【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物标志物免疫检测，具体涉及人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用。
技术介绍
1、sp-10是一种精子特异性抗原，在受精过程中发挥着重要作用，该抗原存在于人类、狒狒、狐狸、猕猴、牛、兔和猪的精子中。利用凝胶电泳和蛋白质免疫印迹分析等得到的研究表明，sp-10呈现多态性肽的特征，范围从18到34 kda。目前sp-10已有11种亚型，其中典型的人精子顶体蛋白sp-10基因为acrv1型，氨基酸长度为265，其分子质量为28156da。利用单克隆抗体(mhs-10、fsa-10)等对成熟完整的精子免疫荧光显微镜观察显示，sp-10在精子顶体内膜呈不均匀分布，精子预处理后可观察到固定精子样本中95%以上显示荧光而其他体细胞不显示荧光，说明sp-10是精子发育过程中高度保守的特异性分化标志物。另外，对男性人精子顶体蛋白活性与精液常规参数的相关性进行分析表明，人精子顶体蛋白活性与精液浓度、精子活力及精子正常形态相关。因此，通过检测顶体蛋白酶活性即可快速、客观地评估精子的受精功能。这些以sp-10为靶点的免疫学定性定量检测手段，为评估人精子受精能力和诊断不育症提供了有力支撑。
2、人精子顶体蛋白sp-10作为检测精子活力的特异性标志物，现有检测方法以胶体金免疫层析方法为主，包括fertilmarq fertility sperm test kit、spermcheckfertility home test kit以及babystart fertilcount male fertility tes
3、胶体金免疫层析是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、步骤少、检测成本低而且操作简便，适用于个体现场快速检测，因此在疾病检测领域得到了广泛应用。而开发试纸条产品的前提是需要得到对人精子顶体蛋白sp-10具有高特异性和高灵敏度的配对单克隆抗体。但目前已经取得sp-10的单克隆抗体在特异性和灵敏度上仍然难以满足要求，难以快速、准确、稳定地诊断出男性精子的活力。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术提供了人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株分泌的抗精子蛋白sp-10的单克隆抗体具有特异性强、效价高、稳定性好等优点。
2、为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供一种分泌人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mab208sz，保藏编号：cgmccno.45816，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3、本专利技术第二方面提供了一种人精子顶体蛋白sp-10的单克隆抗体，由前述的保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株产生。
4、本专利技术第三方面提供了一种分泌人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mab81sz，保藏编号为cgmcc no.45817，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
5、本专利技术第四方面提供了一种人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体，由前述的保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生。
6、本专利技术第五方面提供了一种试纸条，含有前述的保藏编号为cgmcc no.45816或者保藏编号为cgmcc no.45817的分泌人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，或者，含有前述的保藏编号为保藏编号为cgmcc no.45816或者cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体。
7、本专利技术第六方面提供了一种检测试剂盒，含有前述的保藏编号为cgmcc no.45816或者保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株，或者，含有前述的保藏编号为cgmccno.45816或者保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体。
8、本专利技术第七方面提供了一种检测人精子顶体蛋白sp-10的双抗体夹心elisa方法，该方法以保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株所产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为检测抗体、以保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为捕获抗体，或者，保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株所产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为检测抗体、以保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为捕获抗体。
9、本专利技术第八方面提供了一种检测人精子顶体蛋白sp-10的双抗体夹心poct方法，该方法以保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株所产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为检测抗体、以保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为捕获抗体，或者，保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株所产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为检测抗体、以保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株产生的人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体作为捕获抗体。
10、本专利技术取得的有益效果是：本专利技术利用重组表达的精子顶体蛋白sp-10（奥科博泰b0609-04-01）为免疫抗原，以peg为融合剂将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，利用hts-elisa方法筛选融合杂交瘤细胞，再经过多次亚克隆，最终得到两株单克隆抗体杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体对人精子顶体蛋白sp-10具有良好的检测灵敏度，最低定量检测限达0.001 ng/ml，可用于制备人精子顶体蛋白sp-10的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，用于人精子质量的临床诊断。
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1.一种分泌人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mAb208SZ，保藏编号为CGMCC No.45816，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的保藏编号为CGMCC No.45816的杂交瘤细胞株产生。
3.一种分泌人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mAb81SZ，保藏编号为CGMCC No.45817，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4.一种人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体，其特征在于，由权利要求3所述的保藏编号为CGMCC No.45817的杂交瘤细胞株产生。
5.一种试纸条，其特征在于，含有权利要求1或权利要求3所述的杂交瘤细胞株，或者，含有权利要求2或权利
6.一种检测试剂盒，其特征在于，含有权利要求1或权利要求3所述的杂交瘤细胞株，或者，含有权利要求2或权利要求4所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体。
7.一种检测人精子顶体蛋白SP-10的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于，该方法以权利要求2所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为检测抗体、以权利要求4所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为捕获抗体，或者，以权利要求4中所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为检测抗体、以权利要求2所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为捕获抗体。
8.一种检测人精子顶体蛋白SP-10的双抗体夹心POCT方法，其特征在于，该方法以权利要求2所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为检测抗体、以权利要求4所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为捕获抗体，或者，以权利要求4中所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为检测抗体、以权利要求2所述的人精子顶体蛋白SP-10单克隆抗体作为捕获抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种分泌人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mab208sz，保藏编号为cgmcc no.45816，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的保藏编号为cgmcc no.45816的杂交瘤细胞株产生。
3.一种分泌人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株已于2024年2月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏名称为：单克隆细胞株mab81sz，保藏编号为cgmcc no.45817，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4.一种人精子顶体蛋白sp-10单克隆抗体，其特征在于，由权利要求3所述的保藏编号为cgmcc no.45817的杂交瘤细胞株产生。
5.一种试纸条，其特征在于，含有权利要求1或权利要求3所述的杂交瘤细胞株，或者...
【专利技术属性】
技术研发人员：李兴杰，裴世春，赵旻，
申请(专利权)人：玛特瑞尔吉林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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