【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物活性物质，具体涉及一种香醋降压肽及其基于肽组学和分子对接技术的制备方法。
技术介绍
1、高血压是全球公共卫生挑战。血管紧张素转换酶（ace, ec 3.4.15.1）是一种锌金属肽酶，通过在肾素-血管紧张素系统（ras）和激肽-激肽释放酶系统（kks）中起关键作用来调节血压。抑制ace的活性是一种有效的高血压治疗策略。
2、合成的ace抑制剂如依那普利和卡托普利虽然有效，但常会引起严重的副作用。相比之下，天然食物来源的生物活性肽抑制ace时显示出安全性、特异性方面的潜力。最近的研究已经从包括豆豉（weidan guo, yu xiao, xiangjin fu, et al. food chemistry: x2023, 19, 100779）、米糠（xiuming wang, haixia chen, xuegang fu, et al. lwt,2017, 75, 93-99）和啤酒渣（dong wei, wen-lai fan, yan xu， food chemistry, 2021,353, 129521）在内的多种食物中分离出了ace抑制肽（降压肽），凸显出食物在抗高血压治疗中的潜力。
3、香醋是一种著名的传统调味品，除了提供独特的风味外，也含有丰富的蛋白质、糖类、有机酸、氨基酸等生物活性成分，展现出了包括抗氧化、抗脂质过氧化和降血压活性在内的一系列生物功能性。然而，香醋中的ace抑制肽并未得到充分探索，且由于其本身呈乌黑色、基质复杂、痕量成分检测难度大，目前对于其中的降压肽
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提供一种香醋降压肽，其特征在于所述降压肽的氨基酸序列为：fppqqp，纳米液相色谱-串联质谱（nanolc-ms/ms）测定其分子量为712.35 da。
2、本专利技术另一解决要的技术问题是提供基于肽组学和分子对接技术的香醋降压肽制备方法，该方法将肽组学与分子对接技术相结合，以实现香醋中抗高血压肽的快速制备，包括以下步骤：将香醋离心、沉淀、超滤、半制备反相高效液相色谱纯化，脱盐，肽组学测序，得到香醋降压肽，分子对接模拟降压肽与ace的结合。
3、具体地，一种基于肽组学和分子对接技术的香醋降压肽制备方法包括以下步骤：
4、步骤1，香醋的预处理：将香醋在4℃ 15000×g离心10min，上清液真空干燥，得粉末i；粉末i用水复溶后，再用三氯乙酸（tca，200g/l）沉淀去除水溶性蛋白，涡旋3min，4℃5000×g离心10min，弃去沉淀，得富含肽的上清液；
5、步骤2，香醋的超滤分级：将所述富含肽的上清液用截留分子量为30kda、10kda和3kda的超滤管在4℃ 14000×g离心超滤，收集分子量小于3kda的组分，冷冻干燥，得粉末ii；
6、步骤3，肽组学样品的制备：将所述粉末ii用0.1%三氟乙酸（tfa）复溶，加载到半制备反相高效液相色谱（rp-hplc）柱上纯化，每样制备25次，根据出峰情况将洗脱液合并为八个组分，分别标记为洗脱液i-viii，冷冻干燥，将洗脱液i-viii冻干品用含0.05% tfa的2%乙腈复溶后上样至sep-pak c18柱脱盐，真空干燥，得肽组学样品；
7、步骤4，肽组学测序：将所述肽组学样品用0.1%甲酸溶液复溶，再用纳米液相色谱-串联质谱（nanolc-ms/ms）进行序列分析，通过与粳米及相关微生物数据库比对，精确识别出潜在的ace抑制肽；
8、步骤5，分子对接模拟抗压肽与ace的结合：将识别出的候选肽与ace使用autodocktools 1.5.6进行分子对接，预测并评估其与ace活性位点的结合模式及强度，揭示其潜在的生物活性机制。
9、作为优选，所述的步骤1中，离心干燥后得到的粉末i与水的质量体积比为1:20。
10、作为优选，所述的步骤1中，复溶后的溶液与tca水溶液的体积比为1:1。
11、作为优选，所述的步骤3中，冻干粉末ii与0.1%三氟乙酸水溶液的质量体积比为1:1。
12、作为优选，所述的步骤3中半制备反相高效液相色谱纯化条件如下：色谱柱为xbridge beh-c18（250×10mm，5µm）；流动相：流动相a为0.1%甲酸溶液（v/v），流动相b为0.1%甲酸-98%乙腈溶液（v/v）， 梯度洗度程序：0-4min，0% b；4-8min，0-21% b；8-45min，21-45%b；45-55min，45-50% b；55-56min，50-100% b；56-60min，100% b；60-61min，100-0% b；61-71min，0% b；流速：2 ml/min，检测波长：214nm。
13、作为优选，所述的步骤3中脱盐采用100 mg sep-pak c18固相柱进行。
14、作为优选，所述的步骤3中，洗脱液i-viii冻干品与含0.05% tfa的2%乙腈的质量体积比为1:1。
15、作为优选，所述的步骤4中，肽组学样品与0.1%甲酸溶液的质量体积比为1:1。
16、作为优选，所述的步骤4中所述纳米液相色谱-串联质谱中纳米液相色谱和质谱条件分别为：
17、（1）纳米液相色谱条件
18、色谱柱：michrom bioresources c18熔融硅毛细管柱，型号为：75µm×25cm、2.2µm、100å；流动相：流动相a为0.1%甲酸溶液（v/v），流动相b为0.1%甲酸-80%乙腈溶液（v/v），梯度洗脱程序：0-0.5min，8% b；0.5-52.5min，10-32% b；52.5-53min，32-95% b；53-60min，95% b；60-60.1min，95-8% b；60.1-70min，8% b；流速：300 nl/min，进样量：1μl；
19、（2）质谱条件
20、工作模式：正离子模式；数据采集方式：数据依赖采集（dda）；喷雾电压：2.1kv；毛细管温度为320℃；全扫描分辨率设置为m/z 200时的60000；扫描范围为m/z 300-1200；agctarget：3×10e6；最大注射时间（it）：30ms；
21、二级质谱扫描分辨率：3×10e5；裂解方式：高能碰撞解离（hcd）；标准化碰撞能量：28；agc target：1×10e5；注射时间（it）：50ms；离子隔离宽度：1.6m/z。
22、做为优选，所述的步骤5中，分子对接模拟所使用的工具是autodock tools1.5.6，目标肽的三维结构使用chembiodraw 14.0生成，能量最小化使用的是chembio3dultra 14.0软件，蛋白-配体相互作用的可视化分析使用的是pymol 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种香醋降压肽，其特征在于所述降压肽的氨基酸序列为：FPPQQP。
2.一种权利要求1所述香醋降压肽的基于肽组学和分子对接技术的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将香醋离心、沉淀、超滤、半制备反相高效液相色谱纯化，脱盐，肽组学测序，得到香醋降压肽，分子对接模拟降压肽与ACE的结合。
3.根据权利要求2所述一种香醋降压肽的制备，其特征在于包括以下步骤：
4.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤1中，离心干燥后得到的粉末I与水的质量体积比为1:20。
5.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤1中，复溶后的溶液与TCA水溶液的体积比为1:1。
6.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中，冻干粉末II与0.1%三氟乙酸水溶液的质量体积比为1:1。
7.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中半制备反相高效液相色谱纯化条件如下：色谱柱为XBridge BEH-C18（250 × 10 mm，5 µm）；流动相：流动相A为0.1%甲酸溶液（v/v），流动相B为
8.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中脱盐采用100 mg Sep-Pak C18固相柱进行。
9.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中，洗脱液I-VIII冻干品与含0.05% TFA 的2%乙腈的质量体积比为1:1。
10.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤4中，肽组学样品与0.1%甲酸溶液的质量体积比为1:1。
11.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤4中所述纳米液相色谱-串联质谱中纳米液相色谱和质谱条件分别为：
12.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤4中分子对接模拟所使用的工具是AutoDock Tools 1.5.6，目标肽的三维结构使用ChemBioDraw 14.0生成，能量最小化使用的是ChemBio3D Ultra 14.0软件，蛋白-配体相互作用的可视化分析使用的是PyMOL 2.3.2。
...【技术特征摘要】
1.一种香醋降压肽，其特征在于所述降压肽的氨基酸序列为：fppqqp。
2.一种权利要求1所述香醋降压肽的基于肽组学和分子对接技术的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将香醋离心、沉淀、超滤、半制备反相高效液相色谱纯化，脱盐，肽组学测序，得到香醋降压肽，分子对接模拟降压肽与ace的结合。
3.根据权利要求2所述一种香醋降压肽的制备，其特征在于包括以下步骤：
4.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤1中，离心干燥后得到的粉末i与水的质量体积比为1:20。
5.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤1中，复溶后的溶液与tca水溶液的体积比为1:1。
6.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中，冻干粉末ii与0.1%三氟乙酸水溶液的质量体积比为1:1。
7.根据权利要求3中所述制备方法，其特征在于所述的步骤3中半制备反相高效液相色谱纯化条件如下：色谱柱为xbridge beh-c18（250 × 10 mm，5 µm）；流动相：流动相a为0.1%甲酸溶液（v/v），流动相b为0.1%甲酸-98%乙腈溶液（v/v）， 梯度洗度程序：0-4min，0% b；4-8min，0-21% b；8-45...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙颖，黄子明，王静，张二飞，温冰冰，沈耀权，蔡佳，魏冬，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：
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