卡介菌多糖核酸制备过程中透析新工艺制造技术

本发明专利技术卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，其特征在于：透析的具体操作步骤是：透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液体是走内液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是由下而上，而外通道的流向是由上而下；首先取离心上清液，集中倒入一容器内，该容器内液体必须高于透析器的高度，这样可以利用位差将液体通过透析柱时能自下而上逆流而出，采用调节阀来控制流速，以每分钟２０毫升恒定流量。同时开启透析柱外液通道，将纯化水接入，自上而下流出，每分钟流量控制在６００～８００毫升左右，内液与外液流速比为１∶３０～４０，外液流速的调节是根据内液流出不含苯酚为准。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，特别涉及到将卡介菌提取液中苯酚去除，采用中空纤维透析器透析除酚。
技术介绍
卡介菌多糖核酸(BCG Polysaccharide and Nucleic)具有调节人体的免疫功能、 主要用于预防和治疗慢性支气管炎、感冒、哮喘。 现有的卡介菌多糖核酸原粉制备全过程是培养基制备、接种、培养、收菌、破菌、提 取、透析、精制和制备干粉。其中透析除酚这道工序，直接关系到原粉的质量以及对员工的 劳动保护，是至关重要的。目前国内生产厂家一般采用这种经典的、原始的透析袋方法透 析。 现有的卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析袋方法是将破菌后的提取液灌入透 析袋内，扎紧袋口 ，放入装有纯化水的容器内，进行静置透析，透析途中需定时换纯化水，直 至透析外液即纯化水中用三氯化铁定性测定苯酚，测不出苯酚即透析完毕，透析时间大约 需要72小时。然后再进入下一步工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。更重要是由于透析 袋法操作，手工灌袋近距离接触苯酚，人体皮肤易受伤害，而透析柱法不必人员直接操作， 这样就避免了人体受伤害的可能。
技术实现思路
本专利技术提供了卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，采用中空纤维透析柱 进行透析，将提取液中苯酚去除，获得卡介菌菌体内的多糖和核酸。卡介菌多糖核酸原料提取过程是培养基制备一接种一培养一收菌一破菌一离心一透析一醇沉一精制干燥一制备原粉。卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺为 透析的具体操作步骤是透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液体是走内 液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是由下而上，而外通道的流 向是由上而下。首先取离心上清液，集中倒入一容器内，该容器内液体必须高于透析器的高 度，这样可以利用位差将液体通过透析柱时能自下而上逆流而出，采用调节阀来控制流速， 以每分钟20毫升恒定流量。同时开启透析柱外液通道，将纯化水接入，自上而下流出，每分 钟流量控制在600 800毫升左右，内液与外液流速比为1 : 30 40，外液流速的调节是 根据内液流出不含苯酚为准。 测定方法取2毫升透析内液，加一滴10%三氯化铁试液摇匀，透析液不得出现紫 色反应，说明不含苯酚。然后收集不含有苯酚的流出液。 一批料透析时间约为4小时，透析 完毕，制备的透析液进入下一道工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。 本专利技术由于改变了透析方式，即采用中空纤维透析柱透析，在不增加任何赋形剂， 且透析的原理未改变的情况下，最后制备的原粉中酚残留和杂蛋白明显减少，从而使质量3提高并完全符合检验标准，工作时间从72小时縮短至4小时，操作工从3人减至为1人，同 时改善了员工的劳动保护，生产成本也下降。 然而我公司现有的制备工艺，将提取液直接通过中空纤维透析柱，自下而上逆流 透析，1分钟后流出的透析内液即不含苯酚了，整批提取液通过透析柱透析时间只需4小时 左右。根据用高效液相法定量测定残留苯酚，获得数据分析，透析袋比透析柱法液体中酚残 留多4-5倍，由此可见用透析柱法得到的原粉质量更好，生产时间大幅度縮短，成本下降。 实施例1 将6公斤菌体加40升纯化水破菌，再加40升苯酚萃取，最后可获得提取液25升。 然后把提取液倒入不锈钢容器内，再把不锈钢桶放到高位槽上，利用位差将提取液接入透 析柱的内管下口 ，液体自下而上逆流而出，用三氯化铁测定透析内液的结果来控制流速，同 时纯化水进入透析柱外管上口，自上而下流出，带走提取液中的苯酚。整个透析时间为4小 时，透析完毕，制备的透析液进入下一道工序，最后制得卡介菌多糖核酸原粉。 比较实施例1 取6公斤菌体加40升纯化水破菌，再加40升苯酚萃取，最后可获得提取液25升。 然后将提取液用手工方法灌入透析袋内并扎紧袋口 ，每支透析袋可装500毫升左右，大约 可灌50支透析袋，最后把透析袋放入装有纯化水的透析池内，进行静置透析，透析中途定 时换弃纯化水，直至透析袋外液即纯化水中用三氯化铁定性测定，测不出苯酚，大约需要换 水10次左右，整个透析时间约72小时。然后再进入下一步工序，最后制得卡介菌多糖核酸 原粉。由于人工近距离操作，难免含有苯酚的液体直接侵蚀人体皮肤，气体剌激人的呼吸系 统，导致接触液体的皮肤腐蚀变白，并有头疼、口麻、恶心等症状。 新老工艺对比 <table>table see original document page 4</column></row><table> 2008年5月对不同透析设备的验证数据 <table>table see original document page 5</column></row><table> 从表中可以看出采用中空纤维透析柱法与透析袋法相比较，无论从质量、人力、物 力、生产时间、劳动保护等方面来说透析柱确确实实是优胜的。 本专利技术方法可提高卡介菌多糖核酸原粉的质量，縮短了整个生产周期，节约了生 产力，降低了生产总成本。 虽然以上具体描述了本专利技术某些实施方案和实施例，但本领域所属技术人员应当 理解，在不脱离本专利技术基本精神和范围的前提下可对本专利技术实施方案进行各种修改和替换，而这些修改和替换均应包括在本专利技术的等同范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，其特征在于：透析的具体操作步骤是：透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液体是走内液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是由下而上，而外通道的流向是由上而下；首先取离心上清液，集中倒入一容器内，该容器内液体必须高于透析器的高度，这样可以利用位差将液体通过透析柱时能自下而上逆流而出，采用调节阀来控制流速，以每分钟２０毫升恒定流量；同时开启透析柱外液通道，将纯化水接入，自上而下流出，每分钟流量控制在６００～８００毫升左右，内液与外液流速比为１∶３０～４０，外液流速的调节是根据内液流出不含苯酚为准。

【技术特征摘要】
卡介菌多糖核酸原粉制备过程中透析新工艺，其特征在于透析的具体操作步骤是透析器有内液与外液两个通道，需要透析的液体是走内液通道，能去除杂质的纯化水是走外液通道，内通道的流向必须是由下而上，而外通道的流向是由上而下；首先取离心上清液，集中倒入一容器内，该容器内液体必须高于透析器的...

【专利技术属性】
技术研发人员：江克光，李革芳，阎晓文，蒋瑞红，
申请(专利权)人：浙江万马药业有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]