【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域技术，涉及一种分离人毛囊来源的毛乳头细胞的方法。
技术介绍
1、皮肤主要由两层组成，表皮和真皮在胚胎发育过程中由外胚层和中胚层分化而来。外胚层皮肤的顶部形成表皮在形态发生过程中，深入真皮并发育成皮肤附属物以产生可见带有皮脂的皮肤毛发纤维和汗腺。角质形成细胞是表皮和皮肤附属物的主要组成部分。毛囊(hair follicle)是毛囊是包围在毛发根部的囊状组织，内层是上皮组织性毛囊，外层是结缔组织性毛囊，内层与表皮相连，外层则与真皮相连；毛球组织(hair bulb)位于毛囊基部(下端底部)的膨大部分，中间有毛乳头；毛乳头(dermal papilla)是一个可诱导毛囊生长、调控毛囊发育和周期性生长的结构，由细胞外基质及成纤维细胞构成，几乎整个被毛囊下部的上皮基质包绕。毛乳头在毛囊的形态学发生和毛囊周期性生长调控中起主导作用。基于毛囊来源的毛乳头细胞在毛发再生中的重要作用,毛囊来源的毛乳头细胞的培养引起了广大学者的兴趣。
2、人毛囊来源的毛乳头细胞，在毛囊的生长发育、周期调控及维持毛发生长中起着主导作用。毛囊来源的毛乳头细胞可分泌igf-l、fgf-l、scf、hgf、kgf等多种与毛囊形成有关的因子；毛囊来源的毛乳头细胞表面还存在多种特异性标记，这些标记与毛囊的生长发育有密切关系。因此建立人毛囊来源的毛乳头细胞分离条件，来获取更多的毛囊来源的毛乳头细胞的实验材料，无疑是开展毛囊生物学研究的重要条件。但毛囊来源的毛乳头细胞在传统分离条件下，获得时间较长，且不易分离，失败的概率很大，体外培养14-3
3、不同毛乳头来源细胞分离方法不同，现有技术中毛乳头细胞的样本来源都是动物，而动物细胞的活性和人体中细胞的活性不同，利用分离动物毛乳头细胞的方法分离人源毛乳头细胞，细胞生长缓慢、不易贴壁，无法大规模量化生产，并且所用到部分试剂并不适用于临床科研。
4、因此，快速获得人毛囊来源的毛乳头细胞成为研究的方向。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的是提供一种体外分离人毛囊来源的毛乳头细胞的方法。
2、本专利技术提供的方法，为如下方法a)或方法b)：
3、所述方法a)包括如下步骤：
4、a-1)从离体人毛发样本中分离出毛囊组织；
5、a-2)培养所述毛囊组织，得到人毛囊来源的毛乳头细胞；
6、所述方法b)包括如下步骤：
7、b-1)从离体人毛发样本中分离出毛囊组织；
8、b-2)再从所述毛囊组织中分别分离出毛球组织或毛乳头组织，培养所述毛球组织或所述毛乳头组织，得到人毛囊来源的毛乳头细胞。
9、上文中，所述毛囊组织为1单位毛囊组织或者单个毛囊组织；
10、所述毛球组织或所述毛乳头组织来自1单位离体毛囊组织或者来自单个离体毛囊组织。
11、上文分离均在体视镜下进行；
12、若所述毛囊组织为1单位毛囊组织，则所述a-1)中分离为离体人毛发样本中取出1单位毛囊组织，再去除毛干、结缔粘连组织和脂肪，得到去除毛干后毛囊组织；
13、若所述毛囊组织为单个毛囊组织，则所述a-1)中的分离为离体人毛发样本中取出1单位毛囊组织，再去除毛干、结缔粘连组织和脂肪，再从1单位去除毛干后毛囊组织中分离单个毛囊组织；
14、上文中来自1单位离体毛囊组织的毛球组织按照如下方法制备：将离体1单位毛囊组织剪去毛干部位，且去除结缔粘连组织和脂肪，撕出单独的毛球组织(仅含有毛球组织)，记作来自1单位离体毛囊组织的毛球组织；
15、上文中来自单个离体毛囊组织的毛球组织按照如下方法制备：将离体单个毛囊组织剪去毛干部位，且去除结缔粘连组织和脂肪，撕出单独的毛球组织(仅含有毛球组织)，记作来自单个离体毛囊组织的毛球组织；
16、上文中来自1单位离体毛囊组织的毛乳头组织按照如下方法制备：将离体1单位毛囊组织剪去毛干部位，且去除结缔粘连组织和脂肪，撕出单独的毛球组织(仅含有毛球组织)，再划开毛球组织分离出毛乳头，记作来自1单位离体毛囊组织的毛乳头组织。
17、上文中来自单个离体毛囊组织的毛乳头组织按照如下方法制备：将离体单个毛囊组织剪去毛干部位，且去除结缔粘连组织和脂肪，撕出单独的毛球组织(仅含有毛球组织)，再分离出毛乳头，记作来自单个离体毛囊组织的毛乳头组织。
18、上文，在所述a-1)和a-2)步骤之间，还包括将所述毛囊组织用消化酶酶解的步骤；
19、所述b-2)中，在所述分离出毛球组织和培养毛球组织的步骤之间，还包括将分离出的所述毛球组织用消化酶酶解的步骤。
20、上述各个方法的步骤1)前，还包括如下步骤：将采集的离体人毛发样本依次进行低温运输和无菌处理的步骤；
21、所述低温运输为将所述采集的离体人毛发样本放置于储存液中，再通过恒温运输箱中运输；其中，所述储存液为乳酸格林氏液(4℃)；所述恒温运输箱的温度为0-15℃。
22、上述运输的时间小于等于48小时。
23、所述无菌处理为将低温运输后的离体人毛发样本用含有递减浓度双抗的dpbs/pbs依次清洗，收集清洗前和清洗后的溶液，分别记作液体a和液体b，再将所述液体a和液体b进行无菌检测。
24、在本专利技术的实施例中，所述无菌处理具体按照如下a-c的方式处理：
25、a)、将低温运输后的离体人毛发样本从储存液取出后采用75％乙醇水溶液冲洗3次，将取出离体毛发样本的储存液记作液体a；
26、b)将经过a)处理后离体人毛发样本用含有2％双抗的dpbs/pbs清洗3次；
27、所述含有2％双抗的dpbs/pbs为将双抗青链霉素与dpbs/pbs混合，得到的溶液，且双抗青链霉素的体积百分含量为2％；
28、c)将经过b)处理后离体人毛发样本用含有1％双抗的dpbs/pbs清洗3次；
29、所述含有1％双抗的dpbs/pbs为将双抗青链霉素与dpbs/pbs混合，得到的溶液，且双抗青链霉素的体积百分含量为1％；
30、d)将经过c)处理后离体人毛发样本放入超净台处理：用无双抗的dpbs/pbs清洗一次，并将无双抗的dpbs/pbs清洗后的残存液留下并标注处理后液体b，将此次处理后的离体毛发样本记作待分离的离体毛发样本；
31、再将所述收集的液体a和液体b进行无菌检测。
32、上文无菌检测为将所述液体a和所述液体b进行平皿实验，若液体b无菌，则进行本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种体外分离人毛囊来源的毛乳头细胞的方法，为如下方法A)或方法B)：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述运输时间小于等于48小时。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：
7.根据权利要求3-6中任一所述的方法，其特征在于：
8.根据权利要求3-7中任一所述的方法，其特征在于：所述酶解的条件为37℃消化30-120min。
9.权利要求1-8任一所述方法在延长分离毛乳头细胞所用毛囊组织的离体的时限中的应用。
10.权利要求1-8任一所述方法在提高原代分离毛囊来源的毛乳头细胞中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种体外分离人毛囊来源的毛乳头细胞的方法，为如下方法a)或方法b)：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
4.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述运输时间小于等于48小时。
6.根据权利要求4或5所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘旭，解名名，姚慧，
申请(专利权)人：北京星辉再生科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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