一种干细胞提取物的制备方法及其在生发中的应用技术

本发明专利技术公开了一种干细胞提取物的制备方法及其在生发中的应用。该方法包括如下步骤：首先在无血清培养基中培养间充质干细胞，传代，得到种子细胞；之后向种子细胞加入无血清培养基，继续培养；然后消化成单细胞继续在无血清培养基培养；加入细胞基础培养基培养，收集上清并浓缩，得到干细胞提取物；最后除菌和/或除病毒。实验证明，采用该方法制备的干细胞提取物含有bFGF、KGF、HGF、VEGF、TGF

【技术实现步骤摘要】
一种干细胞提取物的制备方法及其在生发中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种干细胞提取物的制备方法及其在生发中的应用。

技术介绍

[0002]雄激素性脱发(androgenic alopecia，AGA)是一种最常见的脱发疾病。雄激素性脱发男女均可罹患，但表现为不同的脱发模式和患病率。雄激素性脱发是一个伴随年龄增长而发病并且呈现越发严重症状的疾病。通常发病于青春期，表现为进行性头发径的变细、头发密度的降低和脱发，直至出现不同程度的秃发。研究表明，雄激素在AGA的发病中占有决定性因素；其他包括毛囊周围炎症、生活压力的增大、紧张和焦虑、不良的生活和饮食习惯等均可加重AGA的症状。
[0003]据统计我国脱发人群已超过2.5亿，并且脱发群体的年轻化趋势明显，给更多的年轻人带来了困扰，脱发市场很大。然后目前的治疗手段主要有日化品类，如生发洗发水，然后几乎没有明显效果；国内和国际上主要使用米诺地尔和非那雄胺两种药物，但有明显的副作用；此外还有植发技术日趋成熟，然而植发受自身头发数量限制，而且费用昂贵。干细胞及提取物等以干细胞再生医学为核心的治疗手段目前在欧美日韩等国家已经有产品上市，我们目前处于研发的早期阶段，还没有上市的商品。
[0004]间充质干细胞(Mesenchymal stem cells/Mesenchymal stromal cells，MSC)因其具有很好的免疫调节能力和促血管再生能力，并且具有低免疫原性能够异体使用，在很多疾病，如缺血性血管疾病，糖尿病，呼吸系统疾病，肝硬化，关节炎，移植抗宿主病等方面展现了很好的治疗效果，目前国际上已经有十几款间充质干细胞上市，国内有十几块间充质干细胞获批临床许可。研究表明间充质干细胞主要是通过旁分泌和自分泌起作用。已有大量文献表明于间充质干细胞分泌的细胞因子中包括多个与生发相关的因子：
[0005]VEGF为头发内皮生长因子，它在毛囊生命的发展中扮演一个重要的角色，不只对起始生长，还对确定分化、结构与生长的时间长短等发挥重大影响。
[0006]FGF能促进成纤维细胞有丝分裂、中胚层细胞生长，还可刺激血管形成。通过激活毛母质细胞的蛋白信号通路，FGF可以影响真皮细胞分裂，促进毛乳头细胞增殖。FGF在上皮再生中也可发挥重要作用，表现为刺激血管形成，促进角质细胞生长。
[0007]TGF
‑
β属于一组调节细胞生长和分化的TGF
‑
β超家族，涉及毛囊发育过程中的多种信号途径，包括调节上皮成分和间质成分，对毛囊的发育、细胞分化、细胞外基质的形成以及血管生成都有重要作用，同时TGF
‑
β还可以控制毛发生长周期的进行，激发胶原的合成，毛囊干细胞可以经过TGF
‑
β1的刺激诱导转化成血管内皮细胞组织，从而改善头皮血液循环。
[0008]HGF为肝细胞生长因子(HGF),够推动毛细血管的转化成，为头发毛囊出示营养元素。
[0009]KGF：角质细胞生长因子是人体皮下的组织细胞分泌的一种碱性蛋白生长因子，能
特异刺激上皮细胞的新陈代谢等生理过程，包括细胞的再生、分化和迁移等，裸鼠实验证实KGF
‑
2可促进毛囊发育和毛发生长。
[0010]PDGF为血小板衍生生长因子(Platelet derived growth factor，PDGF)是贮存于血小板α颗粒中的一种碱性蛋白质。是低分子量促细胞分裂素,具有促进血管再生的生物学功能。
[0011]已有文献报道，含PDGF(44.41
±
2.56pg/mL)，bFGF(131.35
±
30.31pg/mL)，KGF(86.28
±
20.33pg/mL),TGF
‑
β1(103.33
±
1.70pg/mL)，HGF(670.94
±
86.92pg/mL)，VEGF(809.53
±
95.98pg/mL)的干细胞提取物在临床上具有明显促进生发的作用。如果干细胞提取物含有的生发因子种类越多和/或生发因子的含量越高，则该物质的生发效果一般越好。

技术实现思路

[0012]本专利技术的目的为提供一种具有生发效果的且安全性更高的干细胞提取物。
[0013]本专利技术首先保护一种干细胞提取物的制备方法，包括如下步骤：
[0014](1)在无血清培养基中培养间充质干细胞，之后传代，得到种子细胞；
[0015](2)完成步骤(1)后，向所述种子细胞加入无血清培养基，培养，之后消化成单细胞；将单细胞接种至装有无血清培养基的培养容器，培养；
[0016](3)完成步骤(2)后，加入细胞基础培养基培养；收集上清液；
[0017](4)完成步骤(3)后，取所述上清液，进行澄清过滤，得到澄清干细胞提取物；
[0018](5)完成步骤(4)后，将所述澄清干细胞提取物浓缩，得到浓缩干细胞提取物，即干细胞提取物。
[0019]上述方法中，所述无血清培养基为间充质干细胞无血清培养基。
[0020]上述方法中，所述无血清培养基具体可为ncMission hMSC Medium(Nuwacell，RP02010)或间充质干细胞无血清培养基(Yocon，NC0103+NC0105.S)。
[0021]上述方法中，所述步骤(3)中，所述培养的条件可为35
‑
39℃(如35
‑
37℃、37
‑
39℃、35℃、37℃或39℃)、3
‑
7％CO2(如3
‑
5％CO2、5
‑
7％CO2、3％CO2、5％CO2或7％CO2)、0.0
‑
21.0％O2(如0
‑
1.0％O2、1.0
‑
2.0％O2、2.0
‑
3.0％O2、3.0
‑
5.0％O2、5.0
‑
8.0％O2、8.0
‑
21.0％O2、0.0％O2、1.0％O2、2.0％O2、3.0％O2、5.0％O2、8.0％O2或21.0％O2)。其它步骤中的培养的条件可为35
‑
39℃(如35
‑
37℃、37
‑
39℃、35℃、37℃或39℃)、3
‑
7％CO2(如3
‑
5％CO2、5
‑
7％CO2、3％CO2、5％CO2或7％CO2)、21.0％O2培养(正常空气中氧浓度约为21.0％)。
[0022]上述方法中，所述步骤(3)中，培养的天数可为1
‑
7天(如1
‑
2天、2
‑
3天、3
‑
4天、4
‑
7天、1天、2天、3天、4天或7天)。上述方法中，所述步骤(3)中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种干细胞提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)在无血清培养基中培养间充质干细胞，之后传代，得到种子细胞；(2)完成步骤(1)后，向所述种子细胞加入无血清培养基，培养，之后消化成单细胞；将单细胞接种至装有无血清培养基的培养容器，培养；(3)完成步骤(2)后，加入细胞基础培养基培养；收集上清液；(4)完成步骤(3)后，取所述上清液，进行澄清过滤，得到澄清干细胞提取物；(5)完成步骤(4)后，将所述澄清干细胞提取物浓缩，得到浓缩干细胞提取物，即干细胞提取物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无血清培养基为间充质干细胞无血清培养基。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，培养的条件为35
‑
39℃、3
‑
7％CO2、0.0
‑
21.0％O2。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，培养的天数为1
‑
7天，优选2
‑
4天。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：间充质干细胞为ADSC或UC
...

【专利技术属性】
技术研发人员：方金辉，姚慧，
申请(专利权)人：北京星辉再生科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：