一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法技术

本发明专利技术公开了一种估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法，以及一种HSF细胞模型及其应用。所述HSF细胞模型由人真皮成纤维永生化细胞系经20

【技术实现步骤摘要】
一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法


[0001]本专利技术属于生物检测领域，涉及一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法，还涉及一种HSF细胞模型及其应用。

技术介绍

[0002]越来越多的研究者把目光从以癌症为代表的致命性疾病转移到以自身免疫性疾病为代表的慢性病治疗上来。自免疾病与患者异常活跃的自身免疫系统息息相关，其大多数疾病虽然并不会在短时间内导致患者死亡，但往往迁延难愈，严重影响患者的生活质量。开发相关自免药物，需要许多免疫学实验方法的支持，包括运用不同组织细胞在体外模拟炎症的发生与药物抑制的效果。因而，这类方法平台的开发对于新药的早期设计与筛选来说，显得尤为重要。
[0003]趋化因子(Chemokines)是一类结构相似、分子量约8
‑
12kDa的小分子分泌性蛋白，这些蛋白因其有定向细胞趋化作用而得名。趋化因子种类繁多，根据位于N末端的保守半胱氨酸残基的数量和位置，被分为四个主要亚家族：CXC、CC、CX3C和XC，是目前已知细胞因子中最大亚群。趋化因子都通过与选择性地表达在靶细胞表面的G蛋白连接的跨膜受体(称为趋化因子受体)相互作用来发挥其生物学效应。有的趋化因子被认为促进炎症反应，而有些趋化因子被认为在正常的修复过程或发育中控制细胞的迁徙。CC趋化因子亚族包括CCL1
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CCL28等；CXC趋化因子亚族包括CXCL1
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CXCL17等。参与T淋巴细胞募集到炎症部位的四个关键趋化因子是：CCL2、CCL1、CCL22和CCL17。此外，T细胞激活后诱导CXCR3表达，活化的T细胞被炎症部位吸引，在炎症部位分泌IFN
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γ诱导的趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11。
[0004]许多研究已经确定趋化因子及其同源趋化因子受体在癌症进展和治疗结果中发挥作用，参与肿瘤生长、存活、肿瘤细胞转移和血管生成。此外，趋化因子也跟炎症或感染性疾病相关。在许多人类风湿性疾病中观察到高水平的趋化因子，包括类风湿性关节炎(RA)2、系统性红斑狼疮(SLE)3、系统性硬化症(SSc)4、血管炎5和特发性炎性肌病(IIM)。与趋化因子受体相关的炎症或感染性疾病包括多发性硬化症、银屑病、移植排斥、糖尿病、肥胖、哮喘、炎性肠病、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎等。
[0005]使用IFN
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γ刺激人真皮成纤维细胞是诱导CXCL9/10等趋化因子分泌的一种有效方法，但现有技术中通常使用原代细胞进行诱导。原代细胞来源复杂，由不同捐献者提供，存在很大的个体差异。且原代细胞生长条件相对苛刻，难以连续传代，大大限制了实验周期，不利于实验的后续重复。因此亟需一种简便、快速且高效的评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的细胞学方法。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中缺乏有效的评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的细胞学方法的问题，本专利技术提供了一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法，以及一种HSF细胞模型及其应用。本专利技术不仅证明了所述HSF细胞模型作为药物筛选平台的可靠性与实用性，也
展示了JAK通路抑制剂可用于治疗IFN
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γ/CXCL9/CXCL10趋化因子相关疾病的应用前景。
[0007]本专利技术的技术方案之一为提供一种HSF细胞模型，其由人真皮成纤维永生化细胞系经20
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100ng/mL IFN
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γ诱导48
‑
72小时获得。
[0008]在一些优选的实施例中，所述IFN
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γ的浓度为50ng/mL；和/或，诱导的时间为48小时。
[0009]在一些优选的实施例中，所述IFN
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γ为人源IFN
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γ例如重组人源IFN
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γ；和/或，所述人真皮成纤维永生化细胞系为AW
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CELLS
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Y0033。
[0010]本专利技术的技术方案之二为提供如技术方案之一所述的HSF细胞模型在评估靶向药抑制趋化因子分泌效力中的应用。
[0011]本专利技术的技术方案之三为提供一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法，其包括以下步骤：
[0012](1)将靶向药与如技术方案之一所述的HSF细胞模型接触；
[0013](2)检测细胞上清液中趋化因子的浓度。
[0014]在一些优选的实施例中，(2)中，所述趋化因子选自CXC趋化因子亚族。
[0015]优选地，所述趋化因子为IFN
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γ诱导的趋化因子，例如为CXCL9、CXCL10和CXCL11中的一种或多种。
[0016]在一些优选的实施例中，(2)中，使用ELISA方法检测趋化因子的浓度。
[0017]在一些优选的实施例中，(2)中，检测趋化因子的浓度前，离心收集细胞上清液；所述离心例如1000转/分钟，5分钟。
[0018]在一些优选的实施例中，(1)中，所述接触为将靶向药与所述HSF细胞模型接触1小时。
[0019]在一些优选的实施例中，(1)中，用梯度稀释的所述靶向药与HSF细胞模型接触。
[0020]优选地，所述梯度稀释的起始浓度为10μmol/L，3
‑
10倍梯度稀释，5
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10个浓度点。
[0021]在一些优选的实施例中，1)中，制备HSF细胞模型时，将HSF细胞复苏后接种至96孔板，25000细胞/孔，90微升/孔，置于二氧化碳培养箱过夜培养。本文中，过夜培养为本领域常规理解的培养时间，通常为12
‑
20小时，例如16小时。
[0022]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0023]本专利技术所用试剂和原料均市售可得。
[0024]本专利技术的积极进步效果在于：
[0025]本专利技术使用了特定的永生化细胞系诱导的HSF细胞模型，其多次传代后仍能健康生长，增殖速度快，可以批量生产，用以支撑足够多的实验和重复验证，用于评估靶向药抑制趋化因子分泌效力时，可以得出严格准确的结论。
附图说明
[0026]图1为JAK抑制剂对于IFN
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γ诱导HSF细胞产生CXCL9的抑制作用。
[0027]图2为JAK抑制剂对于IFN
‑
γ诱导HSF细胞产生CXCL10的抑制作用。
具体实施方式
[0028]本专利技术使用的细胞和主要试剂如下：
[0029]细胞：人真皮成纤维永生化细胞系AW
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CELLS
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Y0033
[0030]培养基：真皮成纤维细胞专用培养基
[0031]刺激因子：重组人源IFN
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γ(人源重组蛋白，Absin，abs04123)
[0032]化合物：JAK通路抑制剂
[0033]卢索替尼(Ruxolitinib本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HSF细胞模型，其特征在于，其由人真皮成纤维永生化细胞系经20
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100ng/mL IFN
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γ诱导48
‑
72小时获得。2.如权利要求1所述的HSF细胞模型，其特征在于，所述IFN
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γ的浓度为50ng/mL；和/或，诱导的时间为48小时。3.如权利要求1或2所述的HSF细胞模型，其特征在于，所述IFN
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γ为人源IFN
‑
γ例如重组人源IFN
‑
γ；和/或，所述人真皮成纤维永生化细胞系为AW
‑
CELLS
‑
Y0033。4.一种如权利要求1
‑
3任一项所述的HSF细胞模型在评估靶向药抑制趋化因子分泌效力中的应用。5.一种评估靶向药抑制趋化因子分泌效力的方法，其特征在于，其包括以下步骤：(1)将靶向药与如权利要求1
‑
3任一项所述的HSF细胞模型接触；(2)检...

【专利技术属性】
技术研发人员：董博，汪小凯，吕立力，程慧娟，李蕗，邓军，汪俊，万昭奎，
申请(专利权)人：凌科药业杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：