【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及亚磷酰胺，特别涉及一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺及其制备方法。
技术介绍
1、迄今为止，对于癌症、病毒性感染等疾病，临床上仍缺少理想的特效药物。可喜的是，随着人类及重要模式生物基因组测序的完成，以及功能基因组学及蛋白质组学研究的深入，与疾病相关的分子靶标不断被发现和认识，为基因治疗提供了前提。
2、在过去的几十年里，人工合成的寡核苷酸已经广泛应用于靶向基因治疗的研究。寡聚核苷酸主要包括反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,asodn)、小干扰rna(small interference rna,sirna)、转录因子诱饵(decoy)、核酶(ribozyme)、脱氧核酶(dnazyme)、反基因(antigene)、cpg寡核苷酸和核酸适配体(aptamer)等。其中，asodn和sirna是最常用的基因调控工具，获得广泛应用，并已被开发为基因治疗药物。
3、目前，寡核苷酸主要采用化学方法合成，其通过亚磷酰化试剂上两个活性基团依次与保护核苷反应得到寡核苷酸。使用亚磷酰化试剂合成寡核苷酸的方法称为亚磷酰胺法，是目前寡核苷酸合成中最常用的方法，其中亚磷酰化试剂是亚磷酰胺法的关键原料。
4、然而，传统的亚磷酰胺制备具有低产率和/或纯度特点，这显著地增加了寡核苷酸合成的成本。如：传统的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺在制备过程中，主要是通过将(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶与双(二异丙基氨基
5、因此，如何提供一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的高效制备方法，是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺及其制备方法，以解决现有技术中的上述技术问题。
2、根据本专利技术的第一方面，提供了一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺，所述n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的结构式为：
3、
4、且，所述n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺由以下重量的原料制成：
5、二氯甲烷315-325g、(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶24-24.1g、二异丙基铵盐四氮唑15.5-15.6g、双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦16.35-16.45g。
6、其中，所述二异丙基铵盐四氮唑的结构式为：
7、
8、其中，所述(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶的结构式为：
9、
10、其中，所述双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦的结构式为：
11、
12、根据本专利技术的第二方面，提供了一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法。
13、所述n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的合成路线为：
14、
15、其中：(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶到n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的主要反应机理式为：
16、
17、具体的，双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦在二异丙基铵盐四氮唑催化作用下，发生分解脱去一分子二异丙基氨，与四氮唑结合，得到(二异丙基氨基)(四氮唑)(2-氰基乙氧基)膦；(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶的羟基氧进攻磷原子，再脱去四氮唑得到n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺。
18、且，所述n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法步骤包括：
19、将预先配置的二氯甲烷、(s)-1-(3-(4,4'-双甲氧基三苯甲基)-2-羟基丙基)-n4-乙酰胞嘧啶、二异丙基铵盐四氮唑以及双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦放入反应瓶，并进行预定时间的搅拌反应；
20、在搅拌反应后，进行hplc中控反应，并在确认反应完全后，对反应化合物进行多次水洗，去除水相保留有机相；
21、对水洗后的有机相进行过滤、浓缩和结晶，得到n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺。
22、可选的，所述预定时间为17-20小时，且搅拌反应时的温度为20-30℃。
23、可选的，对所述反应化合物进行多次水洗，去除水相保留有机相包括：利用质量浓度为10％的氯化钠对所述反应化合物进行多次水洗，去除水相保留有机相。
24、可选的，水洗次数为2次，且每次水洗时氯化钠的用量为400-450ml。
25、可选的，对水洗后的有机相进行过滤、浓缩和结晶，得到n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺包括：将水洗后的有机相与预置的硫酸钠进行混合，并静置设定时间，在静置时间达到设定时间后，对混合物进行过滤；对过滤后的混合物进行减压浓缩，并在减压浓缩后，加入甲基叔丁基醚和正庚烷溶解有机物，进行结晶处理，得到n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺。
26、可选的，所述硫酸钠的用量为30-50g，设定时间为0.5-1小时。
27、可选的，所述真空浓缩时的温度为20-30℃。
28、可选的，所所述甲基叔丁基醚的含量为300-330ml，所述正庚烷的含量为600-660ml，且在进行结晶时，环境温度为20-30℃，搅拌时间为2-3小时。
29、可选的，所述结晶处理的次数为2次，第一次结晶处理得到固体状n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺，第二次结晶处理为对第一次结晶处理后过滤水溶液进行结晶处理，得到粉末状n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺。
30、本专利技术提供的技术方案可以包括以下有益效果：
31、本专利技术工艺操作简单，且原料成本低，同时，通过本专利技术的工艺得到的产品转换率高，有利于大规模生产，为后续寡核苷酸合成提供了高纯度且价格低廉的原料保障，从而利于整个领域的技术进步。
32、应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本专利技术。
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1.一种N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺，其特征在于，由以下重量的原料制成：
2.一种N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，用于权利要求1所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备，包括：
3.根据权利要求1所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述预定时间为17-20小时，且搅拌反应时的温度为20-30℃。
4.根据权利要求1所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，对所述反应化合物进行多次水洗，去除水相保留有机相包括：
5.根据权利要求4所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，水洗次数为2次，且每次水洗时氯化钠的用量为400-450ml。
6.根据权利要求2所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，对水洗后的有机相进行过滤、浓缩和结晶，得到N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺包括：
7.根据权利要求6所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其
8.根据权利要求6所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述减压浓缩时的温度为20-30℃。
9.根据权利要求6所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述甲基叔丁基醚的含量为300-330ml，所述正庚烷的含量为600-660ml，且在进行结晶时，环境温度为20-30℃，搅拌时间为2-3小时。
10.根据权利要求6所述的N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述结晶处理的次数为2次，第一次结晶处理得到固体状N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺，第二次结晶处理为对第一次结晶处理后过滤水溶液进行结晶处理，得到粉末状N4-AC-C-(S)-GNA亚磷酰胺。
...【技术特征摘要】
1.一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺，其特征在于，由以下重量的原料制成：
2.一种n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，用于权利要求1所述的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备，包括：
3.根据权利要求1所述的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，所述预定时间为17-20小时，且搅拌反应时的温度为20-30℃。
4.根据权利要求1所述的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，对所述反应化合物进行多次水洗，去除水相保留有机相包括：
5.根据权利要求4所述的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，水洗次数为2次，且每次水洗时氯化钠的用量为400-450ml。
6.根据权利要求2所述的n4-ac-c-(s)-gna亚磷酰胺的制备方法，其特征在于，对水洗后的有机相进行过滤、浓缩和结晶，得到n4-ac-...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆阳，朱海生，苗茹，陆林海，
申请(专利权)人：苏州诺维康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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