【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，尤其是涉及一种磁珠法快速提取植物基因组dna的提取液、试剂盒及其提取方法和应用。
技术介绍
1、随着农业科技的发展，分子生物学在农业领域的应用越来越广泛。但无论是进行植物全基因组测序还是dna分子标记，如何有效地提取高质量的植物基因组dna是应用研究的一个首要问题。但是植物材料多种多样，不同植物材料中，蛋白质、多糖、酚类等物质的含量差别较大，这些物质会对dna纯度产生很大干扰，因此分离或提纯获得高质量的dna存在一定的难度。
2、在现有的技术中，多种植物dna的提取方法体系已基本建立，包括ctab法、sds法、pvp法、尿素法或高盐低ph法等。传统的dna提取与纯化过程多次使用苯酚、氯仿等有机溶剂，有机溶剂易挥发，有毒性，不仅对操作人员的身体健康有危害，还会污染环境。传统的植物基因组dna分离提取步骤主要包括研磨、裂解、氯仿抽提、离心、沉淀和清洗等步骤，整个提取过程耗时长、操作复杂，不适用于高通量自动化的提取。目前市场上的植物核酸提取试剂盒大多只适用于普通新鲜植物组织，对于多糖多酚等特殊植物材料的提取效果较差，部分植物dna提取试剂盒只能针对一种材料进行核酸提取，而对于同种类其他材料的提取效果较差。因此，急需一种简便、快速、适用范围广的植物基因组dna提取方法来解决传统方法的技术缺陷。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足提供了一种磁珠法快速提取植物基因组dna的提取液、试剂盒及其提取方法和应用。
2、为此，本专利技术第一
3、(a)所述提取液包括以下组分：裂解液ⅰ和裂解液ⅱ；
4、(b)所述提取液包括以下组分：裂解液ⅲ和裂解液ⅱ。
5、本专利技术的一些实施例中，裂解液ⅰ包括以下组分：十六烷基三甲基溴化胺(ctab)、nacl、柠檬酸钠和乙二胺四乙酸(edta)。
6、本专利技术的一些实施例中，所述ctab的质量百分比为1-2％，所述nacl的浓度为1-2m，所述柠檬酸钠的浓度为0.15-0.25m，所述edta的浓度为0.01-0.02m。
7、根据本专利技术，所述ctab的质量百分比为2％，所述nacl的浓度为1.4m，所述柠檬酸钠的浓度为0.2m，所述edta的浓度为0.01m。
8、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅰ的ph值为8.0-8.5。
9、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅰ的制备方法包括：按比例称量ctab、nacl、柠檬酸钠和edta，溶于无菌水，调节ph值至8.0-8.5。
10、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅱ包括以下组分：ctab和nacl。
11、本专利技术的一些实施例中，所述ctab的质量百分比为1-2％，所述nacl的浓度为1-2m。
12、根据本专利技术，所述ctab的质量百分比为2％，所述nacl的浓度为1.4m。
13、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅱ的ph值为8.0-8.5。
14、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅱ的制备方法包括：按比例称量ctab和nacl，溶于无菌水，调节ph值至8.0-8.5。
15、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅲ包括以下组分：ctab、nacl、柠檬酸钠、edta、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、过硫酸氢钾和醋酸铵。
16、本专利技术的一些实施例中，所述ctab的质量百分比为1-2％，所述nacl的浓度为1-2m，所述柠檬酸钠的浓度为0.15-0.25m，所述edta的浓度为0.01-0.02m，所述pvp的质量百分比为1-2％，所述过硫酸氢钾的质量百分比为1-2％，所述醋酸铵的浓度为0.05-0.1m。
17、根据本专利技术，所述ctab的质量百分比为2％，所述nacl的浓度为1.4m，所述柠檬酸钠的浓度为0.2m，所述edta的浓度为0.01m，所述pvp的质量百分比为2％，所述过硫酸氢钾的质量百分比为2％，所述醋酸铵的浓度为0.05m。
18、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅲ的ph值为8.0-8.5。
19、本专利技术的一些实施例中，所述裂解液ⅲ的制备方法包括：按比例称量ctab、nacl、柠檬酸钠、edta、pvp、过硫酸氢钾和醋酸铵，溶于无菌水，调节ph值至8.0-8.5。
20、本专利技术第二方面提供了一种磁珠法快速提取植物基因组dna的试剂盒，包括所述的包括配方(a)的提取液和/或所述的包括配方(b)的提取液。
21、本专利技术的一些实施例中，所述试剂盒还包括磁珠悬浮液、漂洗液和洗脱液。
22、本专利技术的一些实施例中，所述漂洗液包括以下组分：edta、异硫氰酸胍(gitc)、二硫苏糖醇(dtt)和无水乙醇。
23、本专利技术的一些实施例中，所述edta的浓度为0.01-0.02m，所述gitc的浓度为0.5-1.0m，所述dtt的浓度为0.01-0.015m，所述无水乙醇的体积百分比为50-70％。
24、根据本专利技术，所述edta的浓度为0.01m，所述gitc的浓度为0.5m，所述dtt的浓度为0.01m，所述无水乙醇的体积百分比为60％。
25、本专利技术的一些实施例中，所述漂洗液的制备方法包括：按比例称量edta、gitc和dtt，溶于无菌水，灭菌后加入无水乙醇，调节ph值至8.0-9.0。
26、本专利技术的一些实施例中，所述洗脱液包括无菌水。
27、本专利技术的一些实施例中，所述洗脱液ph值8.0-9.0；例如ph值8.5。
28、本专利技术的一些实施例中，所述洗脱液的制备方法包括：将无菌水中加入naoh溶液调节ph值至8.0-9.0。
29、本专利技术的一些实施例中，所述磁珠悬浮液为市售的磁珠悬浮液，例如购于生物工程(上海)股份有限公司。
30、本专利技术第三方面提供了一种磁珠法快速提取植物基因组dna的提取液或磁珠法快速提取植物基因组dna的试剂盒的提取方法，包括：依次使用裂解液ⅰ和裂解液ⅱ对植物组织进行处理；或，依次使用裂解液ⅲ和裂解液ⅱ对植物组织进行处理。
31、本专利技术的一些实施例中，所述方法包括以下具体步骤：
32、s1：将植物组织研磨后加入裂解液ⅰ混匀，加热处理，离心取上清液；
33、s2：向步骤s1所得上清液中加入裂解液ⅱ，加热处理，再依次加入rna酶、异丙醇和磁珠悬浮液，混匀静置，离心取液体进行吸附处理，再依次加入漂洗液、乙醇和洗脱液进行吸附处理。
34、本专利技术的一些实施例中，所述方法包括以下具体步骤：
35、s1：将植物组织研磨后加入裂解液ⅲ混匀，加热处理，离心取上清液；
36、s2：向步骤s1所得上清液中加入裂解液ⅱ，加热处理，再依次加入rna酶、异丙醇和磁珠悬浮液，混匀静置，离心取液体进行吸附处理，再依次加入漂洗液、乙醇和洗脱液进行吸本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种磁珠法快速提取植物基因组DNA的提取液，其特征在于，包括以下(a)或(b)所示配方：
2.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述裂解液Ⅰ包括以下组分：CTAB、NaCl、柠檬酸钠和EDTA；和/或，所述裂解液Ⅱ包括以下组分：CTAB和NaCl；和/或，所述裂解液Ⅲ包括以下组分：CTAB、NaCl、柠檬酸钠、EDTA、PVP、过硫酸氢钾和醋酸铵。
3.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述CTAB的质量百分比为1-2％；和/或，所述NaCl的浓度为1-2M；和/或，所述柠檬酸钠的浓度为0.15-0.25M；和/或，所述EDTA的浓度为0.01-0.02M；和/或，所述PVP的质量百分比为1-2％；和/或，所述过硫酸氢钾的质量百分比为1-2％；和/或，所述醋酸铵的浓度为0.05-0.1M。
4.一种磁珠法快速提取植物基因组DNA的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3中任意一项所述的包括配方(a)的提取液和/或权利要求1-3中任意一项所述的包括配方(b)的提取液；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗
6.一种如权利要求1-3中任意一项所述的提取液或如权利要求4或5所述的试剂盒的提取方法，其特征在于，包括：依次使用裂解液Ⅰ和裂解液Ⅱ对植物组织进行处理；或，依次使用裂解液Ⅲ和裂解液Ⅱ对植物组织进行处理。
7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，所述植物组织的重量和裂解液Ⅰ的体积比为50-200mg:200-800μL，优选为100-120mg:400-600μL；
9.根据权利要求7或8所述的提取方法，其特征在于，所述步骤S1中加热温度为55-75℃，优选为65-70℃，例如65℃；
10.一种如权利要求1-3中任意一项所述的提取液或如权利要求4或5所述的试剂盒或如权利要求6-9所述的提取方法在提取植物基因组DNA中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种磁珠法快速提取植物基因组dna的提取液，其特征在于，包括以下(a)或(b)所示配方：
2.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述裂解液ⅰ包括以下组分：ctab、nacl、柠檬酸钠和edta；和/或，所述裂解液ⅱ包括以下组分：ctab和nacl；和/或，所述裂解液ⅲ包括以下组分：ctab、nacl、柠檬酸钠、edta、pvp、过硫酸氢钾和醋酸铵。
3.根据权利要求1所述的提取液，其特征在于，所述ctab的质量百分比为1-2％；和/或，所述nacl的浓度为1-2m；和/或，所述柠檬酸钠的浓度为0.15-0.25m；和/或，所述edta的浓度为0.01-0.02m；和/或，所述pvp的质量百分比为1-2％；和/或，所述过硫酸氢钾的质量百分比为1-2％；和/或，所述醋酸铵的浓度为0.05-0.1m。
4.一种磁珠法快速提取植物基因组dna的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3中任意一项所述的包括配方(a)的提取液和/或权利要求1-3中任意一项所述的包括配方(b)的提取液；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液...
【专利技术属性】
技术研发人员：楚海娇，陈慧杰，范银玲，张永哲，王宇龙，肖兴玉，白鹭，
申请(专利权)人：吉林农业科技学院，
类型：发明
国别省市：
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