【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物基因工程，具体涉及一种柑橘木虱dcs44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用。
技术介绍
1、黄龙病(huanglongbing,hlb)是当前全球柑橘产业最具有毁灭性的病害，又称柑橘“癌症”。目前，尚未发现抗hlb柑橘品种，且对感病树体缺乏有效的治疗方法，只砍掉病株减少传播菌源(grafton-cardwell et al.,2013；alquézar et al.,2022)。我国hlb常年发生面积超过200万亩，其中江西、广东、广西、福建等柑橘产区面临着hlb的严重威胁(fu etal.,2020；zhou,2020)。柑橘木虱(diaphorina citri kuwayama)是传播黄龙病菌的最主要虫媒，而控制木虱虫口数量是防止黄龙病扩散成灾的关键措施之一。当前，柑橘木虱防控主要通过喷洒农药，而大规模和高频率使用农药造成了抗药性木虱、水土污染和药物残留等问题。因此，面对日益严重的柑橘黄龙病和环境问题，降低化学农药使用量，开发绿色无公害的柑橘木虱防控方法显得十分重要和迫切。
技术实现思路
1、鉴于此，本专利技术提供一种柑橘木虱dcs44基因在防治柑橘黄龙病中的应用。测定了dcs44基因沉默对木虱存活的影响，实验结果表明：dcs44基因沉默后，柑橘木虱的死亡率显著增加，对于柑橘木虱防治以及抗木虱植物的培育具有重大价值。
2、为达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术目的之一是提供一种柑橘木虱dcs44基因在防治柑橘木虱
4、atggcgactttgtccgcgaaaatcttcatgtatatgtttatcgtatatgtcgcggtctctcaggtggagtgcgagccaccagctccagcaccaactgacgccaccaaacgtgcagaaagtccggccgaagagaaactcaatccagcggaggtcgaaaaacaaaacaaaatcctcgactgtgtcttcgagaatgttcaaaagaagtatcaggttaacggtgtatcaaaggaacagtttgacaagaatatacgcttgtccgacgaggacagtatgaagactttgttcgaatctgcaggctttaagggaaatattggggaattgttcgattatattgacttctcttttgaggtgtgctgggcaaagcctcagactacaaacggatcagctaatgccccctcttcatag。
5、进一步地，所述应用通过dcs44基因沉默使柑橘木虱死亡从而减少传播来防治柑橘黄龙病。
6、进一步地，所述基因沉默为采用rna干扰技术进行基因沉默。
7、进一步地，所述rna干扰技术包括如下步骤：以柑橘木虱cdna为模板，通过pcr技术，使用扩增引物获得dcs44基因的部分片段，扩增产物连接入质粒中，以质粒为模板，用含启动子的引物进行扩增，扩增产物胶回收，合成dsrna；稀释合成的dsrna，显微注射柑橘木虱。
8、进一步地，所述扩增引物如下：
9、dcs44 f:atggcgactttgtccgcga；
10、dcs44 r:ctatgaagagggggcattagctg。
11、进一步地，所述含启动子的引物如下：
12、dcs44-t7 f:ggatcctaatacgactcactatagggccagctc cagcaccaac，
13、dcs44-t7 r:ggatcctaatacgactcactataggggtctga ggctttgccca。
14、进一步地，所述质粒为-blunt。
15、本专利技术目的之二是提供一种生物杀虫制剂，所述生物杀虫制剂包含柑橘木虱dcs44基因的dsrna。
16、进一步地，所述dsrna一条链的核苷酸序列seq id no.2具体如下所示：
17、ccagctccagcaccaactgacgccaccaaacgtgcagaaagtccggccgaagagaaactcaatccagcggaggtcgaaaaacaaaacaaaatcctcgactgtgtcttcgagaatgttcaaaagaagtatcaggttaacggtgtatcaaaggaacagtttgacaagaatatacgcttgtccgacgaggacagtatgaagactttgttcgaatctgcaggctttaagggaaatattggggaattgttcgattatattgacttctcttttgaggtgtgctgggcaaagcctcagac。
18、本专利技术目的之三是提供一种柑橘木虱dcs44基因在培育抗柑橘木虱和抗黄龙病品种中的应用。
19、本专利技术的有益效果为：
20、筛选合适的靶标基因是rnai抗虫的前提，本专利技术将dcs44 dsrna导入木虱体内，测定了dcs44基因沉默对木虱存活的影响，实验结果表明dcs44基因沉默后，柑橘木虱的死亡率与对照gfp dsrna相比显著增加，在注射dcs44 dsrna 10天后柑橘木虱死亡率高达68％，对于柑橘木虱防治以及抗木虱植物的培育具有重大价值。
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1.柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用，其特征在于，所述柑橘木虱DcS44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用通过DcS44基因沉默使柑橘木虱死亡从而减少传播来防治柑橘黄龙病。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基因沉默为采用RNA干扰技术进行基因沉默。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述RNA干扰技术包括如下步骤：以柑橘木虱cDNA为模板，通过PCR技术，使用扩增引物获得DcS44基因的部分片段，扩增产物连接入质粒中，以质粒为模板，用含启动子的引物进行扩增，扩增产物胶回收，合成dsRNA；稀释合成的dsRNA，显微注射柑橘木虱。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述扩增引物如下：
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述含启动子的引物如下：
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述质粒为-Blunt。
8.一种生物杀虫制剂，其特征在于，所述生物杀虫制剂包含柑橘木虱DcS4
9.根据权利要求8所述的生物杀虫剂，其特征在于，所述dsRNA核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
10.柑橘木虱DcS44基因在培育抗柑橘木虱和抗黄龙病柑橘品种中的应用。
...【技术特征摘要】
1.柑橘木虱dcs44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用，其特征在于，所述柑橘木虱dcs44基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用通过dcs44基因沉默使柑橘木虱死亡从而减少传播来防治柑橘黄龙病。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基因沉默为采用rna干扰技术进行基因沉默。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述rna干扰技术包括如下步骤：以柑橘木虱cdna为模板，通过pcr技术，使用扩增引物获得dcs44基因的部分片段，扩增产物连接入质粒中，以质粒为模板，用含启动子的引物进行扩增，扩增...
【专利技术属性】
技术研发人员：喻修道，王初阳，邝印辉，上官超智，杜一民，
申请(专利权)人：赣南师范大学，
类型：发明
国别省市：
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