术公开了基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法，该方法利用可特异性连接环化的寡核苷酸链作为探针与转基因物种的靶基因杂交后在ＤＮＡ连接酶的作用下形成环化单链探针，该探针在恒温条件下被生物素复制引物滚动复制和支链扩增，产生含有多个串连重复片段的生物素化滚环扩增产物，扩增产物与钌标记的ＤＮＡ探针杂交，再通过链霉亲和素包被的磁珠分离、电化学发光检测，判断转基因的有无。本发明专利技术的滚环扩增检测方法中所扩增的基因并不是转基因物种的原基因序列而是探针序列，转基因物种的原基因只是提供了一个探针环化的互补支架，保证了扩增的安全性和特异性；另外所有的扩增过程都可在恒温下完成，无需ＰＣＲ仪，降低了对实验硬件的要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于转基因检测
，特别涉及一种基于滚环扩增技术检测转 基因物种的方法。
技术介绍
随着现代生物技术的发展，转基因食品已逐步进入普通百姓的生活。由于 转基因食品所具有的潜在非安全件，为保护广大消费者的权益，满足其选择权 和知情权以及出于国际贸易的需要，转基因食品的检测越来越引起各国政府和 有关食品监督机构的重视。目前转基因产品检测方法分为两大类-1、 免疫学检测法免疫学检测法是从蛋白质水平对转基因食品进行检测，即对外源蛋白质的测定。可将其分为Western杂交、酶联免疫法(ELISA)、试纸条法和快速检 测试剂盒法。免疫学检测法，其基本原理是通过抗原(antigen)抗体(antibody) 之间的特异反应来实现的。这种方法的不足在于第一，由于抗原抗体反应的 专一性，因此一种试剂盒只针对一特定转基因产物，无法高通量、快速地检测 具有多种混合成分的食品样品；第二，加工过的转基因食品中的蛋白质抗原性 很容易破坏，从而影响检测结果的准确性；第三，有些转基因食品不表达蛋 白质或表达量很低或很大时，则无法进行检测。2、 PCR检测法PCR检测法是目前转基因存在的检测方法屮最为成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于滚环扩增技术检测转基因物种的方法，其特征在于包括以下步骤：　　　　（１）从转基因物种样品中提取样品的基因组ＤＮＡ即靶基因１；　　　　（２）将靶基因１与过量的靶基因探针２混合，９０～９５℃变性，然后自然冷却到室温，靶基因１与靶基因探针２退火、杂交；　　　　（３）然后加入２～５个单位ＤＮＡ连接酶，３７℃下进行连接反应２０～３０分钟，靶基因探针２被ＤＮＡ连接酶连接成环化探针３；　　　　（４）在上述环化探针３中加入过量的与环化探针３互补的生物素化的复制引物４、１０～１５个单位ＤＮＡ聚合酶和１～３毫摩尔ｄＮＴＰｓ，在３７℃进行滚环扩增复制反应９０分钟，产生生物素化滚环扩增产物５；　　　　（５）在...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邢达，周小明，朱德斌，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]