【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子标记，具体涉及一种与绵羊生长性状有关的分子标记及其应用。
技术介绍
1、单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism，snp)主要是指在基因组水平上由单个碱基的变异所引起的dna序列的多态性，其数量多，多态性丰富，部分单个核苷酸引起的变异可能导致基因功能变化，因此单核苷酸多态性是研究人类家族和动植物品系遗传变异的重要依据。
2、kif5b(kinesin family member 5b)作为驱动蛋白超家族蛋白(kinesinsuperfamilyproteins)成员之一，是一种驱动细胞器官在细胞内运输的分子马达。它能够结合和移动微管，在细胞内扮演着重要的功能和调控作用。
3、kif5b基因存在于绵羊的13号染色体，在正常情况下，它的表达量和功能都是严格受到调控的。kif5b的正常功能与许多重要的生理过程有关，包括细胞架构的维持、细胞器官的输运、神经元的发育和突触传递等。在细胞架构维持方面，kif5b参与了细胞骨架的组装和维持，维持了细胞的形态和结构的完整性。在细胞器官输运方面，kif5b能够结合组装在细胞内的微管，将细胞器官，如线粒体、高尔基体和内质网等，从细胞体输运到需要的位置。在神经元的发育过程中，kif5b蛋白参与了神经元的迁移、赋形以及轴突和树突的生长。它的缺陷可能导致神经元发育异常，进而导致神经系统相关疾病的发生。
4、绵羊是重要的农业经济动物，经济性状主要体现在繁殖、生长、产毛、抗病、抗逆等方面，其中前两种性状是对肉用绵羊产业影响
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种与绵羊生长性状有关的分子标记及其应用，提供一种鉴定中国地方绵羊品种kif5b snp位点的检测方法，利用所述方法鉴定获得的绵羊个体具有更高生长性能，可用于选育更好生长性能的绵羊新品系。
2、本专利技术提供了一种检测绵羊生长性状snp分子标记的引物对，包括扩增分别包含g.32392979位点和g.32394969位点的目标序列的引物对。
3、优选的，所述包含g.32392979位点的目标序列包括核苷酸序列如seq idno.1的目标序列；
4、所述包含g.32394969位点的目标序列包括核苷酸序列如seq id no.2所示的目标序列。
5、优选的，包括核苷酸序列如seq id no.3所示的f1和seq id no.4所示的r1组成的引物对；以及核苷酸序列如seq id no.5所示的f2和seq id no.6所示的r2组成的引物对。
6、本专利技术还提供了上述引物对在制备检测绵羊生长性状snp分子标记试剂盒中的应用。
7、本专利技术提供了一种检测绵羊生长性状snp分子标记的方法，包括以目标绵羊的基因组dna为模板，与上述引物对分别配制pcr扩增体系，pcr扩增反应后，对pcr扩增产物进行测序，测序结果与参考基因组进行比对，确定绵羊在snp分子标记处的基因型，得所述目标绵羊的生长性状结果。
8、优选的，所述pcr扩增体系以25μl计，包括：上游引物1μl、下游引物1μl、pcrmix12.5μl、dna模板50～100ng和余量的ddh2o。
9、优选的，所述pcr扩增反应的程序，包括：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸8s，34个循环；72℃终延伸5min，4℃保存。
10、优选的，所述测序包括分别利用上游引物f进行sanger测序，与参考基因序列进行比对，比对g.32392979位点和g.32394969位点的碱基序列；
11、其中参考基因组版本为gcf 000298735.2(oarv4.0)，序列号nc_019470.2。
12、优选的，g.32392979位点碱基为t和g.32394969位点碱基为g，表示该绵羊具有更好的生长性能。
13、本专利技术还提供了上述引物对或上述方法在培育绵羊新品种和/或品系中的应用。
14、有益效果：本专利技术公开了绵羊中与生长性能相关的分子标记位点和检测方法，即绵羊kif5b基因(图1)内含子区snp位点g.32392979位点基因型和g.32394969位点基因型会影响绵羊的生长性状(体重)，可用于绵羊的育种。本专利技术还提供了一种检测绵羊生长性状snp分子标记的引物对，经扩增后对产物进行sanger测序，确定绵羊kif5b基因内含子区snp位点g.32392979位点基因型和g.32394969位点基因型，且g.32392979位点基因型为tt的个体和g.32394969位点基因型为gg的个体在7月龄前体重都分别显著高于相同日龄和性别的g.32392979位点基因型为cc的个体和g.32394969位点基因型为tt的个体，因此以g.32392979位点基因型为tt基因型和g.32394969位点基因型为gg基因型为生长性状优势基因型，本专利技术为国内绵羊品种利用单核苷酸多态性进行育种提供分子标记的检测方法，为国内利用生长性状相关分子标记进行分子育种提供方法，具有重要的育种价值和经济价值。
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1.一种检测绵羊生长性状SNP分子标记的引物对，其特征在于，包括扩增分别包含g.32392979位点和g.32394969位点的目标序列的引物对。
2.根据权利要求1所述引物对，其特征在于，所述包含g.32392979位点的目标序列包括核苷酸序列如SEQ ID No.1的目标序列；
3.根据权利要求1或2所述引物对，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ IDNo.3所示的F1和SEQ ID No.4所示的R1组成的引物对；以及核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的F2和SEQID No.6所示的R2组成的引物对。
4.权利要求1～3任一项所述引物对在制备检测绵羊生长性状SNP分子标记试剂盒中的应用。
5.一种检测绵羊生长性状SNP分子标记的方法，其特征在于，包括以目标绵羊的基因组DNA为模板，与权利要求1～3任一项所述引物对分别配制PCR扩增体系，PCR扩增反应后，对PCR扩增产物进行测序，测序结果与参考基因组进行比对，确定绵羊在SNP分子标记处的基因型，得所述目标绵羊的生长性状结果。
6.根据权利要求5所述方法，其特征
7.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的程序，包括：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸8s，34个循环；72℃终延伸5min，4℃保存。
8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述测序包括分别利用上游引物F进行sanger测序，与参考基因序列进行比对，比对g.32392979位点和g.32394969位点的碱基序列；
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，g.32392979位点碱基为T和g.32394969位点碱基为G，表示该绵羊具有更好的生长性能。
10.权利要求1～3任一项所述引物对或权利要求5～9任一项所述方法在培育绵羊新品种和/或品系中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种检测绵羊生长性状snp分子标记的引物对，其特征在于，包括扩增分别包含g.32392979位点和g.32394969位点的目标序列的引物对。
2.根据权利要求1所述引物对，其特征在于，所述包含g.32392979位点的目标序列包括核苷酸序列如seq id no.1的目标序列；
3.根据权利要求1或2所述引物对，其特征在于，包括核苷酸序列如seq idno.3所示的f1和seq id no.4所示的r1组成的引物对；以及核苷酸序列如seq id no.5所示的f2和seqid no.6所示的r2组成的引物对。
4.权利要求1～3任一项所述引物对在制备检测绵羊生长性状snp分子标记试剂盒中的应用。
5.一种检测绵羊生长性状snp分子标记的方法，其特征在于，包括以目标绵羊的基因组dna为模板，与权利要求1～3任一项所述引物对分别配制pcr扩增体系，pcr扩增反应后，对pcr扩增产物进行测序，测序结果与参考基因组进行比对，确定绵羊在snp分子标记处...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘秋月，王海涛，王大祥，蔡实实，蒋柏林，
申请(专利权)人：江苏乾宝牧业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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