【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种离体肠道疾病模型、其构建方法和应用。
技术介绍
1、炎症性肠病(inflammatory bowel disease,ibd)包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,uc)和克罗恩病(crohn’s disease,cd)。全球约有400万人遭受其慢性炎症和反复复发的折磨。目前其致病原因尚不清楚，但是随着以自身免疫性疾病为代表的慢性病治疗的迅猛发展，许多自免相关的靶向抑制剂如jak抑制剂作为一种新的治疗方法显示出了积极的临床疗效，越来越多的自免抑制剂正加入到ibd的治疗中来(improving ibd outcomesin the era of many treatment options，nature reviews gastroenterology&hepatology，volume 20，february 2023，79–80，https://doi.org/10.1038/s41575-022-00738-z)。而新的药物开发又是一个漫长的过程，在早期的药物发现中，如何构建快速有效的方法模型来评价新分子的药效仍是一个需要面对的问题。针对ibd分子的体外筛选与药效评价，目前集中在细胞如caco2和ht29细胞，外周血单核细胞(pbmc)以及类器官中(experimental models of infla mmatory bowel diseases，cell mol gastroenterolhepatol 2015；1:154–170；http://dx.d
2、针对ibd分子的体外筛选与药效评价，目前集中在细胞如caco2和ht29细胞，pbmc以及raw246.7细胞以及肠道类器官中。除此以外，亦有相关的离体模型报道，但操作相对复杂(in vitro models and ex vivo systems used in inflammatory bowel disease，invitro models(2022)1:213–227，https://doi.org/10.1007/s44164-022-00017-w，a gut-ex-vivo system to study gut inflammation associated to inflammatory boweldisease(ibd)，biology 2021,10,605.https://doi.org/10.3390/biology10070605)。
技术实现思路
1、为了解决现存体外模型与体内模型药效评价存在差异的问题，本专利技术提供了一种离体肠道疾病模型、其构建方法和应用。专利技术人排除利用细胞进行模型构建，而是选择采用一种简易的离体肠道模型来进行早期小分子的药效评价。该模型操作简单，无需复杂的手术器械操作及仪器检测，且由于离体结肠仍保持有体内肠道的完整生理结构，在该模型上显示的药效能更直接地模拟体内结肠的情况，由此可以更可靠地推断体内模型的药效，从而方便早期发现筛选更有效的分子，为研发项目的推进提供更有说服力的证据，进而节省费用以及时间成本以切实提高药物发现效率。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术第一方面提供了一种离体肠疾病模型的构建方法，所述方法包括步骤：用含ifn-γ或ifnα的溶液诱导离体肠道获得所述模型。
3、jak-stat通路是多种细胞因子信号传导的重要途径，与炎症性肠病(ibd)的形成密切相关。jak家族和stat家族是jak-stat通路的两个主要部分，其中jak家族是jak-stat信号通路的核心。jak家族是一类细胞内非受体酪氨酸激酶家族，包括酪氨酸激酶2(tyk2)和jak1、jak2、jak3。stat为jak激酶的底物和下游信号分子，共发现7个成员，即stat1、stat2、stat3、stat4、stat5a、stat5b和stat6。在jak-stat信号通路中，jak磷酸化stat，活化的stat形成二聚体并暴露入核信号，进入核内与调控相应基因表达。本专利技术所述构建方法得到的离体肠疾病模型中stat1和/或stat3被磷酸化，并能被不同的jak和tyk2抑制剂抑制。
4、在本专利技术的一些实施方案中，所述诱导的步骤为：先将所述离体肠道的一端进行结扎处理，将所述溶液导入到所述离体肠道中后，将另一端结扎处理；或，将离体肠道沿纵线剪开，然后浸泡于所述溶液中。
5、在本专利技术的一些实施方案中，所述ifn-γ的浓度为10-30μg/ml，例如20μg/ml；所述ifnα的浓度为10-20μg/ml，例如20μg/ml；
6、和/或，所述离体肠道为离体结肠。
7、在本专利技术的一些实施方案中，所述溶液还包含dmso和羧甲基纤维素。
8、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述dmso的浓度为1％-4％，例如2％；和/或，所述羧甲基纤维素的浓度为0.1％-1％，例如0.5％。
9、在本专利技术的一些实施方案中，所述诱导的温度为30-40℃，例如37℃；和/或，所述诱导的时间为40-80min，例如60min。
10、为了解决上述技术问题，本专利技术第二方面提供了一种离体肠疾病模型，其特征在于，所述离体肠疾病模型由如本专利技术第一方面所述的方法构建。
11、为了解决上述技术问题，本专利技术第三方面提供了如本专利技术第二方面所述的离体肠疾病模型在评价炎症性肠病相关通路的药物中的应用。
12、在本专利技术的一些实施方案中，所述通路为tyk2和/或jak1通路。
13、在本专利技术的一些实施方案中，所述药物为jak通路抑制剂或tyk2通路抑制剂。
14、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述jak通路抑制剂为td-1473、tofacitinib或upadacitinib；所述tyk2通路抑制剂为bms-986165或tak-279。
15、为了解决上述技术问题，本专利技术第四方面提供了如本专利技术第二方面所述的离体肠疾病模型在评价调控tyk2和/或jak1/3通路的药物中的应用。
16、在本专利技术的一些优选实施方案中，所述药物为jak通路抑制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种离体肠疾病模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括步骤：用含IFN-γ或IFNα的溶液诱导离体肠道获得所述模型。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述诱导的步骤为：先将所述离体肠道的一端进行结扎处理，将所述溶液导入到所述离体肠道中后，将另一端结扎处理；或，将离体肠道沿纵线剪开，然后浸泡于所述溶液中。
3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述IFN-γ的浓度为10-30μg/mL，例如20μg/mL；所述IFNα的浓度为10-20μg/mL，例如20μg/mL；和/或，所述离体肠道为离体结肠。
4.如权利要求1-3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述溶液还包含DMSO和羧甲基纤维素；
5.如权利要求1-4中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述诱导的温度为30-40℃，例如37℃；和/或，所述诱导的时间为40-80min，例如60min。
6.一种离体肠疾病模型，其特征在于，所述离体肠疾病模型由如权利要求1-5中任一项所述的方法构建。
7.如权利要求6所述的离体肠疾病模型在评
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述通路为TYK2和/或JAK1通路。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物为JAK通路抑制剂或TYK2通路抑制剂；
10.如权利要求6所述的离体肠疾病模型在评价调控TYK2和/或JAK1/3通路的药物中的应用；
...【技术特征摘要】
1.一种离体肠疾病模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括步骤：用含ifn-γ或ifnα的溶液诱导离体肠道获得所述模型。
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述诱导的步骤为：先将所述离体肠道的一端进行结扎处理，将所述溶液导入到所述离体肠道中后，将另一端结扎处理；或，将离体肠道沿纵线剪开，然后浸泡于所述溶液中。
3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述ifn-γ的浓度为10-30μg/ml，例如20μg/ml；所述ifnα的浓度为10-20μg/ml，例如20μg/ml；和/或，所述离体肠道为离体结肠。
4.如权利要求1-3中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述溶液还包含dmso和羧甲基纤维素；
【专利技术属性】
技术研发人员：汪小凯，汪俊，吕立力，邓军，李蕗，程慧娟，李晓东，
申请(专利权)人：凌科药业杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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