注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种适合用作注射用重组人血管内皮抑制素的温度敏感性凝胶组合物。本发明专利技术的温度敏感性凝胶组合物一次给药后可以缓慢平稳的释放药物，从而减少给药次数，降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物。本专利技术的 注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物一次给药后可以缓慢平稳的释放药 物，从而减少给药次数，降低患者生理上的痛苦，提高患者的临床顺应性。
技术介绍
温度敏感性凝胶是目前研究最为广泛的一类原位凝胶。它是将药物和聚合物溶 于适宜的溶剂中，局部皮下注射，在给药部位，聚合物在生理条件下凝固而形成半固体或固 体药物贮库。是通过高分子材料以溶液或半固体状态给药后，在用药部位对外界刺激(温 度)发生响应，发生分散或构象的可逆转化，从而形成的半固体或液体制剂。这种由水溶性 高分子材料制备的温度敏感性凝胶具有高度亲水性的三维网格结构及良好的组织相容性、 生物黏附性非常适宜作为蛋白多肽大分子药物的控释材料，其独特的溶液——半固体凝胶 转变性质，克服了普通乳剂、脂质体、微球和胶束的缺点，具有可用于病变部位的局部给药、 延长释药周期、降低给药剂量和药物不良反应、避免植入剂开刀植入时的痛苦、工艺相对简 单、在用药部位滞留时间长及良好的缓释作用等优点。重组人血管内皮抑制素(Endostar ,中文名恩度 ) (ZL 00107569. 1)是通过修 饰人血管内皮抑制素的核苷酸编码序列使其N末端带有9个附加氨基酸序列。所生产的重 组人血管内皮抑制素由192个氨基酸构成，其氨基酸序列为(M)GGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVA LNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSE GPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSVWHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHA YIVLCIENSFMTASK。O'Reilly教授于1997年从小鼠内皮细胞系EOMAD的培养液中分离得到了具有抑 制血管内皮细胞生长的物质(血管内皮抑制素，Endostatin)，其通过抑制肿瘤血管的生成 能够显著地抑制多种原发性肿瘤的生长(0，Relly, M. S.，et al. Cell. 1997，88 :277_285)。 重组人血管内皮抑制素正是基于“饿死肿瘤疗法”理论来抑制肿瘤生长，临床上联合NP化 疗方案用于非小细胞肺癌患者。重组人血管内皮抑制素Endostar保持内源性Endostatin的所有生物活性，但是 作为外源性蛋白，在体内很容易被免疫系统识别，进而被降解，因此体内半衰期很短。目 前市售的Endostar为普通注射液，临床使用中患者需每天注射一次，连续14天为一个疗 程，休息一周后，再继续下一疗程。由于频繁的注射给药，患者临床顺应性差。近期有研究 发现动物体内小剂量持续给予Endostatin的药效要优于间歇性给药(MinoruKuroiwa，et al.J.Pediatr. Surg. 2003,38 1499-1505 ；Oliver Kisker, et al. Cancer Res. 2001,61 7669-7674)。因此，将Endostar开发成温度敏感性凝胶缓释制剂，可以使药物在体内缓慢 平稳的释放，延长药物在体内的半衰期，降低血药峰谷差异带来的疗效波动，更好地用于疾 病的预防和治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适合用作注射用重组人血管内皮抑制素的温度敏感性 凝胶组合物，一次给药后可以缓慢平稳的释放药物，从而减少给药次数，降低患者生理上的 痛苦，提高患者的临床顺应性。本专利技术的注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物包括温度敏感性 的高分子材料，生物相容性助剂和注射用重组人血管内皮抑制素。本专利技术所述的温度敏感性的高分子材料系指能够在外界(温度)刺激下发生分散 状态或构象的可逆变化，完成由溶液向凝胶的转化过程。本组合物中温度敏感性的高分子 材料选自丙烯酰胺聚合物、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇-聚氧丙烯嵌段共聚 物、纤维素类衍生物、淀粉、海藻酸、透明质酸，用量占组合物重量的2% wt 60% wt。其中丙烯酰胺聚合物优选为聚N-异丙基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰 胺、聚(N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酰胺)中的一种或多种。其中聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(泊洛沙姆)优选为泊洛沙姆105，泊洛沙姆 124，泊洛沙姆188，泊洛沙姆237，泊洛沙姆338，泊洛沙姆401，泊洛沙姆403，泊洛沙姆407 中的一种或多种。其中纤维素类衍生物优选为甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羟乙基纤维素、乙基羟乙 基纤维素、羧甲基纤维素中的一种或多种。本专利技术所述的生物相容性的助剂包括氯化钠、柠檬酸、柠檬酸钠、聚乙二醇、聚乙 烯醇、甘油磷酸盐、水，生物相容性助剂占组合物重量的20% wt 95% Wt0本专利技术所述的重组人血管内皮抑制素是能够抑制内皮细胞增殖的蛋白质、片段或 其修饰形式。重组人血管内皮抑制素可以是溶液，也可以是固体。固体可以由溶液经冷冻干 燥或者喷雾干燥而得。经冷冻干燥的重组人血管内皮抑制素可以含有一定比例的赋形剂， 包括甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖。赋形剂与重组人血管内皮抑制素的质量比为0.1 1 6 1。优选的，重组人血管内皮抑制素为重组人血管内皮抑制素Endostar，更优选的重组 人血管内皮抑制素重量占组合物重量的wt 30% wt。本专利技术中注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶具有缓释效果，可以缓慢 释放重组人血管内皮抑制素。本专利技术的优点主要在于第一本专利技术组合物中温度敏感性的高分子材料在许多无机或有机酸的水溶液中 都可以溶解，可以避免制备过程中使用有机溶剂，破坏蛋白活性；第二与微球等给药系统相比，本专利技术中的组合物工艺路线简单可行，成本低廉；制 备条件温和，对蛋白活性影响很小，载药能力大。第三凝胶系统在局部药物传递方面具有明显优势。凝胶系统可以利用细注射针管 或损伤性很小的外科技术给药，能够实现精确定位，而这对于微球或植入剂是不可能的。第四本专利技术得到的组合物可调控活性成分的释放时间，使在体内的释放时间在7 天 28天，甚至更长。附图说明图1重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶释放曲线。图2重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶释放曲线。 具体实施例方式本专利技术通过下列实施例作更详细的描述，但本专利技术的保护范围不局限于此。实施 例一配制pH6.0的等渗柠檬酸盐缓冲液，冷藏放置30min，然后缓慢加入10% (w/v)泊 洛沙姆188和15% (w/v)泊洛沙姆407，继续搅拌使分散均勻，直至聚合物完全溶解，得澄 明溶液。取2mL上述溶液置冰水浴中磁力搅拌，加入含500mg的Endostar缓冲溶液，搅拌使 其混合均勻，得到组合物。该组合物中泊洛沙姆占组合物的16.7%，Endostar占组合物的 16. 7%，其余为生物相容性助剂。将混勻后的组合物置于37°C水浴中使其固化，形成缓释释 放系统。将形成的凝胶置于37°C恒温水浴震荡器中，加入IOmL磷酸盐缓冲液PBS 7. 4。每个 取样点取释放液lmL，同时补充同体积新鲜的磷酸缓冲液。释放样品中Endostar的含量用 BCA法测定。用药物的累计释放百分率与释药时间作图(参见图1)。第1天释放0.78本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物，其特征在于组合物包括：（ａ）温度敏感性高分子材料，所述温度敏感性高分子材料选自丙烯酰胺聚合物、聚氧乙烯－聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇－聚氧丙烯嵌段共聚物、纤维素类衍生物、淀粉、海藻酸及其药学可接受的盐、透明质酸及其药学可接受的盐中的一种或多种；（ｂ）生物相容性的助剂；和（ｃ）重组人血管内皮抑制素。

【技术特征摘要】
一种注射用重组人血管内皮抑制素温度敏感性凝胶组合物，其特征在于组合物包括(a)温度敏感性高分子材料，所述温度敏感性高分子材料选自丙烯酰胺聚合物、聚氧乙烯 聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇 聚氧丙烯嵌段共聚物、纤维素类衍生物、淀粉、海藻酸及其药学可接受的盐、透明质酸及其药学可接受的盐中的一种或多种；(b)生物相容性的助剂；和(c)重组人血管内皮抑制素。2.权利要求1所述的组合物，其特征在于温度敏感性高分子材料占组合物重量的2% wt 60% wt。3.权利要求1所述的组合物，其特征在于所述丙烯酰胺聚合物选自聚N-异丙基丙烯酰 胺、聚甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺、聚(N-异丙基丙烯酰胺/丙烯酰胺)中的一种或多种。4.权利要求1所述的组合物，其特征在于温度敏感性高分子材料为聚氧乙烯_聚氧丙 烯嵌段共聚物。5.权利要求4所述的组合物，其特征在于聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物为泊洛沙姆， 所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆105，泊洛沙...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玲，王青松，刘春晖，许向阳，
申请(专利权)人：江苏先声药物研究有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]