人间充质干细胞培养基及制备方法技术

本发明专利技术公开了人间充质干细胞培养基及制备方法，其特征在于：包括以下五个步骤。本发明专利技术将培养基进行混合，培养基填装在培养皿的内部，调节培养基的pH值，将培养基添加到培养皿后，同时在培养基的内部添加血清替代物，将血清与培养基之间进行混合，将混合后的培养液进行过滤除菌，去除杂质，扩增人间充质干细胞，使用胰酶消化细胞，用人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基重悬细胞，每孔加入所述人间充质干细胞成软骨分化诱导培养基培养2周，将细胞加入营养液，在培养器皿内部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生，方便多次进行使用。使用。使用。

【技术实现步骤摘要】
人间充质干细胞培养基及制备方法


[0001]本专利技术涉及间充质干细胞培养
，具体为人间充质干细胞培养基及制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力，在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建，当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且安全无不良反应，干细胞指的是能够自我更新、分裂以及分化成其它细胞类群的一种细胞。间充质干细胞是一种多能干细胞，其起源于中胚层，而且来源广泛，可从多种组织如骨髓、脐带、脂肪组织等中分离得到，间充质干细胞具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。
[0003]在培养过程中会引入大量动物源性物质，给其自我更新和分化过程带来了很多的不确定因素，造成分化过程中出现误差，还可能在其培养过程中引入动物源性污染，导致间充质干细胞被污染。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供人间充质干细胞培养基及制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：人间充质干细胞培养基及制备方法，包括以下五个步骤：步骤一：所述培养皿消毒，将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦拭干，将培养皿的外部包裹纱布，放置在高压蒸汽灭菌锅中将培养皿中的水分蒸干；步骤二：所述添加源培养基，选择L
‑
氨基酸及其衍生物、L
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抗坏血酸钠、叶酸、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、D
‑
葡萄糖、酚红、丙酮酸钠和人血白蛋白中的至少一种，添加胎牛血清、丙酮酸钠、抗坏血酸、脯氨酸、塞米松、转化生长因子
‑
β和胰岛素生长因子，将培养基进行混合；步骤三：所述添加血清替代物，将培养基添加到培养皿后，同时在培养基的内部添加血清替代物，将血清与培养基之间进行混合，将混合后的培养液进行过滤除菌，去除杂质；步骤四：所述细胞扩增培养，扩增人间充质干细胞，使用胰酶消化细胞，用人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基重悬细胞，将10μL细胞悬液滴加到六孔板上，每孔加入所述人间充质干细胞成软骨分化诱导培养基培养2周；步骤五：所述培养滋生，将细胞加入营养液，将分化诱导培养基培养的人间充质干细胞进行培养分化滋生，使细胞能够，将细胞系导入至培养器皿中进行培养，在培养器皿内
部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生，方便多次进行使用。
[0006]进一步，所述将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦拭干，将培养皿的外部包裹纱布，放置在高压蒸汽灭菌锅中将培养皿中的水分蒸干，同时使培养皿在高温环境下进行灭菌操作，灭菌温度应为120~150℃，灭菌时间控制在3min，灭菌后烘干备用。
[0007]进一步，所述选择L
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氨基酸及其衍生物、L
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抗坏血酸钠、叶酸、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、D
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葡萄糖、酚红、丙酮酸钠和人血白蛋白中的至少一种，添加胎牛血清、丙酮酸钠、抗坏血酸、脯氨酸、塞米松、转化生长因子
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β和胰岛素生长因子，将培养基进行混合，培养基填装在培养皿的内部，调节培养基的pH值。
[0008]进一步，所述将培养基添加到培养皿后，同时在培养基的内部添加血清替代物，血清替代物选自总胆红素、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、总蛋白质、白蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、葡萄糖、钾、钠、钙、无机磷、氯化物、镁、铁、肌酐、血小板衍生因子的混合物，将血清与培养基之间进行混合，将混合后的培养液进行过滤除菌，去除杂质。
[0009]进一步，所述扩增人间充质干细胞，使用胰酶消化细胞，用人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基重悬细胞，浓度为2X107个/mL，将10μL细胞悬液滴加到六孔板上，每孔5滴，将细胞在培养箱中放置2小时，每孔加入所述人间充质干细胞成软骨分化诱导培养基培养2周。
[0010]进一步的，所述将细胞加入营养液，将分化诱导培养基培养的人间充质干细胞进行培养分化滋生，使细胞能够，将细胞系导入至培养器皿中进行培养，在培养器皿内部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生，方便多次进行使用。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦拭干，将培养皿的外部包裹纱布，放置在高压蒸汽灭菌锅中将培养皿中的水分蒸干，同时使培养皿在高温环境下进行灭菌操作，灭菌后烘干备用，将培养基进行混合，培养基填装在培养皿的内部，调节培养基的pH值，将培养基添加到培养皿后，同时在培养基的内部添加血清替代物，将血清与培养基之间进行混合，将混合后的培养液进行过滤除菌，去除杂质，扩增人间充质干细胞，使用胰酶消化细胞，用人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基重悬细胞，每孔加入所述人间充质干细胞成软骨分化诱导培养基培养2周，将细胞加入营养液，将分化诱导培养基培养的人间充质干细胞进行培养分化滋生，使细胞能够，将细胞系导入至培养器皿中进行培养，在培养器皿内部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生，方便多次进行使用。
附图说明
[0012]图1为本专利技术的人间充质干细胞培养基及制备方法步骤流程示意图。
具体实施方式
[0013]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0014]在本专利技术的描述中，需要说明的是，术语“上”、“下”、“内”、“外”“前端”、“后端”、“两端”、“一端”、“另一端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本专利技术的限制。此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
[0015]在本专利技术的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置有”、“连接”等，应做广义理解，例如“连接”，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本专利技术中的具体含义。
[0016]实施例1请参阅图1，本专利技术提供的实施例：人间充质干细胞培养基及制备方法，包括以下五个步骤：步骤一：所述培养皿消毒，将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人间充质干细胞培养基及制备方法，其特征在于：包括以下五个步骤：步骤一：所述培养皿消毒，将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦拭干，将培养皿的外部包裹纱布，放置在高压蒸汽灭菌锅中将培养皿中的水分蒸干；步骤二：所述添加源培养基，选择L
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氨基酸及其衍生物、L
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抗坏血酸钠、叶酸、磷酸二氢钠、碳酸氢钠、D
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葡萄糖、酚红、丙酮酸钠和人血白蛋白中的至少一种，添加胎牛血清、丙酮酸钠、抗坏血酸、脯氨酸、塞米松、转化生长因子
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β和胰岛素生长因子，将培养基进行混合；步骤三：所述添加血清替代物，将培养基添加到培养皿后，同时在培养基的内部添加血清替代物，将血清与培养基之间进行混合，将混合后的培养液进行过滤除菌，去除杂质；步骤四：所述细胞扩增培养，扩增人间充质干细胞，使用胰酶消化细胞，用人间充质干细胞成软骨诱导分化培养基重悬细胞，将10μL细胞悬液滴加到六孔板上，每孔加入所述人间充质干细胞成软骨分化诱导培养基培养2周；步骤五：所述培养滋生，将细胞加入营养液，将分化诱导培养基培养的人间充质干细胞进行培养分化滋生，使细胞能够，将细胞系导入至培养器皿中进行培养，在培养器皿内部加入培养液、血清及试剂等营养物质，使细胞能够进行储存和备份，通过细胞增殖使细胞分裂和滋生，方便多次进行使用。2.根据权利要求1所述的人间充质干细胞培养基及制备方法的应用，其特征在于：所述将培养皿用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，将内部的水进行清除擦拭干，将培养皿的外部包裹纱布，放置在高压蒸汽灭菌锅中将培养皿中的水分蒸干，同时使培养皿在高温环境下进行灭菌操作，灭菌温度应为120~150℃，灭菌时间控制在3min，灭菌后烘干备用。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘玉珍，周润享，孙滢，
申请(专利权)人：泉州伟业生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：