【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，特别是涉及一种产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌及其构建方法与应用。
技术介绍
1、吩嗪-1-羧酸(pca)是铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)分泌的一种次级代谢物，它有明显的抑制多种植物病原菌的能力。pca在常温下为浅黄色针状结晶体，微溶于乙醚、苯及氯仿等，难溶于水。pca因为其特殊的化学结构，熔点达到了241-242℃，对热、湿都很稳定。科学家们以pca结构骨架入手，对其进行了大量的化学结构修饰，设计合成了许多高生物活性的pca衍生物。2011年，注册pca为新型生物合成杀菌剂，命名为“申嗪霉素”。经实验证明，其对于瓜、果、蔬菜、棉花、小麦、水稻等枯萎病、赤霉病、纹枯病均有较好的治疗效果。
2、在铜绿假单胞菌中，pca的生物合成途径由phz(phzabcdefg)基因簇组成，该途径以分支酸作为前体，合成包括pca在内的一系列吩嗪类化合物。使用化学法合成吩嗪类化合物农药虽然在技术上可行，但其产率低下且对环境污染严重。因此如何利用微生物发酵生物合成吩嗪类化合物，成为替代化学合成法的环境友好型技术受到研究者的广泛关注。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌及其构建方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供一种产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌的构建方法，以野生菌株cicc20240作为原始菌株，敲除ph
4、优选的是，所述phzm基因的核苷酸序列如seq id no.4所示。
5、优选的是，所述crc基因的核苷酸序列如seq id no.2所示。
6、优选的是，所述phzs基因的核苷酸序列如seq id no.5所示。
7、优选的是，所述phzh基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。
8、优选的是，所述pa acpp基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
9、本专利技术还提供所述构建方法构建得到的产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌。
10、本专利技术还提供所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌在生产吩嗪-1-羧酸中的应用。
11、本专利技术还提供一种生产吩嗪-1-羧酸的方法，利用所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌生产吩嗪-1-羧酸。
12、本专利技术还提供所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌在制备植物抗病制剂中的应用。
13、基于上述技术方案，本专利技术具有以下技术效果：
14、本专利技术以绿脓菌素产量更高的铜绿假单胞菌菌株cicc20240作为出发菌株，将其pa acpp替换为ec acpp，同时敲除基因pa0051、pa5332、pa4209和pa4217，构建高pca的基因工程菌株用于生产发酵。
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1.一种产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌的构建方法，其特征在于，以野生菌株CICC20240作为原始菌株，敲除phzM基因、crc基因、phzS基因和phzH基因，并替换为Pa acpP基因，最终获得菌株CICC-M5(ΔPa acpP::Ec acpPΔcrcΔphzHΔphzSΔphzM)，即为所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述phzM基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述crc基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述phzS基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述phzH基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。
6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述Pa acpP基因的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
7.如权利要求1-6任一项所述构建方法构建得到的产吩嗪-1-羧
8.如权利要求7所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌在生产吩嗪-1-羧酸中的应用。
9.一种生产吩嗪-1-羧酸的方法，其特征在于，利用权利要求7所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌生产吩嗪-1-羧酸。
10.如权利要求7所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌在制备植物抗病制剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌的构建方法，其特征在于，以野生菌株cicc20240作为原始菌株，敲除phzm基因、crc基因、phzs基因和phzh基因，并替换为pa acpp基因，最终获得菌株cicc-m5(δpa acpp::ec acppδcrcδphzhδphzsδphzm)，即为所述产吩嗪-1-羧酸基因突变工程菌。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述phzm基因的核苷酸序列如seq idno.4所示。
3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述crc基因的核苷酸序列如seq idno.2所示。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述phzs基因的核苷酸序列如seq i...
【专利技术属性】
技术研发人员：马金成，林敏，王海洪，张文彬，胡喆，余永红，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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